一种鲤疱疹病毒检测试剂盒及其检测方法技术

技术编号:10424016 阅读:224 留言:0更新日期:2014-09-12 14:32
一种鲤疱疹病毒检测试剂盒及其检测方法,属于病毒基因组检测技术领域。该检测试剂盒包括10×反应缓冲液、1U/μL的Taq酶、各10μM的引物组P1F/P1R、各10μM的引物组P2F/P2R、纯水和15μg/mL的阳性DNA。利用本发明专利技术的试剂盒能够同时检测鲤痘病毒、金鱼造血组织坏死病毒和锦鲤疱疹病毒的基因组,并且该方法直观优越、敏感性好、特异性高,对检测微量、保存时间久的标本中鲤疱疹病毒基因组的效果良好,可用于鲤疱疹病毒感染的实验室检测和鲤疱疹病毒的分子流行病学调查。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于病毒基因组检测
,具体涉及一种鲤疱疹病毒(Cyprinidherpesvieus, CYHV)检测试剂盒及其检测方法。
技术介绍
疱疹病毒为线性双链DNA病毒,可引起哺乳动物、禽类和水生动物多种致命性疾病,其中引起鱼类严重疾病的疱疹病毒主要有鮰疱疹病毒、鲤痘病毒(carp poxherpesvirus)、金鱼造血组织坏死病毒(haematopoietic necrosis herpesvirus ofgoldfish, HNHV)和锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus),后三者都属于鲤疱疹病毒,鲤痘病毒属于鲤疱疫病毒I型(Cyprinid herpesvirus I, CYHV-1),金鱼造血组织坏死病毒属于鲤疱疹病毒2型(Cyprinid herpesvirus 2,CYHV-2),锦鲤疱疹病毒属于鲤疱疹病毒3型(Cyprinid herpesvirus 3,CYHV-3)。CYHV-1可引起鲤痘疮病,主要危害鲤鱼、鲫鱼及圆腹雅罗鱼等,影响鱼的生长,降低鱼的商品价值,可造成较大经济损失。CYHV-2可引起金鱼和鲫鱼的造血组织坏死症,该病于1992年在日本爱知县金鱼养殖场首次发现,之后在美国、中国台湾、澳大利亚等国和地区暴发并流行,其造成死亡率最高可达100%。2008-2013年造成中国最大的鲫鱼养殖基地江苏盐城地区养殖鲫鱼暴发鲤脾肾坏死病,造成几万亩的养殖鲫鱼死亡。而CYHV-3亦可引起鲤鱼和锦鲤的疱疹病毒病,一旦发病,死亡率达80%以上。由于以上三种鲤疱疹病毒病还未有有效疫苗可以用来预防,因此研制出以上三种鲤疱疹病毒病的检测试剂盒, 是当前鲤科鱼类养殖需要解决的主要问题。由于以上三种鲤疱疹病毒都可感染大部分的鲤科鱼类,又由于目前缺乏能同时检测以上三种鲤疱疹病毒的检测方法,这就给需要同时检测以上三种病原造成麻烦。本专利技术研制的能同时检测以上三种鲤疱疹病毒的PCR方法和套式PCR检测方法,弥补了该
的缺陷,为以上三种鲤疱疹病毒的同时监测提供有力手段。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题,本专利技术的目的在于设计提供。该方法能同时检测鲤痘病毒(carp pox herpesvirus)、金鱼造血组织坏死病毒(haematopoietic necrosis herpesvirus of goldfish, HNHV)和锦趣抱疫病毒(Koiherpesvirus)的基因组。该方法直观优越、敏感性好、特异性高,对检测微量、保存时间久的标本中鲤疱疹病毒基因组的效果良好,可用于鲤疱疹病毒感染的实验室检测和鲤疱疹病毒的分子流行病学调查。为了达到上述目的,本专利技术采用如下技术方案: A、设计两对针对鲤疱疹病毒I型、II型和III型的通用引物本专利技术中所设计的两对鲤疱疹病毒通用引物,从GenBank中获得鲤疱疹病毒科全部三个属代表株全基因组序列,Cyprinidherpesvirus I strain NG-J1, Cyprinid herpesvirus2strain ST-Jl、Cyprinid herpesvirus 3 KHV-U共3株鲤疱疫病毒基因编码氨基酸序列和基因组全序列。将所有氨基酸序列和基因组全序列进行程序排列,寻找氨基酸序列及对应基因组序列均保守的区域作为引物设计区(见表1)。国内外尚未见能同时检测鲤疱疹病毒全部三个型通用引物设计的研究报道。表1鲤疱疹病毒引物设计本文档来自技高网
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【技术保护点】
一种鲤疱疹病毒检测试剂盒,其特征在于该检测试剂盒包括10×反应缓冲液、1U/μL的 Taq酶、各10μM的引物组P1F/P1R、各10μM的引物组P2F/P2R、纯水和15μg/mL的阳性DNA;所述的10×反应缓冲液为:Tris‑HCl 100mM、KCl 500mM、MgCl2 20mM和dNTPs 2.5mM;所述的引物组P1F/P1R中:上游引物P1F序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物P1R序列如SEQ ID NO:2所示;所述的引物组P2F/P2R中:上游引物P2F序列如SEQ ID NO:3所示,下游引物P2R序列如SEQ ID NO:4所示。

【技术特征摘要】
1.一种鲤疱疹病毒检测试剂盒,其特征在于该检测试剂盒包括1X反应缓冲液、IU/μ L的Taq酶、各10 μ M的引物组P1F/P1R、各10 μ M的引物组P2F/P2R、纯水和15 μ g/mL的阳性DNA ; 所述的 1X 反应缓冲液为:Tris-HCl 10mM, KCl 500mM、MgCl2 2OmM 和 dNTPs 2.5mM ; 所述的引物组P1F/P1R中:上游引物PlF序列如SEQ ID NO:1所示,下游引物PlR序列如SEQ ID NO: 2所示; 所述的引物组P2F/P2R中:上游引物P2F序列如SEQ ID NO:3所示,下游引物P2R序列如SEQ IDNO:4所示。2.一种利用如权...

【专利技术属性】
技术研发人员:潘晓艺沈锦玉蔺凌云袁雪梅郝贵杰徐洋姚嘉赟尹文林
申请(专利权)人:浙江省淡水水产研究所
类型:发明
国别省市:浙江;33

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