本发明专利技术提供了一种寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型H1N1流感病毒的药物中的应用。本发明专利技术通过实验不仅证明了寡聚甘露糖醛酸OM在体外对H1N1亚型的甲型流感病毒感染的狗肾上皮细胞具有较好的保护作用，可以有效地降低病毒的复制,其作用效果与阳性对照药利巴韦林相当。而且，OM还可以显著减少甲型H1N1流感病毒感染引起的小鼠死亡，延长生存时间。本发明专利技术提供的寡聚甘露糖醛酸OM具有水溶性好、稳定性高和安全低毒等优点，在体内外实验中都证明OM具有良好的抗甲型H1N1流感病毒活性，预示该寡聚甘露糖醛酸有开发成抗甲型流感病毒药物的前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于海洋药物领域，涉及到寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用。
技术介绍
甲型、流感病毒(Influenza A Virus, IAV)属于正粘病毒科(Orthomyxoviridae) 且有包膜的负链RNA病毒，根据其表面的血凝素蛋白(HA)和神经氨酸酶蛋白(NA)的结构及基因特性的不同可分为若干亚型，如Hmi、H5m及H3N2等。IAV在上个世纪至少引起三次大规模的流感爆发，其中最严重的是1918-1919年间爆发的西班牙流感，造成了超过4000 万人死亡。自2009年4月以来，发源于墨西哥的Hmi亚型的甲型流感病毒造成了世界范围的流感爆发，给人类的健康带来了巨大威胁。据世界卫生组织统计，全球每年约有6亿人感染流感，约30万人死于流感，直接经济损失超过100亿美元。目前，治疗甲型流感病毒的药物主要有两大类，分别是以离子通道蛋白(IC)为靶点的金刚烷胺和金刚乙胺以及以神经氨酸酶(NA)为靶点的扎那米韦(zanamivir)和奥司他韦(oseltamivir)。由于流感病毒是分节段的RNA病毒，容易发生变异并容易对现有药物产生耐药性，如欧洲已经出现了对金刚烷胺及奥司他韦产生耐药性的IAV毒株。此外，现有的抗流感病毒药物大多具有不同程度的毒副作用，尤其是离子通道阻断剂具有神经毒性等副作用。因此，研发低毒有效的抗IAV药物十分迫切。以糖为基础的药物研发是本世纪生化药物研究领域的热点之一。海洋多糖特别是来源于褐藻的酸性多糖具有良好的抗病毒作用。国内外大量研究表明，褐藻多糖及其衍生物具有抗人类免疫缺陷病毒HIV及甲型流感病毒IAV的显著活性(Miao et al. ,Biochem. Pharmacol.，2004，68 :641-649 ；Lee et al.,Chem. Pharm. Bull.，2004，52(9) :1091-1094)。 但是多糖药物的分子量大，溶解性和吸收性较差，导致其生物利用度很低从而限制了其在临床上的应用。国内外学者已经报道了一些关于褐藻寡糖的制备和应用方面的专利 (ZL01107952. 5，CN1414002A, CN1562050A, Cm01037456A)，但是还没有关于寡聚甘露糖酸酸在抗甲型Hmi流感病毒方面的研究和应用报道。
技术实现思路
针对现有技术中治疗甲型流感病毒的药物容易产生耐药性且具有毒副作用的缺点，本专利技术提供了寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用。本专利技术提供的寡聚甘露糖醛酸(OM)具有其分子量小、溶解性和稳定性好的特点，并且此寡聚甘露糖醛酸在体内外实验中都呈现出很好的抗甲型Hmi流感病毒的活性。为实现上述专利技术目的，本专利技术采用下述技术方案予以实现本专利技术提供了寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用。所述寡聚甘露糖醛酸的糖残基是由D-甘露糖醛酸组成，并以β-1，4-糖苷键连接，重均分子量为< 6KD，其分子式可表述为[C6H8OJn，其中η = 2_34。对技术方案的进一步改进所述寡聚甘露糖醛酸在浓度为40 μ mol/L以上可显著抑制甲型Hmi流感病毒在狗肾上皮细胞(MDCK)中的感染和增殖。对技术方案的进一步改进所述寡聚甘露糖醛酸在40mg/kg/day的剂量下可显著减轻甲型Hmi流感病毒IAV感染引起的小鼠肺部炎症。对技术方案的进一步改进对IAV病毒感染小鼠的肺指数抑制率达到34. 9%，对于IAV感染小鼠的死亡保护率达到50%。与现有技术相比，本专利技术的优点和积极效果是本专利技术选取来源于海洋褐藻的低分子量的新型寡聚甘露糖醛酸OM为研究对象，在体内外水平上揭示其抗甲型Hmi流感病毒感染和增殖的作用。本专利技术经实验证实寡聚甘露糖醛酸OM可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒对于狗肾上皮细胞的感染和增殖过程，其作用效果与阳性对照药利巴韦林相近。寡聚甘露糖醛酸 OM可以显著减轻甲型Hmi流感病毒感染引起的小鼠肺部炎症，减轻流感引起的小鼠体重下降症状，从而对小鼠起到治疗和保护作用。此外，寡聚甘露糖醛酸OM还可以显著减少IAV 感染引起的小鼠死亡，延长生存时间。本专利技术证实寡聚甘露糖醛酸OM无论在细胞水平还是动物水平上都可以很好地抑制甲型Hmi流感病毒的感染和增殖过程，揭示该化合物具有开发成抗甲型流感病毒药物的广阔前景。结合附图阅读本专利技术的具体实施方式后，本专利技术的其他特点和优点将变得更加清林疋。附图说明图1表明本专利技术中寡聚甘露糖醛酸OM对于感染甲型Hmi流感病毒小鼠的死亡保护作用。图1中，病毒对照组为只感染病毒而不加药的模型对照组；利巴韦林组为阳性药处理组；寡糖OM组为寡聚甘露糖醛酸处理组；给药剂量为40mg/kg/day ；病毒对照组给予同样体积的生理盐水。具体实施例方式下面结合附图和具体实施方式对本专利技术的技术方案作进一步详细的说明。本专利技术采用酸降解法从海藻多糖褐藻胶中制备并分离获得低分子量的寡聚甘露糖醛酸OM(在专利ZLOl 107952. 5和ZLOl 127533. 2中记载有寡聚甘露糖醛酸OM的制备方法)，并试验其在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用。本专利技术制得的所述寡聚甘露糖醛酸OM的糖残基是D-甘露糖醛酸，并以β-1， 4-糖苷键连接，重均分子量为< 6KD，其分子式可表述为[C6H8OJn，其中η = 2_34。按照国际公认的方法，评价了它对甲型Hmi流感病毒的体内外感染和增殖的影响。实施例1、寡聚甘露糖醛酸OM体外抗甲型Hmi流感病毒增殖作用利用甲型流感病毒小鼠适应株Hmi (A/PR/8/34，中科院武汉病毒所提供)感染狗肾上皮细胞(MDCK)建立细胞模型，并利用此细胞模型结合细胞病变(CPE)抑制试验和噻唑篮(MTT)比色法分别检测寡聚甘露糖醛酸OM对于IAV的抑制活性以及细胞毒性的大小，并且计算半数抑制浓度IC50和半数细胞毒性浓度CC50。阳性对照药物选择利巴韦林。实验结果如表1所示，寡聚甘露糖醛酸OM对于IAV的抑制活性非常显著(IC5tl = 38. 3 μ M)，且细胞毒性较小(CC5tl = 420 μ Μ)，治疗指数SI (CC50/IC50)达到11.0。与广谱的抗病毒药物利巴韦林相比，寡聚甘露糖醛酸OM起效的药物浓度更低，IC5tl值远小于利巴韦林(IC5tl = 91.3 μ M)，且两者的治疗指数(Si)都大于10.0。说明寡聚甘露糖醛酸OM具有较好的体外抑制甲型流感病毒增殖的作用。表1 寡聚甘露糖醛酸OM体外抗甲型Hmi流感病毒活性 权利要求1. 一种寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用。2.根据权利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用， 其特征在于所述寡聚甘露糖醛酸的糖残基是由D-甘露糖醛酸组成，并以β -1，4-糖苷键连接，重均分子量为<6 kDa，其分子式可表述为[C6H8OJn，其中n=2-34。3.根据权利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流感病毒药物中的应用， 其特征在于所述寡聚甘露糖醛酸在浓度为40 Mfflol/L以上可显著抑制甲型Hmi流感病毒在狗肾上皮细胞中的感染和增殖，半数抑制浓度(IC5tl)为38. 3 μ M04.根据权利要求1所述的寡聚甘露糖醛酸在制备抗甲型Hmi流本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：王伟，于广利，郝翠，管华诗，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：
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