一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法。癌胚抗原检测试剂盒，包括：第一适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；第二适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段构成；链霉亲和素包被的磁珠；KCl溶液、氯化血红素溶液、反应缓冲液、显色液、终止反应液。本发明专利技术所述试剂盒对癌胚抗原进行检测，较现有检测方法，无需动物免疫抗体和酶标记过程，核酸适体为化学方法合成，稳定性和环境耐受性更好，且试剂保存更为方便，定量检测仅需要一台可见分光光度计即可。

【技术实现步骤摘要】
一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法
本专利技术涉及一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒及其制备方法，具体涉及一种磁珠分离技术联合核酸适体特异性捕集和自催化作用比色检测癌胚抗原的试剂盒，属于肿瘤标志物检测

技术介绍
癌症是当今医学领域的顽症之一，其严重威胁人类的身体健康，随着人类生存环境的恶化，这种威胁呈上升趋势。据世界卫生组织统计，早期癌症的治愈率可达80％，但大多数恶性肿瘤在疾病早期缺乏特异性的临床表现，且临床上传统的诊断方法如影像学、细胞学检查等方法灵敏度不够高，再者在医疗资源匮乏的地区精密诊断仪器尚难以普及，故大多数癌症患者确诊时已为中晚期，只有约10％的病人具有手术切除的条件，难以挽救更多人的生命。因此，恶性肿瘤的早期发现，早期诊断和治疗仍是迄今为止治疗恶性肿瘤最为有效的手段之一，而癌症的早期诊断最新、最有效的方法是通过血液检查，寻找肿瘤标志物。肿瘤标志物是指在恶性肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞的基因表达而合成分泌的或是由机体对肿瘤反应而异常产生或升高的反应肿瘤存在或者生长的一类物质，包括胚胎抗原类、糖链抗原类、激素、酶、蛋白质类本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒，包括：第一适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；第二适体由核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的核苷酸片段构成；链霉亲和素包被的磁珠；0.2～1.0mol/L的KCl溶液，体积为5～30μL；5～10μmol/L的氯化血红素溶液，体积为1～5μL。反应缓冲液、显色液、终止反应液。

【技术特征摘要】
1.一种基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒，包括：第一适体由核苷酸序列如SEQIDNO.1所示的核苷酸片段的3’端通过羟基结合一个生物素构成；第二适体由核苷酸序列如SEQIDNO.2所示的核苷酸片段构成；链霉亲和素包被的磁珠；0.2～1.0mol/L的KCl溶液，体积为5～30μL；5～10μmol/L的氯化血红素溶液，体积为1～5μL。反应缓冲液、显色液、终止反应液。2.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第一适体的反应浓度为1～5μmol/L，体积为5～30μL。3.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述第二适体的反应浓度为1～5μmol/L，体积为5～30μL。4.如权利要求1所述的癌胚抗原检测试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素包被的磁珠浓度为2～10mg/mL，用量为2～10μg；优选的，所述反应缓冲液为pH7.2～7.4的磷酸盐缓冲溶液，体积为30～40μL；优选的，所述终止反应液为浓度为0.5～2mol/L的H2SO4溶液，体积为40～100μL；优选的，所述显色液为浓度为0.1～0.3mg/mL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)溶液，体积为50～100μL。5.权利要求1所述基于核酸适体自催化作用的癌胚抗原检测试剂盒的制备方法，步骤如下：(1)化学合成第一适体，用0.01mol/L，pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至100μmol/L，振荡混合5～10分钟，再逐级稀释至1～5μmol/L；(2)化学合成第二适体，用0.01mol/L，pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液稀释至100μmol/L，振荡混合5～10分钟，再逐级稀释至1～5μmol/L；(3)配制浓度为0.2～1.0mol/L的KCl溶液、浓度为5～10μmol/L的氯化血红素溶液、反应缓冲液、显色液、终止反应液，用0.01mol/L、pH7.2～7.4磷酸盐缓冲溶液配制链霉亲和素包被的磁珠；(4)对步骤(1)第一适体、步骤(2)制...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹明静，
申请(专利权)人：菏泽医学专科学校，
类型：发明
国别省市：山东,37