适合稻曲病菌生长的培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种适合稻曲病菌生长的培养基，培养基主体为由以下重量含量的成分组成：蔗糖0.1％‑5％，蛋白胨0.1％‑5％，结冷胶0.1％‑1％，Mg

Medium suitable for the growth of rice blast fungi

The invention discloses a culture medium suitable for the growth of ustilaginoideavirens, medium body weight by the following components: sucrose 0.1% peptone 0.1% 5%, 5%, 0.1% gellan gum 1%, Mg

【技术实现步骤摘要】
适合稻曲病菌生长的培养基
本专利技术涉及生物
，具体地说，是涉及一种适于稻曲病菌培养的培养基。
技术介绍
水稻稻曲病菌有性态为Clavicepsoryzae-sativaeHashioka，属于子囊菌门麦角菌科真菌，无性态为Ustilaginoideavirens(Cooke)Takahashi，异名：U.oryzae(Pat)Bref，属无性菌类绿核菌属，主要侵染水稻穗部引起的真菌病害。病理学研究发现，U.virens从小穗的外稃和内稃间隙入侵，形成大于谷粒的稻曲球且表面覆盖大量的黄色或墨绿色厚垣孢子，病粒中心为菌丝组织密集构成的白色肉质块，其外围因产生厚垣孢子的菌丝成熟度不同，可分为三层：外层最早成熟，呈墨绿色或橄榄绿色；第二层为橙黄色；第三层为黄色。稻曲病又称假黑穗病、绿黑穗病、青粉病、谷花病等。我国早在明朝李时珍《本草纲目》中便有指稻曲病菌子实体为“粳谷奴”的记载。该病在亚洲、美洲和非洲的30多个国家及我国各稻区都有不同程度发生。一般穗发病率为4％～6％，严重达50％以上，粒发病率为0.2％～0.4％，高的可达5％以上。它不仅使秕谷率、青米率、碎米率增加，局部田块减产20％～30％，能产生对人和牲畜有剧毒作用的真菌毒素，而且当稻谷中含有0.5％病粒时能引起人，畜中毒。自20世纪70年代以来，由于水稻品种的变化、耕作制度的改变和化学肥料的大量使用，以及杂交水稻的问世等因素，稻曲病的发生及危害呈加重趋势，已成为中国及世界上许多稻区的主要病害之一。稻曲病菌生长缓慢，在其离体培养研究中效率低下，且培养效果不理想，不能达到理想的培养效果，不利于相关方面研究工作进展。众所周知，真菌培养的效果、经济性和效率起决定性作用的是培养基，培养基的优化是建立高效的真菌培养试验过程的核心环节。因此，根据稻曲病菌在生长、代谢和不同种的试验生长表达过程中的营养需求，设计稻曲病菌培养基中营养物的成分、含量和配比是工作的重要内容。市场上缺乏专门培养稻曲病菌的培养基，实验室所用的稻曲病菌培养基是培养一般真菌的培养基成品，稻曲病菌在市面上常见的成品培养基上生长缓慢，不能满足试验的高效率要求。真菌培养基的组成成分不外乎碳源、氮源、无机盐和凝固剂；碳源即碳水化合物，氮源即蛋白质，氨基酸，它们是菌体生长和代谢所必需物质的前体物质，可合成真菌自身所需的结构蛋白以及生化反应中必不可少的生物酶，还直接参与次生代谢产物的生物合成，同时也是合成其他生物分子的代谢中间体，还可作为底物提供细胞生理活动所必需的能量，是细胞生长、代谢和产物生产的重要营养物质。无机盐含有磷酸缓冲物，Mg2+，NaCl，Fe2+等无机盐离子，Ph值为7.0，无机盐类在微生物生命活动中的主要功能有：构成菌体的成分，作为辅酶或酶的组成部分或维持酶的活性，调节细胞渗透压、氢离子浓度、氧化还原电位等，某些是某些酶如蛋白酶的激活剂。凝固剂是固体培养基必须的成分，起到使培养基其他成分凝固，有利于病菌生长，及保水的作用。据研究调查，做稻曲病菌培养相关的研究所所用的稻曲病菌培养基大多为市场上商品化培养基，马铃薯蔗糖琼脂培养基，马铃薯葡萄糖琼脂培养基，胁本哲氏培养基和大米离培养基，培养的具体情况为培养30天时，稻曲病菌菌丝生长情况为，PDA培养基：60.3mm；PSA培养基：69.8mm；胁本哲氏培养基：59.6mm；大米粒培养基：65.9mm，稻曲病菌在这些培养基上生长缓慢，这对稻曲病菌的科学调查及防治研究带来极大的不便，效率低下是研究稻曲病菌的一道门槛。结冷胶可作为增稠剂、稳定剂。2011104555227的专利技术告知了《一种培养分离难培养细菌的培养基》，其配方为：每100mLVL55培养基中加入0.3mL氨基酸溶液、10μL溶液I(微量元素)、0.3mL溶液II(有机酸)、0.3mL溶液III(有机糖类)及1.5wt％结冷胶(gellangum)。该培养基可以高效地分离大量难培养细菌。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是提供一种适合稻曲病菌生长的培养基，即，提供一种专用于稻曲病菌培养的蛋白胨蔗糖结冷胶培养基P.S.G。为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种适合稻曲病菌生长的培养基，培养基主体为由以下重量含量(％)的成分组成：作为本专利技术的适合稻曲病菌生长的培养基的改进：在1kg培养基主体中加入二磷酸氢钾25±3mg，氯化钠125±10mg，硫酸亚铁5±1mg，钼酸钠5±1mg，硫酸锰5±1mg，碳酸钙100±10mg，得适合稻曲病菌生长的培养基。作为本专利技术的适合稻曲病菌生长的培养基的进一步改进：Mg2+为硫酸镁或硫酸镁水合物。作为本专利技术的适合稻曲病菌生长的培养基的进一步改进：培养基主体中，蔗糖为1％，蛋白胨为2％，结冷胶为0.3％，Mg2+为0.02％。作为本专利技术的适合稻曲病菌生长的培养基的进一步改进：水为超纯水。本专利技术旨在提供稻曲病菌快速生长培养基(即，适于稻曲病菌生长的培养基)，具体涉及培养基配方及结冷胶在真菌培养方面的应用。专利技术人在专利技术过程中，首先根据常用的培养基各组成分的比例，选择不同的成分配方组合成培养基，同时间培养同一批稻曲病菌，根据试验情况记录病菌生长情况，从中筛选出稻曲病菌生长情况最佳的培养基，并将结冷胶作为凝固剂代替琼脂，并通过添加合适含量的Mg2+来实现解决结冷胶不易凝固的技术性问题，筛选得到最优稻曲病菌培养基21天即可长到72.5mm，明显提高培养效率。在本专利技术中，蔗糖(C12H22O11)作为碳源，主要为稻曲病菌生长和生化代谢表达提供必要的能量供给；蛋白胨不但作为氮源、还可为微生物生长提供所需的生长因子；无机盐为P，Mg，Na等无机盐离子的混合物，以适合微生物生长的结冷胶作为凝固剂。在本专利技术中，Mg2+的添加量足以使结冷胶凝固。离子浓度，尤其是Mg2+的浓度会对稻曲病菌的生长造成一定的影响，不同浓度的离子状态下稻曲病菌的生长情况不同，本专利技术找到最适于稻曲病菌生长的Mg2+浓度，在可以使结冷胶凝固的同时，稻曲病菌也可以以较好的状态生长。与其他培养真菌的培养基相比，本专利技术的P.S.G能明显提高稻曲病菌的生长速率，提高稻曲病生长的效果。本专利技术具有如下技术优势：(1)本专利技术的培养基能有效提高稻曲病菌的生长速率，缩短培养稻曲病菌所需的时间；(2)所培养的稻曲病菌丝健康，不会出现营养不良的状况；(3)本专利技术的培养基所含成分、所用原材料易获得、价格低廉，具有很好的使用成本和经济性；(4)本专利技术的培养基配制及使用方便，适于大规模生产与使用。(5)本专利技术的培养基将结冷胶作为凝固剂替代琼脂，结冷胶其他同类产品相比具有用量少，弹性、硬度和凝固点、熔点可调节，形成的凝胶具有很高的强度和透明度，热稳定性好且耐酸碱等特点。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术进行进一步描述，但本专利技术的保护范围并不仅限于此：实施例1、一种适合稻曲病菌生长的培养基P.S.G，该培养基主体由以下重量含量(％)的成分组成：蔗糖1％，蛋白胨2％，结冷胶0.3％，Mg2+0.02％，余量为水(超纯水)；Mg2+为硫酸镁。在上述培养基主体中加入以下含量的无机盐：二磷酸氢钾0.0025％，氯化钠0.0125％，硫酸亚铁0.0005％，钼酸钠0.0005％，硫酸锰0.0005％，碳酸钙0.01％。即，在1kg培养本文档来自技高网...

【技术保护点】
适合稻曲病菌生长的培养基，其特征是培养基主体为由以下重量含量的成分组成：

【技术特征摘要】
1.适合稻曲病菌生长的培养基，其特征是培养基主体为由以下重量含量的成分组成：2.根据权利要求1所述的适合稻曲病菌生长的培养基，其特征是：在1kg培养基主体中加入二磷酸氢钾25±3mg，氯化钠125±10mg，硫酸亚铁5±1mg，钼酸钠5±1mg，硫酸锰5±1mg，碳酸钙100±10mg，得适合稻曲病菌生长的培养基。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王蒙岑，刘晓玉，杜永均，钱圆，朱国念，
申请(专利权)人：浙江大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33