用于细胞转染和蛋白生产的新型选择性标记物制造技术

本发明专利技术属于工业蛋白生产领域。本发明专利技术提供使用二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)作为选择性标记物与来氟米特或其代谢物组合的新型表达系统，其尤其可用于在哺乳动物细胞系中使用。还提供编码DHODH的表达载体、包含所述载体的细胞系和生产重组蛋白的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于细胞转染和蛋白生产的新型选择性标记物专利
本专利技术属于工业蛋白生产领域。本专利技术提供使用二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)作为选择性标记物与DHODH抑制剂(特别是特立氟胺)组合的新型表达系统，其尤其可用于在哺乳动物细胞系中使用。还提供编码DHODH的表达载体、包含所述载体的细胞系和生产重组蛋白的方法。专利技术背景以工业规模生产重组蛋白需要分离产生大量重组蛋白的克隆。将异源基因引入动物宿主细胞并对所添加的基因的表达进行筛选是长期和复杂的过程。该过程涉及转染和对具有稳定的长期表达的克隆进行选择，和对对于相应的重组蛋白具有高表达率的克隆进行筛选。当生成从表达载体表达重组蛋白的克隆时，经常使用在相同载体上编码感兴趣的蛋白和选择性标记物二者的DNA载体转染宿主细胞。这样的表达载体因此包含允许对其中存在表达载体的克隆进行选择的可选择标记物。这样的可选择标记物还可导致转染的DNA的共扩增，由此允许高生产克隆的分离。大多数可选择标记物为对抗生素或其他毒性物质赋予抗性的蛋白或对细胞生存至关重要的蛋白。本领域已知数种这样的可选择标记物，包括例如G418、潮霉素、嘌呤霉素、博莱霉素、二氢叶酸还原本文档来自技高网...

【技术保护点】
表达载体，其包含编码哺乳动物二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)的核苷酸序列和至少一个用于表达重组蛋白的表达盒，其中所述DHODH包含与SEQ ID NO:2的序列或与SEQ ID NO:4的序列至少90％相同的序列。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.10.23 EP 14306689.21.表达载体，其包含编码哺乳动物二氢乳清酸脱氢酶(DHODH)的核苷酸序列和至少一个用于表达重组蛋白的表达盒，其中所述DHODH包含与SEQIDNO:2的序列或与SEQIDNO:4的序列至少90％相同的序列。2.根据权利要求1的表达载体，其中所述DHODH对至少一种DHODH抑制剂敏感。3.根据权利要求1-2任一项的表达载体，其中所述核苷酸序列包含SEQIDNO:1的序列或SEQIDNO:3的序列。4.根据权利要求1-3任一项的表达载体，其中所述重组蛋白是单克隆抗体。5.根据权利要求1-4任一项的表达载体，其中所述载体包含适于抗体轻链克隆的第一表达盒和适于抗体重链克隆的第二表达盒。6.根据权利要求1-5任一项的表达载体，其中所述DHODH对特立氟胺敏感。7.包含根据权利要求1-6任一项的表达载体的细胞系。8.根据权利要求7的细胞系，其为中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系或人细胞系。9.包含根据权利要求1-6任一项的表达载体的表达系统。10.根据权利要求9的表达系统，其进一步包含根据权利要求7或权利要求8的细胞系。11.根据权利要求10的表达系统，其进一步包含至少一种DHODH抑制剂。12.根据权利要求11的表达系统，其中所述至少一种DHODH抑制剂是特立氟胺。13.根据权利要求10-12任一项的表达系统，其中当所述细胞系是CHO细胞系时，由包含在所述表达载体中的编...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·杜马斯，N·劳尼斯，
申请(专利权)人：赛诺菲，
类型：发明
国别省市：法国,FR