胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用，其中构建方法包括构建Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠，其Tmem30a基因的一个或多个外显子的两端插入同向排列的loxP位点，以及将该小鼠与胰岛β细胞特异的转基因鼠Ins2‑Cre交配，得到胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因的小鼠模型。该胰岛β细胞Tmem30a基因条件性敲除小鼠表现出葡萄糖不耐受，胰岛素敏感性差，可用作糖尿病研究模型。

【技术实现步骤摘要】
胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用
本专利技术涉及医学工程
，特别涉及一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法及应用。
技术介绍
真核细胞细胞膜上的磷脂分子分布是不对称的。一般情况下磷酸酰丝氨酸(Phosphatidylserine，PS)和磷酸酰乙醇胺(Phosphatidyetholanie，PE)分布在细胞的内膜，磷酸酰胆碱(Phosphatidylcholine，PC)分步在外膜。真核细胞基因组编码14个P4型ATPase内翻酶来维持这种脂质分子的不对称分布。PS和PE在细胞膜上不对称分布对重要细胞生理过程如膜稳定、血液凝聚反应调控、囊泡蛋白运输、清除凋亡细胞都至关重要。ATP8B1,ATP8A2和ATP11C基因突变导致数种人类疾病，揭示了P型ATP酶的重要性。ATP8B1导致I型渐进式家族性肝内胆汁淤积(progressivefamilialintrahepaticcholestasistypeI)和复发型肝内胆汁淤积。ATP8A2突变导致小脑共济失调、智力发育迟缓和平衡缺乏综合症。ATP11C缺失导致B细胞发育缺陷，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将与小鼠Tmem30a基因同源的5’臂、含有报告基因LacZ的表达框、有NEO抗性基因的表达框、两端有同向排列loxP位点的第3外显子和3’端臂克隆到BAC载体以用于替换欲敲除的Tmem30a基因第3个外显子；2)利用DNA同源重组技术将Tmem30a基因中的第3个外显子替换，得到Tmem30a基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3)利用步骤2)得到的胚胎干细胞制备得到含Tmem30a基因敲除细胞的嵌合体小鼠；4)将步骤3)得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出Tmem30a基因敲除的杂合子小...

【技术特征摘要】
1.一种胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：1)将与小鼠Tmem30a基因同源的5’臂、含有报告基因LacZ的表达框、有NEO抗性基因的表达框、两端有同向排列loxP位点的第3外显子和3’端臂克隆到BAC载体以用于替换欲敲除的Tmem30a基因第3个外显子；2)利用DNA同源重组技术将Tmem30a基因中的第3个外显子替换，得到Tmem30a基因条件性敲除的小鼠胚胎干细胞；3)利用步骤2)得到的胚胎干细胞制备得到含Tmem30a基因敲除细胞的嵌合体小鼠；4)将步骤3)得到的嵌合体小鼠和野生型小鼠交配繁育，在后代中筛选出Tmem30a基因敲除的杂合子小鼠；5)将步骤4)得到的杂合子小鼠动物与转基因鼠FLPer鼠交配繁育，得到Tmem30a基因条件性敲除杂合子小鼠；6)将步骤5)得到的Tmem30a基因条件性敲除杂合子小鼠相互交配繁育，得到Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠；7)将步骤6)得到的Tmem30a基因条件性敲除纯合子小鼠与胰岛β细胞特异的转基因鼠Ins2-Cre交配，得到胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠Tmem30aloxp/loxp，Ins2-Cre。2.根据权利要求1所述的胰岛β细胞条件性敲除Tmem30a基因小鼠模型的构建方法，其特征在于，步骤2)中，利用Tmem30a敲除的打靶载体Tmem30atm1a(KOMP)Wtsi转染小鼠胚胎干细胞，获得含有打靶序列的胚胎干细胞；所述打靶载体有如下特征：5’端长臂为4201bp；3’端端长臂为5123bp；在Tmem30a第二个内含子内放置有En2剪接接受位点，IRES后面是LacZ基因表明序列，ployA序列；Loxp位点后是人βactin启动子和新霉素(Neomysin)编码序列，以便药物筛选；另外有两个FRT位点在两端，以便使用FLP工具...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱献军，
申请(专利权)人：朱献军，
类型：发明
国别省市：四川,51