寡聚甘露糖醛酸的制备方法技术

本发明专利技术涉及寡聚甘露糖醛酸的制备方法，包括两次水解与分级：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量95%的乙醇分散后，加入10倍水中。加入盐酸使反应体系中酸的浓度为0.5mol/L，然后在100℃下搅拌回流10h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀。将沉淀用水洗涤，加入Na

【技术实现步骤摘要】
寡聚甘露糖醛酸的制备方法
本专利技术属于海洋生物
，具体涉及一种寡聚甘露糖醛酸的制备方法。
技术介绍
褐藻胶是褐藻细胞间隙与细胞壁中含有的一类水溶性生物大分子，是由褐藻酸与钠、钾、钙等金属离子结合的褐藻酸盐。褐藻胶分子可为海藻在海水中的生长提供强度与韧性。自从1881年由Stanford发现后，褐藻胶由于其具有良好的生物兼容性，低毒，价格低廉等优点已被广泛应用于医药、食品、化工等领域。
技术实现思路
本专利技术旨在提供一种制备寡聚甘露糖醛酸的方法，以快速大量制备高纯度的寡聚甘露糖醛酸。一种寡聚甘露糖醛酸的制备方法，包括两次水解与分级，具体如下：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量95%的乙醇分散后，加入10倍水中。加入盐酸使反应体系中酸的浓度为0.5mol/L，然后在100℃下搅拌回流10h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀。将沉淀用水洗涤，加入Na2CO3溶液溶解沉淀，然后调节溶液pH至2.86，离心，沉淀为G1。（2）二次水解及分级：向上清液中加入盐酸，使反应体系中酸的浓度为0.1mol/L。继续加热搅拌回流3h。用Na2CO3溶液中和至沉淀溶解，再用盐酸调节溶液的pH至2.86，离心，向上清液中继续加入稀盐，产生大量沉淀，离心收集沉淀，沉淀用70-75%的乙醇充分洗涤，经95%的乙醇脱水，干燥即得寡聚甘露糖醛酸。褐藻酸是由β-D-寡聚甘露糖醛酸（M）和α-L-聚古罗糖醛酸（G）组成的二元线型嵌段化合物。为了获得纯度较高的寡聚甘露糖醛酸，采用了两次水解与分级的策略。采用两次水解与两次分级的方法可以制得纯度较高的中间体寡聚甘露糖醛酸。当水解过程进行10小时后，从产物中分级得到的(M)n片段和(G)n片段的相应单体残基含量可达90%以上。根据褐藻酸的这些结构特点和水解反应规律，确定了从褐藻酸中经水解和pH分级方法制备M2的工艺条件，一次水解条件为0.5mol/L盐酸100℃下水解10h；二次水解条件为0.1mol/L的盐酸100℃水解3h。本专利技术的寡聚甘露糖醛酸的制备方法相比于现有技术：制备方法简单，快速，且能够大量得到目的产物，产物的纯度高。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步详细说明。实施例1寡聚甘露糖醛酸的制备，包括如下步骤：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量95%的乙醇分散后，加入10倍水中。加入盐酸使反应体系中酸的浓度为0.5mol/L，然后在100℃下搅拌回流10h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀。将沉淀用水洗涤，加入Na2CO3溶液溶解沉淀，然后调节溶液pH至2.86，离心，沉淀为G1。（2）二次水解及分级：向上清液中加入盐酸，使反应体系中酸的浓度为0.1mol/L。继续加热搅拌回流3h。用Na2CO3溶液中和至沉淀溶解，再用盐酸调节溶液的pH至2.86，离心，向上清液中继续加入稀盐，产生大量沉淀，离心收集沉淀，沉淀用70-75%的乙醇充分洗涤，经95%的乙醇脱水，干燥即得寡聚甘露糖醛酸（M2）。实施例2寡聚甘露糖醛酸（M2）的含量测定糖类化合物一般缺乏特征的紫外吸收，为提高其在HPLC检测中的灵敏度，常采用衍生化的方法使其形成具有紫外或荧光吸收的衍生物。1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone，PMP)可以在温和的条件下与还原糖进行定量反应，且无立体异构产物，被成功应用于多糖化合物的单糖组成分析。采用的色谱条件为：色谱柱：AgilentEclipseXDB-C18色谱柱(4.6mm×150mm，5μm)；流动相：0.1mol/L磷酸盐(pH6.7)缓冲液-乙腈(V/V，82:18)；流速：1mL/min；检测波长：245nm；柱温：25℃；进样体积：20μL。标准曲线的绘制：精密称取干燥至恒重的M和G对照品，按文献方法进行色谱分析，以峰面积(S，×106mAu)为横坐标，以浓度(C，g/L)为纵坐标绘制标准曲线。样品的测定：称取5mgM2样品于2mL安瓿瓶中，加入3mol/L三氟乙酸1.5mL，混匀，充氮气后封管，于110℃沙浴中降解6h。待反应完成后，将三氟乙酸旋蒸至干，每次加入少量甲醇，蒸干至无酸味为止，加入500μLH2O转移至离心管中，按上述衍生条件和色谱分析条件进行HPLC分析。根据样品中M和G的峰面积以及标准曲线即可算出样品中M的相对含量。根据液相色谱结果，M的线性回归方程为SM=7.72C-0.56(r2=0.9974)，G的线性回归方程为SG=7.08C-0.47(r2=0.9976)。结果表明：M和G与PMP的衍生物在0.2～2.0g/L浓度范围内均呈良好的线性关系。根据G、M的标准曲线及校正系数，算得M2的含量达到91%。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种寡聚甘露糖醛酸的制备方法，其特征在于，包括两次水解与分级，具体如下：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量 95 %的乙醇分散后，加入 10 倍水中；加入盐酸使反应体系中酸的浓度为 0.5 mol/L，然后在 100  ℃下搅拌回流 10 h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀；将沉淀用水洗涤，加入 Na

【技术特征摘要】
1.一种寡聚甘露糖醛酸的制备方法，其特征在于，包括两次水解与分级，具体如下：（1）一次水解及分级：褐藻胶用少量95%的乙醇分散后，加入10倍水中；加入盐酸使反应体系中酸的浓度为0.5mol/L，然后在100℃下搅拌回流10h，冷却后，将上述水解混合物离心，收集沉淀；将沉淀用水洗涤，加入Na2CO3溶液溶解沉淀，然后调节溶液pH至2...

【专利技术属性】
技术研发人员：褚方强，
申请(专利权)人：青岛清泉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37