三维成纤维细胞集合体及包含此的体外三维皮肤真皮模型制造技术

本发明专利技术提供一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的制造方法以及包含由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体的体外(In vitro)三维皮肤真皮模型及使用该模型而筛选药物的方法。

Three dimensional fibroblast aggregates and an in vitro three-dimensional dermal dermal model comprising the same

The present invention provides a method for manufacturing three-dimensional fibroblast aggregates, the cell aggregates and contains fibroblast cultured fibroblasts aggregation in vitro (In vitro) 3D skin model and use the model and method of screening drugs.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】三维成纤维细胞集合体及包含此的体外三维皮肤真皮模型
本专利技术涉及一种三维成纤维细胞集合体、该细胞集合体的生产方法、包含该细胞集合体的体外三维皮肤真皮模型以及使用该细胞集合体而筛选药物的方法。
技术介绍
近来，细胞治疗技术作为难治疾病等的治疗的新领域而受到瞩目。目前为止，为了治疗人类的难治疾病，提出了脏器移植或基因治疗等，但由于免疫排斥、供应脏器不足、载体开发或疾病基因相关知识的不足，未能完成有效的实用化。于是，对于细胞治疗技术的关心高涨，且将从生物体内分离的细胞在生物体外进行增殖并移植的技术正在商用化，人工皮肤、软骨或纤维组织的重建等的实用化在持续进行。成纤维细胞为用于生产并维持间质性细胞外基质(ECM)的细胞，成纤维细胞通过细胞外基质而有机地连接。并且，成纤维细胞作为生产免疫防御用的多样的细胞因子及生理活性因子的细胞而广为人知。为了将这样的成纤维细胞作为细胞治疗剂或组织工程学素材而灵活利用，以二维方式培养成纤维细胞而大量增殖之后利用胰蛋白酶之类的酶进行了处理，然而在这样的成纤维细胞中，在将生成的细胞外基质分解而移植的步骤中无法期待细胞外基质的作用。作为组织工程学技术，利用可生物分本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于生产成纤维细胞集合体的方法，包括如下的步骤：在具备涂覆有蛋白质的表面的培养容器中的液体培养基中培养成纤维细胞，从而获得包含有因成纤维细胞从所述表面脱离而形成的成纤维细胞集合体的培养物，其中，所述蛋白质具有与成纤维细胞结合的活性；以及从所述培养物中分离成纤维细胞集合体，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质以比成纤维细胞与成纤维细胞之间的结合更弱的方式结合于成纤维细胞。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.11.12 KR 10-2015-01590111.一种用于生产成纤维细胞集合体的方法，包括如下的步骤：在具备涂覆有蛋白质的表面的培养容器中的液体培养基中培养成纤维细胞，从而获得包含有因成纤维细胞从所述表面脱离而形成的成纤维细胞集合体的培养物，其中，所述蛋白质具有与成纤维细胞结合的活性；以及从所述培养物中分离成纤维细胞集合体，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质以比成纤维细胞与成纤维细胞之间的结合更弱的方式结合于成纤维细胞。2.如权利要求1所述的方法，其中，在进行所述培养的步骤中，所述成纤维细胞在培养初期黏着于培养容器的表面而增殖，然后随着生长而从培养容器的表面脱离。3.如权利要求1所述的方法，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质在培养基中以比成纤维细胞与纤连蛋白之间的结合更弱的方式与所述成纤维细胞结合。4.如权利要求1所述的方法，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质不与存在于成纤维细胞的细胞膜的整合素相结合。5.如权利要求1所述的方法，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质与存在于成纤维细胞的细胞膜的硫酸类肝素蛋白多糖结合。6.如权利要求1所述的方法，其中，具有与所述成纤维细胞结合的活性的蛋白质是成纤维细胞生长因子。7.如权利要求1所述的方法，其中，所述蛋白质借助于从由如下的物质组成的群中选择的任意一种或者其组合而被固定于培养容器表面：麦芽糖结合蛋白质、疏水蛋白及疏水性细胞穿透肽。8.如权利要求1所述的方法，其中，所述培养容器的表面是从由如下的表面组成的群中选择的疏水性表面：硅烷化的表面、涂覆有烃的表面、高分子表面及金属表面。9.如权利要求8所述的方法，其中，所述高分子选自：聚苯乙烯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚丙烯、聚四氟乙烯、聚(L-乳酸)、聚(D,L-乳酸)、聚(羟基乙酸)、聚(己内酯)、聚(羟基烷酸酯)、聚二恶烷酮、聚三亚甲基碳酸酯、以及它们的共聚物所组成的群。10.如权利要求1所述的方法，其中，在培养所述成纤维细胞之前，还包括如下步骤：使成纤维细胞传代增殖。11.如权利要求1所述的方法，其中，将所述成纤维细胞以1.0×104至2.0×105细胞/cm2的细胞浓度播种。12.如权利要求1所述的方法，其中，所述培养执行1天至1星期。13.如权利要求1所述的方法，其中，将所形成的成纤维细胞集合体从培养物分离的步骤在没有酶处理的情况下执行分离。14.如权利要求1所述的方法，其中，所述成纤维细胞集合体为球形、片状或者其组合形状。15.一种成纤维细胞集合体，其中，该成纤维细胞集合体通过权利要求1所述的方法制造。16.如权利要求15所述的成纤维细胞集合体，其中，形状为球形，直径为300μm至2000μm，且每400μm直径包括3.0×105至1.0×106的细胞。17.如权利要求15所述的成纤维细胞集合体，其中，所述成纤维细胞集合体分泌细胞外基质或血管内皮生长因子。18.一种体外三维皮肤真皮模型，包括：由成纤维细胞培养的成纤维细胞集合体。19.如权利要求18所述的模型...

【专利技术属性】
技术研发人员：金相宪，崔淙勋，朴贵德，
申请(专利权)人：韩国科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：韩国,KR