共同轻链小鼠制造技术

本发明专利技术提供遗传修饰的小鼠，其中所述小鼠表达特征为有限的轻链可变区的免疫球蛋白轻链群。本发明专利技术提供小鼠，其从它们生殖系中有限群表达只有一个或几个免疫球蛋白轻链可变区。本发明专利技术提供在小鼠中制备轻链可变区的方法，包括人轻链可变区。本发明专利技术提供制备适用于多特异性结合蛋白(例如双特异性抗体)的人可变区的方法。

Common light chain mice

The present invention provides genetically modified mice wherein the mouse expresses a light chain group of immunoglobulin light characterized by limited light chain variable regions. The present invention provides mice with limited populations expressing only one or a few immunoglobulin light chain variable regions from their germline. The present invention provides a method for preparing light chain variable regions in mice, comprising a light chain variable region of human beings. The invention provides a preparation for multispecific binding proteins (e.g. bispecific antibody) method of the variable region.

【技术实现步骤摘要】
共同轻链小鼠本申请是申请日为2013年3月5日、申请号为201380012671.3的同名申请的分案申请。
本专利技术提供一种遗传修饰小鼠，其表达具有与不同的人可变/小鼠恒定重链缔合的共同人可变/小鼠恒定轻链的抗体。本专利技术提供一种从小鼠的B细胞的人可变区基因序列制备人双特异性抗体的方法。
技术介绍
抗体通常包括同源二聚化重链组分，其中每条重链单体与相同的轻链相缔合。期望具有异源二聚化组分的抗体(例如，双特异性抗体)作为治疗性抗体。但制备具有可以令人满意地与双特异性抗体的每条重链缔合的合适轻链组分已被证明是存在问题的。在一个方法中，轻链可以通过调查所有轻链可变区使用的统计数据、鉴定人抗体中最常用的轻链并在体外将轻链与具有不同特异性的两条重链配对来选择。在另一个方法中，轻链可以通过观察噬菌体展示文库(例如包括人轻链可变区序列的噬菌体展示文库，例如，人scFv文库)中的轻链序列并从所述文库中选择最常用的轻链可变区来选择。然后，所述轻链可以在所感兴趣的两条不同重链上测试。在另一个方法中，轻链可以通过采用感兴趣的两条重链的重链可变序列作为探针分析轻链可变序列的噬菌体展示文库来选择。与两条重链可变序列均相缔合的轻链可以选作所述重链的轻链。在另一个方法中，候选轻链可以与重链的关联(cognate)轻链比对，并且对轻链作出修饰以更加接近地匹配两条重链的关联轻链通用的序列特征。如果需要将免疫原性的机率最小化，所述修饰优选得到已知存在于人轻链序列中的序列，使得基于本领域已知用于评估免疫原性的可能性的参数和方法蛋白水解处理不太可能产生T细胞表位(即，计算机分析以及湿法分析(wetassays))。上述所有方法依赖于包含许多先验限制的体外方法，所述先验限制例如，序列同一性、与特定预先选择的重链相缔合的能力，等等。本领域需要不依赖于操作体外条件而是采用更加生物学上可行的方法来制备包括共同轻链的人表位结合蛋白的组合物和方法。专利技术概述本专利技术提供表达人免疫球蛋白重链和轻链可变区的遗传修饰小鼠，其中所述小鼠具有有限的轻链可变群(repertoire)。本专利技术提供一种产生人轻链可变区的生物系统，所述人轻链可变区与不同群的亲和力成熟的人重链可变区缔合并与其一起表达。本专利技术提供制备包括免疫球蛋白可变区的结合蛋白的方法，包括用感兴趣的抗原免疫具有有限的免疫球蛋白轻链群的小鼠，以及将小鼠的免疫球蛋白可变区基因序列应用于特异性结合感兴趣的抗原的结合蛋白中。方法包括用于制备适用于制备多特异性抗原结合蛋白的人免疫球蛋白重链可变区的方法。本专利技术提供遗传工程小鼠，其选择源自一群未重排的人重链可变区基因片段的合适的亲和力成熟的人免疫球蛋白重链可变区，其中所述亲和力成熟的人免疫球蛋白重链可变区缔合源自一种人轻链可变区基因片段的单一人轻链可变区(singlehumanlightchainvariabledomain)并与其一起表达。本专利技术还提供遗传工程小鼠，其提出了两种人轻链可变区基因片段的选择。本专利技术提供遗传工程小鼠，其从有限群的人轻链可变区基因片段表达有限群的人轻链可变区，或单一人轻链可变区。所述小鼠遗传工程化以包括单一未重排的人轻链可变区基因片段(或两种人轻链可变区基因片段)，其表达单一轻链(或表达两种轻链之一或二者)的重排以形成重排的人轻链可变区基因(或两种重排轻链可变区基因)。所述重排的人轻链可变区能够与由所述小鼠所选出的大量亲和力成熟的人重链配对，其中所述重链可变区特异性结合不同表位。本专利技术提供遗传工程小鼠，其从有限群的人轻链可变区序列表达有限群的人轻链可变区，或单一人轻链可变区。所述小鼠遗传工程化以包括单一的V/J人轻链序列(或两条V/J序列)，其表达单一轻链可变区(或其表达两种可变区之一或二者)。包括所述可变序列的轻链能够与由所述小鼠所克隆选出的大量亲和力成熟的人重链配对，其中所述重链可变区特异性结合不同表位。在一个方面，本专利技术提供一种遗传修饰的小鼠，其包括能够与人J基因片段(从一个或大量JL片段选择)重排并编码免疫球蛋白轻链的人VL区的单一人免疫球蛋白轻链可变(VL)区基因片段。在另一个方面，所述小鼠包括不多于两种人VL基因片段，其每一个能够与人J基因片段(从一个或大量JL片段选择)重排并编码免疫球蛋白轻链的人VL区。在一个实施方案中，所述单一人VL基因片段可操作性连接选自Jκ1、Jκ2、Jκ3、Jκ4和Jκ5的人JL片段，其中所述单一人VL基因片段能够与所述一种或多种人JL片段的任何一个重排以形成编码轻链可变区基因的序列。在一个实施方案中，所述遗传修饰的小鼠包括免疫球蛋白轻链基因座(locus)，其不包括能够重排以形成免疫球蛋白轻链基因的内源性小鼠VL基因，其中所述VL基因座包括能够重排以编码轻链基因的VL区的单一人VL基因片段。在一个具体的实施方案中，所述人VL基因片段是人Vκ1-39Jκ5基因片段或人Vκ3-20Jκ1基因片段。在一个实施方案中，所述遗传修饰的小鼠包括VL基因座，其不包括能够重排以形成免疫球蛋白轻链基因的内源性小鼠VL基因，其中所述VL基因座包括能够重排以编码轻链基因的VL区的不多于两种人VL基因片段。在一个具体的实施方案中，所述不多于两种人VL基因片段是人Vκ1-39Jκ5基因片段和人Vκ3-20Jκ1基因片段。在一个方面，本专利技术提供一种遗传修饰的小鼠，其包括编码人免疫球蛋白轻链的VL区的单一重排(V/J)人免疫球蛋白轻链可变(VL)区(即VL/JL区)。在另一个方面，所述小鼠包括能够编码人免疫球蛋白轻链的VL区的不多于两种重排的人VL区。在一个实施方案中，所述VL区是重排的人Vκ1-39/J序列或重排的人Vκ3-20/J序列。在一个实施方案中，所述重排的人VL/JL序列的JL片段选自Jκ1、Jκ2、Jκ3、Jκ4和Jκ5。在一个具体的实施方案中，所述VL区是人Vκ1-39Jκ5序列或人Vκ3-20Jκ1序列。在一个具体的实施方案中，所述小鼠具有人Vκ1-39Jκ5序列和人Vκ3-20Jκ1序列。在一个实施方案中，所述人VL基因片段可操作性连接人或小鼠前导序列。在一个实施方案中，所述前导序列是小鼠前导序列。在一个具体的实施方案中，所述小鼠前导序列是小鼠Vκ3-7前导序列。在一个具体的实施方案中，所述前导序列可操作性连接未重排的人VL基因片段。在一个具体的实施方案中，所述前导序列可操作性连接重排的人VL/JL序列。在一个实施方案中，所述VL基因片段可操作性连接免疫球蛋白启动子序列。在一个实施方案中，所述启动子序列是人启动子序列。在一个具体的实施方案中，所述人启动子序列是人Vκ3-15启动子。在一个具体的实施方案中，所述启动子可操作性连接未重排的人VL基因片段。在一个具体的实施方案中，所述启动子可操作性连接重排的人VL/JL序列。在一个实施方案中，所述轻链基因座包括5’侧接(相对于VL基因片段的转录方向)人免疫球蛋白启动子并3’侧接人VL基因片段的前导序列，所述人VL基因片段与人J片段重排并编码包括内源性小鼠轻链恒定区(CL)的反向嵌合轻链的VL区。在一个具体的实施方案中，所述VL基因片段位于小鼠Vκ基因座，并且所述小鼠CL是小鼠Cκ。在一个实施方案中，所述轻链基因座包括5’侧接(相对于VL基因片段的转录方向本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种响应抗原挑战表达一群抗原特异性抗体的小鼠，其中所述一群抗原特异性抗体的所有免疫球蛋白轻链包括源自相同的单一人VL基因片段的人轻链可变(VL)区以及免疫球蛋白重链包括源自人VH基因片段的人重链可变(VH)区，所述人VH基因片段选自VH1‑2、VH1‑3、VH1‑8、VH1‑18、VH1‑24、VH1‑46、VH1‑58、VH1‑69、VH2‑5、VH2‑26、VH2‑70、VH3‑7、VH3‑9、VH3‑11、VH3‑13、VH3‑15、VH3‑20、VH3‑21、VH3‑23、VH3‑30、VH3‑33、VH3‑43、VH3‑48、VH3‑53、VH3‑64、VH3‑72、VH3‑73、VH4‑31、VH4‑34、VH4‑39、VH4‑59、VH5‑51、VH6‑1。

【技术特征摘要】
2012.03.06 US 13/412,9361.一种响应抗原挑战表达一群抗原特异性抗体的小鼠，其中所述一群抗原特异性抗体的所有免疫球蛋白轻链包括源自相同的单一人VL基因片段的人轻链可变(VL)区以及免疫球蛋白重链包括源自人VH基因片段的人重链可变(VH)区，所述人VH基因片段选自VH1-2、VH1-3、VH1-8、VH1-18、VH1-...

【专利技术属性】
技术研发人员：R·巴布，J·麦克沃特，L·麦克唐纳，S·史蒂文斯，S·戴维斯，D·R·巴克勒，K·A·马尔，A·J·莫菲，
申请(专利权)人：瑞泽恩制药公司，
类型：发明
国别省市：美国,US