一种制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法技术

本发明专利技术公开了一种制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法，属于生物技术领域。所述抗氧化功能饮品为蜂毒肽溶液与蜂胶黄酮溶液的复合配置，蜂毒肽为从蜂毒中分离纯化得来的多肽，蜂胶黄酮为从蜂胶中提取的活性物质，采用葡聚糖凝胶色谱、高速粉碎，结合离心、温浸提取的方法，获得蜂毒肽溶液和蜂胶黄酮溶液。本发明专利技术的抗氧化的功能型食品，具有良好的抗氧化作用，且不易变质，因而可以长久存放。饮用本发明专利技术所制备的抗氧化功能型食品，能够减缓人体衰老并提高机体免疫力。

Method for preparing bee milk peptide drink with antioxidation function

The invention discloses a method for preparing a bee peptide drink with antioxidation function, belonging to the technical field of biology. The antioxidant function of drinks for the composite configuration of melittin solution and propolis flavonoids solution, melittin for separation of peptide purification come from bee venom, propolis flavonoids as active substances extracted from propolis, by Sephadex gel chromatography and high-speed grinding method combined with centrifugal extraction, Wen Jin, obtained melittin solution and propolis flavonoids solution. The antioxidant functional food of the invention has good antioxidation function and is not easy to be deteriorated, so it can be stored for a long time. The antioxidant functional food prepared by the invention can slow the aging of the human body and improve the immunity of the organism.

【技术实现步骤摘要】
一种制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法
本专利技术涉及一种制备具有抗氧化功能饮品的方法，属于生物

技术介绍
随着生活水平的提高，具有抗氧化功能的食品需求与日俱增，利用各种抗氧化产品来清除体内产生的自由基，可以达到减缓身体的衰老，达到健康养生的目的。蜂胶是工蜂采集植物树脂等分泌物与其上颚腺、蜡腺等分泌物混合形成的胶黏性物质，含有多种天然有效活性物质，如黄酮、酚酸类及萜烯类物质等，具有抗氧化、抗菌、抗病毒、抗癌、增强免疫力等多种作用，因其具有抑菌性、防腐性等优点，现已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。蜂毒肽是蜂毒的主要成分，约占蜂毒干重的50%，具有抗辐射、抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤等作用，在药品和化妆品等领域有一定的应用。蜂胶黄酮是从蜂胶原胶中提取得来的，具有易提取、周期短等特点，蜂毒肽是从蜂毒中分离纯化得来的，具有易制备、低量高效等特点，两者结合可以研制开发出机体抗氧化等产品，具有很大的市场开发前景，因而引起了学术界广泛的关注。抗氧化产品的制备，可用提取法和合成法，人工合成的抗氧化产品具有一定的副作用，会威胁人体健康。Mouhoubi-Tafinine和Yong（1.Mouhoubi-Tafinine,Z.,etal.,Antioxydantactivityofsomealgerianhoneyandpropolis[J].IndustrialCrops&Products,2016,88:85-90.2.Yong,K.P.andM.Ikegaki,PreparationofWaterandEthanolicExtractsofPropolisandEvaluationofthePreparations[J].BioscienceBiotechnology&Biochemistry,1998,62(11):2230-2232.）报道了β-胡萝卜素-亚油酸比色法测定蜂胶黄酮的抗氧化活性，证明蜂胶黄酮具有抗氧化的功效。GuoandNascimento（Guo,X.,etal.,ChemicalCompositionsandAntioxidantActivitiesofWaterExtractsofChinesePropolis[J].Biochemistry,2012,59(23):12610-12616.2.TicianoGomesdoNascimento,etal.,PolymericNanoparticlesofBrazilianRedPropolisExtract:Preparation,Characterization,AntioxidantandLeishmanicidalActivity[J].NanoscaleResearchLetters,2016,11:301.）报道了清除DPPH自由基法测定蜂胶黄酮的抗氧化活性，IC50值为38.0μg/mL，但是抗氧化活性较低。曹小燕（曹小燕等,蜂胶中黄酮的提取及其自由基清除活性研究[J].粮油食品科技,2015,23(5):45-49.）报道了清除羟自由基能力测定法和清除氧自由基能力测定法测定蜂胶黄酮的抗氧化活性，0.15mg/mL蜂胶黄酮对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别达到了35%（质量分数）和77.7%（质量分数），但是蜂胶黄酮的抗氧化活性较低，吴珍红（吴珍红等,蜂毒肽对自由基的清除作用[J].中国蜂业,2007,58(5):9-10.）报道了清除羟自由基能力测定法测定蜂毒肽的抗氧化活性，66.7μg/mL的蜂毒肽对羟基自由基的清除率为67.39%（质量分数），但是蜂毒肽对羟基自由基的清除率低，抗氧化活性较低。上述方法只是单一组分的抗氧化，并且抗氧化活性低。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了解决单一成分饮品抗氧化活性低的问题，提供一种抗氧化活性高的功能型饮品。本专利技术获得的浓度为0.2mg/mL蜂毒肽溶液与浓度为0.83mg/mL蜂胶黄酮溶液按照体积比V（蜂毒肽）：V（蜂胶）=1:5进行复配，复配饮品对羟基自由基和超氧阴离子自由基的清除率分别达到了86.31%（质量分数）和94.52%（质量分数）。本专利技术的一种具有抗氧化功能的复配饮品，步骤如下：①蜂胶黄酮溶液的制备将蜂胶放入酒精度为45-75°的白酒中，70-90℃提取1.5-4.5h，共提取1-3次，以2500-5500r/min离心4-8min进行固液分离，得到蜂胶黄酮提取液和蜂胶残渣，用酒精度为45-75°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.5-1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液；所述酒精度为白酒中所含乙醇的体积百分比；所述提取为在水浴锅中温浸提取；所述固液分离为从浸提液中除去蜂胶残渣的过程；所述白酒为食品级。②蜂毒肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱，流速控制在25-30mL/h，测定各分离组分的分子量，在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2840Da的层析组分并冷冻干燥得固体样品，将固体样品用2-4倍体积的无水乙醇进行溶解，经2500-3500r/min离心4-6min，沉淀物质即为蜂毒肽，将蜂毒肽用纯净水配置成浓度为0.1-0.3mg/mL的蜂毒肽溶液；所述葡聚糖凝胶G-25为葡聚糖用英文字母G表示，G反映凝胶的交联程度、膨胀程度及分布范围，25为每克凝胶膨胀时吸水2.5克；所述洗脱为以蒸馏水作为流动相连续通过色谱柱固定相，流动相与固定相作用力比样品弱，样品各组分按先后顺序从固定相洗出；所述Da为蜂毒肽分子量的单位；所述分子量的测定为根据标准品洗脱保留时间T(min)与其相对分子质量对数值(lgMr)标准曲线回归方程，标准品为抗菌肽标准品（Mr=1422Da）、氧化性谷胱甘肽标准品(Mr=612Da)、还原性谷胱甘肽标准品(Mr=307.32Da)；所述冷冻干燥为将所得组分冷冻至水的冰点以下，并置于高真空(10-40Pa)的容器中，通过供热使物料中的水分直接从固态冰升华为水汽的一种干燥方法；所述沉淀为不溶于无水乙醇的固体物质；所述纯净水为食品级。③抗氧化饮品的制备将①中浓度为0.5-1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液与②中浓度为0.1-0.3mg/mL的蜂毒肽溶液按照体积比V（蜂毒肽）：V（蜂胶）=1:3-6进行复配，所得即为具有抗氧化功能的饮品。所述体积比为蜂毒肽溶液与蜂胶黄酮溶液体积的比值；所述复配为蜂毒肽溶液与蜂胶黄酮溶液的混合。采用本方法生产抗氧化的饮品，与现有方法相比抗氧化活性增加15-20%，与现有技术相比较，本专利技术制备抗氧功能饮品的方法，具有以下显著特点：（1）蜂胶具有抗氧化、降低血脂、免疫调节、抗炎杀菌的作用；（2）蜂毒肽具有清除自由基、抗辐射、抗炎杀菌的作用、抗肿瘤的作用；（3）本专利技术获得的饮品抗氧化能力比维生素C高20%左右，是一种良好的具有抗氧化的功能型食品。（4）本专利技术获得的饮品相对于曹小燕、吴珍红（1.曹小燕等,蜂胶中黄酮的提取及其自由基清除活性研究[J].粮油食品科技,2015,23(5):45-49.2.吴珍红等,蜂毒肽对自由基的清除作用[J].中国蜂业,2007,58(5):9-10.）抗氧化活性提高15-20%。实施例1：①蜂胶黄酮溶液的制备将蜂胶放入酒精度为60°的白酒中，80℃提取3h，共提取1次，以50本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法，步骤如下：①蜂胶黄酮溶液的制备将蜂胶放入酒精度为45‑75°的白酒中，70‑90℃提取1.5‑4.5h，共提取1‑3次，以2500‑5500r/min离心4‑8min进行固液分离，得到蜂胶黄酮提取液和蜂胶残渣，用酒精度为45‑75°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.5‑1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液；②蜂毒肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G‑25用蒸馏水洗脱，流速控制在25‑30mL/h，测定各分离组分的分子量，在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2840Da的层析组分并冷冻干燥得固体样品，将固体样品用2‑4倍体积的无水乙醇进行溶解，经2500‑3500r/min离心4‑6min，沉淀物质即为蜂毒肽，将蜂毒肽用纯净水配置成浓度为0.1‑0.3mg/mL的蜂毒肽溶液；③抗氧化饮品的制备将①中浓度为0.5‑1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液与②中浓度为0.1‑0.3mg/mL的蜂毒肽溶液按照体积比V（蜂毒肽）：V（蜂胶）=1:3‑6进行复配，所得即为具有抗氧化功能的饮品。

【技术特征摘要】
1.一种制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法，步骤如下：①蜂胶黄酮溶液的制备将蜂胶放入酒精度为45-75°的白酒中，70-90℃提取1.5-4.5h，共提取1-3次，以2500-5500r/min离心4-8min进行固液分离，得到蜂胶黄酮提取液和蜂胶残渣，用酒精度为45-75°的白酒将蜂胶黄酮提取液配置成浓度为0.5-1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液；②蜂毒肽溶液的制备将蜂毒经葡聚糖凝胶G-25用蒸馏水洗脱，流速控制在25-30mL/h，测定各分离组分的分子量，在葡聚糖凝胶柱下收集分子量为2840Da的层析组分并冷冻干燥得固体样品，将固体样品用2-4倍体积的无水乙醇进行溶解，经2500-3500r/min离心4-6min，沉淀物质即为蜂毒肽，将蜂毒肽用纯净水配置成浓度为0.1-0.3mg/mL的蜂毒肽溶液；③抗氧化饮品的制备将①中浓度为0.5-1.0mg/mL的蜂胶黄酮溶液与②中浓度为0.1-0.3mg/mL的蜂毒肽溶液按照体积比V（蜂毒肽）：V（蜂胶）=1:3-6进行复配，所得即为具有抗氧化功能的饮品。2.如权利要求1所述的制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法，酒精度为白酒中所含食品级乙醇的体积百分比。3.如权利要求1所述的制备具有抗氧化功能蜜蜂肽饮品的方法，提取为在水浴锅中温浸提取。4.如权...

【专利技术属性】
技术研发人员：王元秀，孙敏，丁良，
申请(专利权)人：济南大学，
类型：发明
国别省市：山东,37