一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及硒化多糖技术领域，提供一种硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，其包括如下步骤：将聚甘露糖醛酸悬浮于无水有机溶剂中，在搅拌条件下加入无水有机溶剂溶解的三氧化硫-吡啶复合物，在20～100℃恒温度下反应1～10小时，加入乙醇，离心分离反应产物，再用乙醇洗涤，加水溶解，用碱调节pH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在酸性溶液中、Ba2+的催化下进行反应，加入硫酸盐，离心取上清液，用碱调节pH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸。以及，提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制备方法所制备的硒化聚甘露糖醛酸在阿尔茨海默症预防和治疗的药物以及保健品中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于硒化多糖
，具体涉及一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用。
技术介绍
褐藻胶是一种水溶性酸性多糖，主要从巨藻、马尾藻、海带等褐藻的细胞壁中提取得到，具有独特的结构和生物活性。其结构上由a-1，4-L-古罗糖醒酸(a-1，4-L-guluronic acid,简写为G)和0 _1，4-D-甘露糖醒酸(3-1，4-D-mannuronicacid,简写为M)通过1_4糖苷键连接而成的直链阴离子多糖。整个分子由三种片段构成聚甘露糖醒酸片段(Poly-mannuronate, PM)、聚古罗糖醒酸片段(Poly-guluronate, PG)和聚甘露糖醒酸-古罗糖醒酸杂合段(PMG block)。因此,通过已有的酸解方法可以分离出单一的聚甘露糖醛酸。聚甘露糖醛酸结构特殊是C5上连有羧基的酸性化合，且结构上不含硫，对其进行硒化存在一定的困难，因此采用先磺化再硒化的方法对其进行硒化。硒元素是生命活动的必须元素，其存在形式有无机硒和有机硒两种，常见的无机硒有亚硒酸钠和硒酸钠，有机硒主要是硒蛋白和硒多糖。硒能构成若干氧化酶的活性中心，可增强机体的抗氧化能力和对相关疾病的抵抗能力。这说明了硒与人体健康的直接关系。无机硒具有蓄积性毒性和致突变作用，使用时剂量难以控制，而有机硒毒性低，副作用小，不但能够更好地发挥硒的作用，而且在激发免疫反应上比无机硒显著，因此，将无机硒与多糖有机结合使之转化为有机硒化合物硒多糖，将会使硒和多糖的生理和药理功能得到优化。目前有多糖对阿尔兹海默症(AD)的作用，但尚未见硒多糖对AD作用的报道。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于克服现有技术之缺陷，提供一种硒化聚甘露糖醛酸制备方法及其应用。本专利技术提供一种硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，其包括如下步骤制备磺化聚甘露糖醛酸将聚甘露糖醛酸悬浮于无水有机溶剂中，在搅拌条件下加入无水有机溶剂溶解的三氧化硫_吡啶复合物，在20 100°C恒温度下反应I 10小时，加入2 4倍体积的95%的乙醇，离心分离反应产物，再用95%的乙醇洗涤，加水溶解，用碱调节PH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；制备硒化聚甘露糖醛酸按质量比为I :0. I 10将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在酸性溶液中、Ba2+的催化下20 100°C恒温度下反应2 20小时，磺化聚甘露糖醛酸与氯化钡摩尔比为I :1 100，加入硫酸盐以去除Ba2+，离心取上清液，用碱调节pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗坏血酸检测透析袋内液不变红为止，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸。以及，提供上述硒化聚甘露糖醛酸的制备方法所制备的硒化聚甘露糖醛酸在阿尔茨海默症预防和治疗的药物以及保健品中的应用。本专利技术的硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，采用先磺化再硒化的制备方法，具有成本低，产率高的优势。而且通过透析法有效除去过量的亚硒酸根，同时也可以透析除去其他小分子无机化合物和低聚糖。同时，该制备方法所制备的硒化聚甘露糖醛酸具有预防和治疗阿尔茨海默症的作用。附图说明图I是本专利技术实施例的聚甘露糖醛酸(a)、磺化聚甘露糖醛酸(b)和硒化聚甘露糖醛酸(C)的红外光谱图；图2是本专利技术Se-PM和Na2Se03、磺化聚甘露糖醛酸、PM、不同聚合度的寡糖混合物(MOM)对H2O2损伤的N2a-APP695-sw细胞保护后的细胞存活率关系图； 图3是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉胶和Na2SeO3对N2a_APP695_sw细胞中BACEl和APP蛋白表达的影响Western blot检测结果原图，I是对照，2是Se_PM，3是Se-Carr，4 是 Na2SeO3 ；图4是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉胶和Na2SeO3对N2a_APP695_sw细胞中BACEl蛋白表达的影响Quantity one软件对BACEl蛋白条带进行光密度分析的结果，I是对照，2是 Se-PM，3 是 Se-Carr, 4 是 Na2SeO3 ；图5是硒化聚甘露糖醛酸、硒化卡拉胶和Na2SeO3对N2a_APP695_sw细胞中APP蛋白表达的影响Quantity one软件对APP蛋白条带进行光密度分析的结果，I是对照，2是Se-PM, 3 是 Se-Carr，4 是 Na2SeO3。具体实施例方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。本专利技术实施例提供一种硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，其包括如下步骤SOl :制备磺化聚甘露糖醛酸将聚甘露糖醛酸(PM)悬浮于无水有机溶剂中，在搅拌条件下加入无水有机溶剂溶解的三氧化硫_吡啶复合物，在20 100°C恒温度下反应I 10小时，加入2 4倍体积的95%的乙醇，离心分离反应产物,再用95%的乙醇洗涤，力口水溶解，用碱调节PH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸(S-PM)；S02 :制备硒化聚甘露糖醛酸按质量比为I :0. I 10将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在酸性溶液中、Ba2+的催化下20 100°C恒温度下反应2 20小时，磺化聚甘露糖醛酸与氯化钡摩尔比为I :1 100，加入硫酸盐以去除Ba2+，离心取上清液，用碱调节PH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗坏血酸检测透析袋内液不变红为止，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸(Se-PM)。步骤SOl中，聚甘露糖醛酸悬浮于无水有机溶剂中，优选地，所述有机溶剂为二甲基甲酰胺(DMF)，所述三氧化硫-吡啶复合物与PM的摩尔比为100 I :1。所述反应优选在50 70°C恒温度下反应3 5小时，加入2 4倍体积的95%的醇，其目的为终止反应并醇沉多糖。离心分离，用醇洗涤沉淀后，将沉淀溶于水中，用碱调节PH值至7。其中，所述碱可以为NaOH、KOH等强碱。透析，滤过，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸。步骤S02优选为，按质量比为I :1 3将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在加入到非强还原酸中，如稀硝酸溶液，更优选地，硝酸的质量浓度为0. 5 %，其中，磺化聚甘露糖醛酸在酸溶液中的质量浓度为0. I 0. 3%，优选为0. 2%。在Ba2+的催化下、40 60°C恒温度下反应7 10小时，磺化聚甘露糖醛酸与氯化钡摩尔比为I :1 100，加入硫酸盐以去除Ba2+，离心取上清液，用碱调节pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗坏血酸检测透析袋内液不变红为止，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸。其中，所述冷冻干燥具体是在_80°C下冷冻8 24小时，再用真空冷冻干燥冻干。所制备的硒化聚甘露糖醛酸包含吡喃型糖单元，即P -I, 4-D-甘露糖醛酸，其C2、C4和C5位上至少一个羟基氢被亚硒酸酯基或其盐所取代。所述聚甘露糖醛酸、磺化聚甘露糖醛酸和硒化聚甘露糖醛酸的红外光图谱如图I所示。从图I (a)中可以看出，在939. 99、 1037. 21和1082. 53CHT1为吡喃糖环骨架振动的特征吸收峰，820. 40cm^为D-聚甘露糖醛酸的特征吸收峰，证明该样品分子中存在D-聚甘露糖醛酸糖环骨架结构。磺化聚甘露糖醛酸的红外光图谱(图I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种硒化聚甘露糖醛酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：制备磺化聚甘露糖醛酸：将聚甘露糖醛酸悬浮于无水有机溶剂中，在搅拌条件下加入无水有机溶剂溶解的三氧化硫？吡啶复合物，在20～100℃恒温度下反应1～10小时，加入2～4倍体积的95%的乙醇，离心分离反应产物，再用95%的乙醇洗涤，加水溶解，用碱调节pH至中性，透析，过滤，冷冻干燥，得磺化聚甘露糖醛酸；制备硒化聚甘露糖醛酸：按质量比为1：0.1～10将所述磺化聚甘露糖醛酸与亚硒酸盐在酸性溶液中、Ba2+的催化下20～100℃恒温度下反应2～20小时，所述磺化聚甘露糖醛酸与氯化钡摩尔比为1：1～100，加入硫酸盐以去除Ba2+，离心取上清液，用碱调节pH至中性，再用截留分子量1000的透析袋透析，至抗坏血酸检测透析袋内液不变红为止，过滤，冷冻干燥，获得所述硒化聚甘露糖醛酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱志杰，刘琼，续旭，倪嘉缵，
申请(专利权)人：深圳大学，
类型：发明
国别省市：