抗菌肽PR39和PG1共表达载体和转PR39和PG1基因小鼠制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗菌肽PR39和PG1共表达载体和转PR39和PG1的转基因小鼠制备方法。该抗菌肽PR39和PG1共表达载体包括PR39和PG1共表达控制系统及筛选基因EGFP表达控制系统。并将该PR39和PG1共表达载体显微注射小鼠受精卵中，获得转PR39和PG1基因小鼠，该转基因小鼠共表达PR39和PG1抗菌肽，可自身抵抗革兰氏阴性菌等大部分细菌和真菌的侵害，减少抗生素的使用，也为获得转PR39和PG1共表达基因的牲畜奠定了基础。若牲畜可自身同时表达PR39和PG1抗菌肽，将大大较少抗生素的使用，为解决抗生素滥用和解决食品安全提供了可能。

Antibacterial peptide PR39 and PG1 co expression vector and method for preparing transgenic PR39 and PG1 gene mice

The invention discloses an antibacterial peptide PR39 and PG1 co expression vector and a transgenic mouse preparation method for transferring PR39 and PG1. The antibacterial peptide PR39 and PG1 coexpression vectors include PR39 and PG1 coexpression control system and screening gene EGFP expression control system. The PR39 and PG1 co expression vector of mouse zygotes microinjection, transgenic mice with PG1 gene and PR39, PR39 and PG1 co expression of antimicrobial peptides in the transgenic mice, but its resistance to gram negative bacteria such as most bacteria and fungus, reduce the use of antibiotics, but also lay a foundation for obtaining PR39 and PG1 Co expression gene of cattle. If animals can express both PR39 and PG1 antimicrobial peptides at their own time, they will greatly reduce the use of antibiotics and provide the possibility to solve the abuse of antibiotics and to solve food safety problems.

【技术实现步骤摘要】
抗菌肽PR39和PG1共表达载体和转PR39和PG1基因小鼠制备方法
本专利技术涉及基因工程领域，特别涉及PR39和PG1共表达载体及其构建方法，转PR39和PG1基因小鼠制备方法。
技术介绍
我国是肉猪生产和消费大国，但养猪业中疾病多发，这严重制约了我国养猪业的发展。抗生素由于具有预防、治疗疾病和促进动物体生长等作用，它常以饲料添加剂和兽药等形式被广泛使用于畜牧养殖业。据估计，近年来在动物身上使用的抗生素超过了全球总抗生素使用量的一半。有研究表明畜牧动物是人类耐药性病原体的一个重要来源。由于抗生素的长期滥用导致耐药性致病菌的产生和畜禽体内药物的残留，严重威胁着人和动物的健康。因此，人们正努力寻找高效、安全、不易残留、又不易使细菌产生耐药性的新型抗菌药物来替代或减少抗生素的使用。抗菌肽目前被公认为最具潜力的抗生素替代品。它与传统的抗生素相比，在产生药物残留和耐药性方面具有很大的优势。首先，抗菌肽作为一种小分子多肽，容易降解，因此不易在畜牧动物体内残留，保障了人类食品安全；其次，传统抗生素主要是通过与细菌体内的受体或靶位点结合来发挥抑菌作用的，而抗生素的受体和靶位类型是很有限的，细菌容本文档来自技高网...

【技术保护点】
抗菌肽PR39和PG1共表达载体，其特征在于，所述抗菌肽PR39和PG1共表达载体的基因序列号为SEQ ID NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.抗菌肽PR39和PG1共表达载体，其特征在于，所述抗菌肽PR39和PG1共表达载体的基因序列号为SEQIDNO:2所示。2.根据权利要求1所述的抗菌肽PR39和PG1共表达载体，其特征在于，所述的抗菌肽PR39和PG1共表达载体含有CMV启动子和SV40启动子，所述CMV启动子单独调控PR39和PG1两个抗菌肽基因的共表达，所述SV40启动子单独调控EGFP基因的表达。3.抗菌肽PR39和PG1共表达载体的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、根据PR39和PG1基因的CDS序列，设计好基因片段的排列顺序为EcoRI-Kozak-PR39-T2A-PG1-SV40pA-XbaI，并将该基因序列进行人工合成，序列号为SEQIDNO:1所示；(2)、将步骤(1)合成的人工基因序列与真核表达载体pCMS-EGFP经过酶切、纯化、连接、转化感受态细胞，培养后挑选单克隆菌落进行扩大培养，筛选阳性克隆，酶切鉴定，得到PR39和PG1共表达载体pCMS-PR39-T2A-PG1-EGFP，基因序列号为SEQIDNO:2所示。4.转PR39和PG1基因小鼠的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、将权利要求3所述的获得的PR39和PG1共表达载体pCMS-PR39-T2A-PG1-EGFP进行转化，提取质粒；(2)、对提取的PR39和PG1共表达载体pCMS-PR39-T2A-PG1-EGFP进行酶切鉴定；(3)、PR39和PG1共表达载体pCMS-PR39-T2A-PG1-EGFP转染293细胞进行qPCR检测、ELISA检测和抑菌效果检测；(4)、经鉴定的PR39和PG1共表达载体pCMS-PR39-T2A-PG1-EGFP线性化后，显微注射到小鼠受精卵后移植到代孕母鼠输卵管中，经过妊娠得到转基因小鼠。5.根据权利要求4所述的转PR39和PG1基因小鼠的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李紫聪，黄晓灵，吴珍芳，刘德武，蔡更元，郑恩琴，
申请(专利权)人：华南农业大学，
类型：发明
国别省市：广东,44