一种新型β‑淀粉酶的高效制备方法技术
【技术实现步骤摘要】
一种新型β-淀粉酶的高效制备方法
本专利技术提供了一种新型β-淀粉酶的高效制备方法，属于基因工程、发酵工程领域。
技术介绍
植物来源的β-淀粉酶活性高，耐热性好、应用pH范围更广，目前工业上应用的β-淀粉酶大多还是通过植物提取获得的β-淀粉酶。从植物中提取β-淀粉酶目前主要有水提和油提两种方法，其中油提法(甘油)与水提法相比，具有提取时间短、酶的保存时间长等优点，但成本较高，生产中常采用水提法提取β-淀粉酶。目前商品化推广比较成功的β-淀粉酶为Genencor杜邦公司生产的麦芽β-淀粉酶，是采用典型的大麦提取工艺制造方法制得。但由于β-淀粉酶在大麦中中的含量较低，提取成本偏高，且所有这些酶制剂提取物都或多或少含有其它无关淀粉水解酶，如α-淀粉酶、糖化酶等，影响其使用效果（麦芽糖浆中含有较高浓度的葡萄糖）。微生物发酵生产的β-淀粉酶不受季节、原料等影响，可实现自动化控制批量生产，使生产出的β-淀粉酶性能稳定、均一，是β-淀粉酶产业化制造的最佳选择之一。但是由于微生物发酵生产的β-淀粉酶活性相对较低，耐热性差，产酶水平太低以及其最适作用温度偏低，一直未能实现工业化生产...
【技术保护点】
一种新型β‑淀粉酶的高效制备方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）β‑淀粉酶基因的获得：通过NCBI公布的大麦β‑淀粉酶编码基因
【技术特征摘要】
1.一种新型β-淀粉酶的高效制备方法，其特征在于，包括如下具体步骤：（1）β-淀粉酶基因的获得：通过NCBI公布的大麦β-淀粉酶编码基因bba碱基序列和酿酒酵母的密码子偏好性，对上述bba基因进行密码子优化并全基因合成新的bbaP基因；（2）克隆：将步骤（1）所得bbaP基因克隆入pPIC9K载体中构建重组表达质粒pPIC-bbaP；（3）易错PCR：采用非高保真的DNA聚合酶在45~50℃低退火温度下对上述获得bbaP实施易错PCR，获得的新基因bbaPT；（4）表达：将步骤（3）所得新基因bbaPT克隆入pPIC9K载体中构建重组表达质粒pPIC-bbaPT，在巴斯德毕赤酵母GS115中实现整合表达；（5）耐热新型β-淀粉酶的筛选：通过His+筛选、淀粉透明圈筛选及G418抗性筛选，再通过摇瓶发酵和酶活测定获得最适作用温度显著提高的β-淀粉酶的重组酵母GS-bbaPT29；（6）耐热新型β-淀粉酶...
【专利技术属性】
技术研发人员：牛丹丹，叶秀云，
申请(专利权)人：福建福大百特生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：福建,35
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