Goldimmunochromatography assay for aptamer detection of tetracycline based on colloidal gold and aptamer binding specificity and tetracycline with DNA and aptamer binding ability, which comprises the following steps: synthesis of colloidal gold nanoparticles for marking aptamer; colloidal gold and aptamer assembly and streptavidin coupling; affinity assembly and DNA chain peptide; pretreatment of sample pad and gold labeled pad; NC film scribing; strip assembly; detection of tetracycline standard; selectivity and specificity experiments; using aptamer colloidal gold test strip determination of tetracycline in actual samples based on the established. The method provides a tetracycline detection method which has better selectivity and sensitivity, is simple, economical and easy to operate and is more suitable for rapid on-site detection.
【技术实现步骤摘要】
基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素
基于核酸适配体(aptamer)的胶体金(AuNPs)层析试纸条检测四环素(TET),属于分析化学
技术介绍
四环素类抗生素作为一种广谱抗生素被广泛地用来控制细菌感染,在动物疾病的治疗中发挥着举足轻重的作用。其中,四环素因高效性、广谱性和低成本性等特点,已成为应用最为普遍的一类抗生素。四环素不仅作为药物广泛地应用于人类与动物疾病的预防与治疗,同时也作为饲料添加剂被大量地使用,用于提高饲料利用效率和促进动物生长。然而,四环素化学性质相对稳定,且具有一定的持久性,造成了其在环境中的残留,大量研究证实了四环素广泛存在于土壤和生态水中。不仅如此,在动物饲料中过度和不适当的添加会造成四环素或其降解产物高水平的残留与累积在动物源性食品中,如牛奶、肉类、鱼类和鸡蛋。当人们摄入带有四环素残留的这些食物,可能会造成牙齿发黄,机体耐药性增强、过敏反应、胃肠道紊乱以及肝损伤,严重威胁人体健康。因此,为保障人体健康,许多国际组织规定了四环素在食品中的最大残留限量(MRL),如美国食品药品管理局、欧盟和联合国食品法典委员会限定牛奶中四环素的MRL分别为900nM、225nM和100μg/Kg。而我国农业部允许四环素在牛奶中的MRL为100ng/mL。目前,四环素的常用检测方法是色谱分析方法,如毛细管电泳法、高效液相色谱法、液相色谱—质谱联用法等,这些方法大多需要漫长而复杂的分析过程、昂贵的仪器以及专业人员的操作,并不适合于现场快速检测。另一种常用的检测方法是酶联免疫吸附法,虽然其检测灵敏度较高,但是选择性差,且费用较为昂贵。因此 ...
【技术保护点】
基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素,其特征在于利用胶体金与核酸适配体的特异性结合以及四环素与DNA间与核酸适配体结合能力的强弱,包括以下步骤:建立基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素;测定所建立的胶体金层析试纸条对四环素的选择性;运用所建立的胶体金层析试纸条测定实际样品中的四环素。
【技术特征摘要】
1.基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素,其特征在于利用胶体金与核酸适配体的特异性结合以及四环素与DNA间与核酸适配体结合能力的强弱,包括以下步骤:建立基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素;测定所建立的胶体金层析试纸条对四环素的选择性;运用所建立的胶体金层析试纸条测定实际样品中的四环素。2.如权利要求1所述的方法,其中建立基于核酸适配体的胶体金层析试纸条检测四环素的步骤如下:用改进的Frens方法制备胶体金纳米粒子,并用UV-2550紫外分光光度计测吸光度推测其粒径,约13nm;胶体金纳米粒子与核酸适配体组装偶联;DNA1/2都用链霉亲和素修饰;样品垫用前处理液浸泡、金标垫用特制处理液浸泡后铺设金标适配子、DNA1/2划线于NC膜的检测线与控制线位置;上述三者37℃烘干后拼贴到试纸条底板上并切割成小条,与卡壳组装成型;四环素标准溶液500μg/mL滴至样品垫部位,在迁移过程中控制线出现明显红色,检测线颜色变浅或消失,说明有四环素检出。3.如权利要求1所述的方法,其中测定所建立的基于核酸适配体的胶体金试纸条对四环素的选择性的实验步骤如下:选择实际样品中易出现残留的与四环素结构相似的抗生素进行了...
【专利技术属性】
技术研发人员:孙春燕,李松函,李志红,李锐涛,李晨,张子扬,
申请(专利权)人:吉林大学,
类型:发明
国别省市:吉林,22
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