HIV嵌合抗原、制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种HIV嵌合Gag抗原、制备方法及应用，具体公开了一种二价HIV嵌合Gag抗原，该抗原包含Gag嵌合序列1、Gag嵌合序列2及可溶性的PD1序列，同时还公开了抗原的制备方法及在预防、治疗HIV疾病中的应用及诊断HIV疾病的试剂中的应用。本发明专利技术二价HIV嵌合Gag抗原是基于中国数百株HIV‑1 B/B'，C/CRF07/08_BC和CRF01_AE Gag P41序列而设计的，其包含了最保守的T细胞抗原决定表位，本发明专利技术还在基于PD1的疫苗的研究成果上设计了对应的疫苗，该疫苗具有诱导广谱HIV特异性T细胞免疫的作用。

【技术实现步骤摘要】
HIV嵌合抗原、制备方法及应用
本专利技术涉及HIV抗原、制备方法及应用。具体而言，本专利技术涉及一种HIV嵌合Gag抗原、制备方法及应用。
技术介绍
在过去的30年中，I型人类免疫缺陷病毒(HIV-1)是全球现有的最具破坏性的传染病微生物之一。至2014年，HIV-1已造成近78万人感染，其中一半死于获得性免疫缺陷综合症(AIDS)。尽管终生维持治疗能够延长HIV病人生命，但所产生的经济负担及耐药性毒株的出现给病人带来苦难。正是由于以上挑战，在过去三十年付出了巨大的努力去研发有效的HIV疫苗，然而在最近的泰国RV144临床试验中，也只有31％的保护率。另外，HIV-1的遗传多样性成为了全球疫苗发展的另一个挑战。理想情况下，一个有效的疫苗应该引起宿主的免疫反应以抑制和控制感染，但迄今为止，源于自然的HIV-1序列的抗原在非人灵长类动物的研究中和临床试验中只能引发有限度的细胞免疫应答。通过计算机算法设计嵌合抗原，能够匹配和最大化融合自然的HIV-1毒株序列。多价嵌合抗原是一种能够提高针对HIV-1多样性的细胞免疫覆盖率的优化免疫原，嵌合疫苗方法成为有潜力的解决方案。然而，针对中国流行的HIV-1B/B'、C/CRF07/08_BC和CRF01_AE亚型的嵌合免疫原设计还没有报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供了了一种HIV嵌合Gag抗原、制备方法及应用。本专利技术第一方面提供了一种核酸，所述核酸的序列选自：1)包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列；或2)核酸的同源序列，其与SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)核酸的变体，其与SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列相比具有至少一个核苷酸的取代、缺失和/或添加；或4)核酸的衍生物，其为1)-3)所述的核酸的序列的变体。在一优选例中，所述的核酸进一步包含可溶性PD1序列。在一优选例中，所述可溶性PD1序列为人类可溶性PD1序列。在一优选例中，所述的人类可溶性PD1序列为SEQIDNO:6所示的核苷酸序列。在一优选例中，所述的核酸序列进一步包含作为链接体的linker序列。在一优选例中，所述linker序列位于SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列之间。在一优选例中，所述linker序列位于SEQIDNO:6和SEQIDNO:1所示的核苷酸序列之间。在一优选例中，所述linker序列为SEQIDNO:7所示的核苷酸序列。在一优选例中，所述位于SEQIDNO:6和SEQIDNO:1所示的核苷酸序列之间的linker序列与SEQIDNO:6之间含有第一酶切位点序列。在一优选例中，所述第一酶切位点序列为EcoRI酶切序列。在一优选例中，所述的核酸序列进一步包含第二酶切位点序列。在一优选例中，所述第二酶切位点序列与SEQIDNO:6相连。在一优选例中，所述第二酶切位点序列为BamHI酶切序列。在一优选例中，所述的核酸序列进一步包含组织纤溶酶原激活蛋白表达及释放的信号肽序列和起始密码子。在一优选例中，所述BamHI酶切序列依次与组织纤溶酶原激活蛋白表达及释放的信号肽序列和起始密码子相连接。在一优选例中，所述的核酸序列进一步包含第三酶切位点序列和第四酶切位点序列。在一优选例中，所述SEQIDNO:2所示的核苷酸序列依次与终止密码子、第三酶切位点序列和第四酶切位点序列相连接。在一优选例中，所述的第三酶切位点序列和第四酶切位点序列分别为XhoI酶切序列和PmeI酶切序列。在一优选例中，所述的核酸序列为SEQIDNO:5序列。本专利技术第二方面提供了一种氨基酸，由上述核酸序列编码。本专利技术第三方面提供了一种载体，含有上述的核酸序列。本专利技术第四方面提供了一种宿主细胞，其转化或转染了上述的载体。本专利技术第五方面提供了一种疫苗，包含上述的核酸序列、或者上述的氨基酸序列、或者上述的载体、或者上述的宿主细胞。所述疫苗还包含其他HIV疫苗。所述包含的疫苗为基于PD1的疫苗；优选的还包含佐剂。本专利技术第六方面提供了一种疫苗的制备方法，包含制备权利要求上述疫苗所需的步骤。本专利技术第七方面提供了上述核酸序列、或者上述的氨基酸序列、或者上述的载体、或者上述的宿主细胞在制备预防和治疗HIV疾病的药物的应用。本专利技术第八方面提供了上述核酸序列、或者上述的氨基酸序列、或者上述的载体、或者上述的宿主细胞在制备HIV疾病诊断试剂中的应用。在本专利技术中，除非另有说明，否则本文中使用的科学和技术名词具有本领域技术人员所通常理解的含义。并且，本文中所用的细胞培养、分子生物学、免疫学实验室操作步骤均为相应领域内广泛使用的常规步骤。同时，为了更好地理解本专利技术，下面提供相关术语的定义和解释。如本文中所使用的，术语“表位”是指，抗原上被免疫球蛋白或抗体特异性结合的部位。“表位”在本领域内也称为“抗原决定簇”。表位或抗原决定簇通常由分子的化学活性表面基团例如氨基酸或碳水化合物或糖侧链组成并且通常具有特定的三维结构特征以及特定的电荷特征。例如，表位通常以独特的空间构象包括至少3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14或15个连续或非连续的氨基酸，其可以是“线性的”或“构象的”。参见，例如，EpitopeMappingProtocolsinMethodsinMolecularBiology，第66卷，G.E.Morris，Ed.(1996)。在线性表位中，蛋白质与相互作用分子(例如抗体)之间的所有相互作用的点沿着蛋白质的一级氨基酸序列线性存在。在构象表位中，相互作用的点跨越彼此分开的蛋白质氨基酸残基而存在。如本文中所使用的，术语“载体(vector)”是指，可将多核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时，载体称为表达载体。载体可以通过转化，转导或者转染导入宿主细胞，使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得扩增和/或表达。载体是本领域技术人员公知的，包括但不限于：质粒；噬菌体；柯斯质粒等等。如本文中所使用的，20种常规氨基酸和其缩写遵从常规用法。参见Immunology-ASynthesis(第2版，E.S.Golub和D.R.Gren，Eds.，SinauerAssociates，Sunderland，Mass.(1991))，其通过引用合并入本文。本专利技术具体公开了一种二价HIV嵌合Gag抗原，该抗原包含Gag嵌合序列1、Gag嵌合序列2及可溶性的PD1序列，同时还公开了抗原的制备方法及在预防、治疗HIV疾病中的应用及诊断HIV疾病的试剂中的应用。本专利技术二价HIV嵌合Gag抗原是基于中国数百株HIV-1B/B'，C/CRF07/08_BC和CRF01_AEGagP41序列而设计的，其包含了最保守的T细胞抗原决定表位，本专利技术还在基于PD1的疫苗的研究成果上设计了对应的疫苗，该疫苗具有诱导广谱HIV特异性T细胞免疫的作用。附图说明图1：编码二价HIV嵌合Gag抗原的Gagp41mosaic1和Gagp41mosaic2的核酸序列。图2：与图1的核酸序列对应的氨基酸序列。图3：两个HIV-1Gag嵌合抗原氨基酸序列T细胞抗原决定表位覆盖率分析图。图4:基于PD1的二价HIV嵌合Gag本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种核酸，其特征为，所述核酸的序列选自：1)包含SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列；或2)核酸的同源序列，其与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列有至少70％‑99％的同一性；或3)核酸的变体，其与SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列相比具有至少一个核苷酸的取代、缺失和/或添加；或4)核酸的衍生物，其为1)‑3)所述的核酸的序列的变体。

【技术特征摘要】
2016.07.18 CN 20161057033561.一种核酸，其特征为，所述核酸的序列选自：1)包含SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列；或2)核酸的同源序列，其与SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列有至少70％-99％的同一性；或3)核酸的变体，其与SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列相比具有至少一个核苷酸的取代、缺失和/或添加；或4)核酸的衍生物，其为1)-3)所述的核酸的序列的变体。2.根据权利要求1所述的核酸，其特征为，进一步包含可溶性PD1序列；任选的，所述可溶性PD1序列为人类可溶性PD1序列；任选的，所述的人类可溶性PD1序列为SEQIDNO:6所示的核苷酸序列；任选的，所述的核酸序列进一步包含作为链接体的linker序列；任选的，所述linker序列位于SEQIDNO:1和SEQIDNO:2所示的核苷酸序列之间；任选的，所述linker序列位于SEQIDNO:6和SEQIDNO:1所示的核苷酸序列之间；任选的，所述linker序列为SEQIDNO:7所示的核苷酸序列；任选的，所述位于SEQIDNO:6和SEQIDNO:1所示的核苷酸序列之间的linker序列与SEQIDNO:6之间含有第一酶切位点序列；任选的，所述第一酶切位点序列为EcoRI酶切序列；任选的，所述的核酸序列进一步包含第二酶切位点序列；任选的，所述第二酶切位点序列与SEQIDNO:6相连；任选的，所述第二酶切位点序列为BamHI酶切序...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈志伟，
申请(专利权)人：艾克尔免疫愈疗有限公司，
类型：发明
国别省市：中国香港,81