鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白、抗体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白、多克隆抗体及其应用。本发明专利技术提供的鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白，其全长氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，编码该蛋白的全长核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明专利技术选取ORF136部分基因序列构建pET32a‑ORF136重组原核表达载体，经IPTG诱导表达后得到重组表达蛋白，经免疫兔子获得多克隆抗体，将所得多克隆抗体用纯化的CyHV‑3病毒和感染CyHV‑3的KS细胞进行western blot分析，并进一步采用间接免疫荧光实验验证抗体的检测应用。ORF136基因重组表达蛋白多克隆抗体的制备为ORF136蛋白功能研究和CyHV‑3血清学诊断方法的建立提供了重要材料。

【技术实现步骤摘要】
鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白、抗体及其应用
本专利技术属于生物基因工程领域，具体涉及由鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白、由ORF136重组表达蛋白制备的多克隆抗体及其应用，进一步涉及多克隆抗体的制备方法。
技术介绍
鲤疱疹病毒3型(CyprinidHerpesvirus3，CyHV-3)，又称为锦鲤疱疹病毒(Koiherpesvirus，KHV)，是引起鲤鱼、锦鲤及其变种高度传染性锦鲤疱疹病毒病(Koiherpesvirusdisease,KHVD)的病原。该病自从1997年在欧洲发现以来，多个国家和地区都报道了由该疾病引起的鲤鱼或锦鲤暴发性死亡现象，给鲤鱼及锦鲤养殖产业带来了严重的经济损失。CyHV-3属于疱疹病毒目，异疱疹病毒科，鲤疱疹病毒属，是具有囊膜的双链DNA病毒，病毒颗粒直径为167～200nm，基因组全长295kbp，两端为22kbp的正向重复序列，共编码164个开放阅读框(Openreadingframe,ORF)，包括8个重复ORF，是已知基因组最大的疱疹病毒。目前，运用质谱学的方法已鉴定到46种病毒结构蛋白。其中，Mic本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白，其特征在于，其全长氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

【技术特征摘要】
1.一种鲤疱疹病毒3型1301株ORF136基因重组表达蛋白，其特征在于，其全长氨基酸序列如SEQIDNO:2所示。2.一种编码权利要求1所述的重组表达蛋白的核苷酸，其特征在于，其全长核苷酸碱基序列如SEQIDNO:1所示。3.一种多克隆抗体，其特征在于，以氨基酸序列如SEQIDNO:5所示的重组表达蛋白为抗原在免疫动物中制备所得。4.权利要求3所述的抗体制备用于检测锂疱疹病毒3型的免疫工具的应用。5.权利要求3所述的抗体在检测、预防或治疗鲤疱疹病毒3型感染引起的相关疾病中的应用。6.一种制备权利要求3所述的多克隆抗体的方法，其特征在于，具体制备步骤如下：1)扩增：以鲤疱疹病毒3型1301株DNA为模板，设计特异性引物对ORF136基因编码蛋白第31～157位氨基酸区域进行PCR扩增，得到重组克隆载体pMD18-T-ORF136；2)构建：将重组克隆载体pMD18-T-ORF136、原核表达载体pET-32a(+)分别进行双酶切后连接，构建重组原核表达载体pET-32a-ORF136；3)表达：将pET-32a-ORF136转化至大肠杆菌Rosetta经IPTG诱导表达后得到如SE...

【专利技术属性】
技术研发人员：王庆，郑树城，李莹莹，曾伟伟，王英英，刘春，任燕，石存斌，黄琦雯，
申请(专利权)人：中国水产科学研究院珠江水产研究所，
类型：发明
国别省市：广东,44