一种过表达ZEB2基因质粒及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种过表达ZEB2基因质粒，由ZEB2基因CDS序列与pEGFP‑C2真核表达载体的重组构建而成；其核苷酸如序列表SEQ ID NO:1，位于ZEB2基因的第134‑3778位；氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。本发明专利技术还公开了一种过表达ZEB2基因质粒的构建方法和应用。本发明专利技术的优点在于：(1)有助于研究ZEB2基因功能，并且为研究其对炎症在AKI病程中的作用提供了有用分子生物学工具；(2)为进一步研究ZEB2的功能，以及AKI的基因治疗奠定了基础。

Overexpression ZEB2 gene plasmid and construction method and application thereof

The invention discloses a over expression plasmid of ZEB2 gene, ZEB2 gene by CDS sequence and pEGFP C2 recombinant eukaryotic expression vector constructed; the nucleotide sequence list such as SEQ ID NO:1, located in the ZEB2 gene of 134th 3778; the amino acid sequence shown in a sequence table SEQ ID NO:2. The invention also discloses a method for constructing an over expression ZEB2 gene plasmid and an application thereof. The invention has the advantages that: (1) contribute to the study of the function of ZEB2 gene, and to study the molecular biology provides a useful tool for the role of inflammation in the course of AKI; (2) to study the function of ZEB2, and laid the foundation for AKI gene therapy.

【技术实现步骤摘要】
一种过表达ZEB2基因质粒及其构建方法和应用
本专利技术涉及生物工程
，尤其涉及一种过表达ZEB2基因质粒及其构建方法和应用。
技术介绍
急性肾损伤(acutekidneyinjury，AKI)是临床各科室最常见的急危重症之一，可由多种原因引起，有关AKI的发生机制一直是肾脏病领域关注的重要科学问题。目前认为，AKI也是一种炎症反应介导的疾病，但缺血再灌注启动肾组织炎症反应的机制尚不完全清楚。从轻微血肌酐升高到严重无尿性AKI，AKI程度和临床表现不一而足，AKI与患者病死率、慢性肾脏病(CKD)的发生以及维持性透析率密切相关。流行病调查数据显示，AKI发病率逐年增高，已由1988年的610例(每百万人)增加至2009年的2888例(每百万人)，在普通住院患者中AKI发病率为3％-5％，而在ICU中更高达30％-50％；同时对于AKI的预后及转归较以往有了更加深入的认识。因此，如何防治AKI的发生、发展以及寻找有效的治疗AKI的手段和药物显得尤为重要。基因工程，又称为基因重组技术，是二十世纪七十年代发展起来的在体外对DNA进行操作的一门技术，广泛用于疾病基础研究、基因治疗、基因本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种过表达ZEB2基因质粒，其特征在于，由ZEB2基因CDS序列与pEGFP‑C2真核表达载体的重组构建而成；其核苷酸如序列表SEQ ID NO:1，位于ZEB2基因的第134‑3778位；氨基酸序列如序列表SEQ ID NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种过表达ZEB2基因质粒，其特征在于，由ZEB2基因CDS序列与pEGFP-C2真核表达载体的重组构建而成；其核苷酸如序列表SEQIDNO:1，位于ZEB2基因的第134-3778位；氨基酸序列如序列表SEQIDNO:2所示。2.一种构建如权利要求1所述的过表达ZEB2基因质粒的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)裂解HK-2细胞，提取RNA进行逆转录得到ZEB2cDNA；(2)PCR扩增出人工ZEB2基因的CDS序列片段；(3)ZEB2基因的CDS序列片段的纯化；(4)对所获得的基因片段和pEGFP-C2真核表达载体进行BamHI和XbaI双酶切，并进行连接；(5)将连接产物转化至大肠杆菌TG1中，并挑去阳性克隆进行培养，然后抽提质粒。3.根据权利要求2所述的过表达ZEB2基因质粒的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中提取RNA后，对其进行变性处理，具体步骤为：将RNA在65℃中放置5-10min后，转移至冰水中放置。4.根据权利要求2所述的过表达ZEB2基因质粒的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中逆转录反应依照RTMasterMix逆转录试剂盒的产品说明书进行，逆转录的反应体系包括：5×RTMasterMix、RNA、Nuclease-freeWater；具体步骤如下：(1)配制反应体系：5×RTMasterMix2μL+RNA2μL+Nuclease-freeWater6μL；(2)将上述反应体系放置37℃，并作用15min；(3)将上述反应体系转移至50℃，并作用5min；(4)将上述反应体系转移至98℃，并作用5min；(5)将上述反应体系转移至4℃，冷却后冻存，即得到cDNA。5.根据权利要求2所述的过表达ZEB2基因质粒的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增CDS序列片段时所需的上、下游引物序列如下：上游引物：ZEB2-F:5’-GGGGTACCCCATGAAGCAGCCGATCAT-3’下游引物：ZEB2-R:5’-GCTCTAGAGCTCACATGCCATCTTCC-3’。6.根据权利要求2所述的过表达ZEB2基因质粒的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中PCR扩增反应根据PrimeSTARMax扩增酶产品说明书进行，PCR的反应体系包括：2×PrimeSTARMax、cDNA样品、上下游引物、高纯...

【专利技术属性】
技术研发人员：张磊，徐涛，王啸，潘林鑫，丁琪，汪洋，
申请(专利权)人：安徽医科大学，
类型：发明
国别省市：安徽,34