吴茱萸中新喹诺酮类生物碱及其制备方法、应用和药物组合物技术

本发明专利技术公开了从吴茱萸中提取的一种新喹诺酮类生物碱化合物1，及其制备方法，以及含有新喹诺酮类生物碱类化合物的药物组合物，和在神经保护药物中的应用:特别是老年痴呆。药理实验表明本发明专利技术化合物体现了神经保护活性，即在硝普钠损伤原代神经元模型和谷氨酸诱导原代神经元毒性模型中均具有良好的神经保护活性。

【技术实现步骤摘要】
吴茱萸中新喹诺酮类生物碱及其制备方法、应用和药物组合物
本专利技术涉及化合物提取分离领域，特别涉及吴茱萸中新喹诺酮类生物碱及其制备方法、应用和药物组合物。
技术介绍
吴茱萸（Evodiarutaecarpa(Juss.)Benth.），别名吴萸、茶辣、漆辣子、臭辣子树、左力纯幽子、米辣子等。通常分大花吴茱萸、中花吴茱萸和小花吴茱萸等几个品种。小乔木或灌木，高3-5米，嫩枝暗紫红色，与嫩芽同被灰黄或红锈色绒毛，或疏短毛。生于平地至海拔1500米山地疏林或灌木丛中，多见于向阳坡地。各地有小或大量栽种。嫩果经泡制凉干后即是传统中药吴茱萸，简称吴萸，是苦味健胃剂和镇痛剂，又作驱蛔虫药。其性热味苦辛，有散寒止痛、降逆止呕之功，用于治疗肝胃虚寒、阴浊上逆所致的头痛或胃脘疼痛等症。随着我国老龄化社会进程的加快，老年人口数量不断增加。据统计，截止至2020年，我国老龄化水平将达到17.17％，各种老年病患者人数也呈上升趋势。在发达国家，老年痴呆症作为最常见的神经退行性疾病，分别成为了仅次于心血管病、癌症的第三、四大死亡杀手。而我国神经退行性疾病患者的人数，已位居世界各国之首。目前尚未有防治神经退行性疾病的特效药物可供选择，因此开发出具有靶向性，副作用小，能有效控制并逆转病情的药物势在必行。我国中药资源丰富，毒副作用小，从中药中寻找新型神经退行性疾病治疗药物是新药开发研究的重要途径之一。但是中药成分复杂，有效成分不明确，疗效不稳定，作用机理不清楚，严重影响了临床上的使用以及中药进入国际主流市场，因此从传统药物的天然资源中寻找构型、机制明确的特效神经退行性疾病治疗药物是医药科研工作者今后相当长时间内的迫切任务。
技术实现思路
吴茱萸95%乙醇提取物具治疗神经退行性疾病的作用，从有效部位中分离得到1个新喹诺酮类生物碱，药效学评价显示其具有很好的神经保护的作用。本专利技术的目的之一在于提供一种吴茱萸中新喹诺酮类生物碱。本专利技术的目的之二在于提供了一种吴茱萸中新喹诺酮类生物碱的制备方法。本专利技术的目的之三在于提供了一种吴茱萸中新喹诺酮类生物碱在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的应用。本专利技术的目的之四在于提供一种药物组合物，含有吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物1。本专利技术是通过以下技术方案实现的：吴茱萸中新喹诺酮类生物碱，具有化合物1所示结构1。吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物的制备方法，每制备化合物1,10mg，包括如下步骤：a.吴茱萸药材10kg，用90%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液减压浓缩得浸膏(800g)；b.将该浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、正丁醇多次萃取，分别减压回收溶剂。依次得到各萃取物32、200、320g；c.三氯甲烷萃取物200g经过硅胶(200-300目，3kg)柱色谱粗分，CHCl3/CH3COCH3(100:1→1:100)梯度洗脱,每个流份2000ml,共收集167个流分，之后将167个流份通过TLC薄层检识合并得到5个流Fr(1-5)；d.Fr.3(30g)经开放ODS柱色谱(MeOH:H2O,40:20-90:10)洗脱,检识合并后得到Fr.A及Fr.B两部分。Fr.B在经硅胶柱色谱(乙酸乙酯:甲醇，20:1-1:1)洗脱得到Fr.B1-B7；e.Fr.B7经硅胶柱色谱(C:M,20:1-1:1)洗脱所得Fr.7a3部分经过反复硅胶柱色谱及SephadexLH-20纯化后再经pHPLC(60%MeOH:H2O)得新喹诺酮类生物碱类化合物1（10mg）。吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物1在制备预防和/或治疗神经退行性疾病药物中的应用。所述神经退行性疾病为脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。所述痴呆为早老性痴呆或血管性痴呆。一种药物组合物，其中，含有吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物1以及药效学上可接受的载体。根据本专利技术的思路，对吴茱萸中新喹诺酮类生物碱类化合物进行了神经保护相关的药理实验。氧化应激是导致神经元凋亡丢失的重要原因，是神经退行性疾病的共性特征。引起氧化应激的原因有很多种，如脑缺血，神经炎症，兴奋性递质释放重摄取机制障碍，重金属暴露，神经毒性剂暴露等，表现为细胞内自由基增加，引起脂质过氧化，线粒体功能障碍继而激活凋亡通路等。谷氨酸，硝普钠虽然引发神经元凋亡丢失的机制不一，但都是近年来许多国内外学者倡导的神经元损伤模型的诱发剂。研究认为，脑内兴奋性递质谷氨酸过量通常引起神经元膜上NMDA受体过度激活，从而导致神经元发生氧化应激并丢失，而硝普钠是一种NO的供体，NO可传递氧自由基透过线粒体膜，使线粒体功能失调继而发生凋亡，其发生机制，病理生理改变与临床老年痴呆患者脑内表现具有相似性。应用谷氨酸，硝普钠制作神经元损伤模型条件要求低，技术易于掌握，可靠性强，重复性好，因此在本研究中，采用谷氨酸过载，硝普钠(SNP)暴露制作神经元损伤模型。本专利技术提供的一个吴茱萸新喹诺酮类生物碱在体外谷氨酸，硝普钠诱发的大鼠大脑皮层神经元死亡的试验中均显示出优良的神经保护作用。阳性对照药物为依达拉奉(edaravone)，依达拉奉是以自由基清除为主要作用机制的新型抗老年痴呆药物，能有效抑制因脑缺血导致的脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化应激损伤。对硝普钠诱发大鼠大脑皮层神经元凋亡的保护作用体外研究中，将本专利技术化合物与硝普钠(350μM)用神经元培养基稀释，和大鼠大脑皮层神经元温孵24小时后，MTT法测定细胞存活率，同时进行正常对照组和阳性对照组试验。实验结果表明，正常对照组加入硝普钠后570nm处吸光度值(OD570)明显降低，阳性对照组和本专利技术化合物OD570明显回升，与依达拉奉(edaravone)的细胞存活率相当，部分新化合物的细胞存活率比依达拉奉高。因此本专利技术有益效果：吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物1可用于制备预防和/或治疗神经退行性疾病的药物。优选的神经退行性疾病选自脑卒中、痴呆、神经炎症、重金属中毒、神经毒剂中毒。优选的痴呆选自早老性痴呆、血管性痴呆。附图说明图1吴茱萸的提取分离流程图。具体实施方式下面的实施例及药理活性实验进一步说明本专利技术，但并不意味着对本专利技术的任何限制。实施例1：吴茱萸中新喹诺酮类生物碱化合物1的制备方法，包括如下步骤：吴茱萸药材10kg，用90%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液减压浓缩得浸膏(800g)。将该浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、正丁醇多次萃取，分别减压回收溶剂。依次得到各萃取物32、200、320g。三氯甲烷萃取物200g经过硅胶(200-300目，3kg)柱色谱粗分，CHCl3/CH3COCH3(100:1→1:100)梯度洗脱,每个流份2000ml,共收集167个流分，之后将167个流份通过TLC薄层检识合并得到5个流Fr(1-5)；Fr.3(30g)经开放ODS柱色谱(MeOH:H2O,40:20-90:10)洗脱,检识合并后得到Fr.A及Fr.B两部分。Fr.B在经硅胶柱色谱(乙酸乙酯:甲醇，20:1-1:1)洗脱得到Fr.B1-B7。Fr.B7经硅胶柱色谱(C:M,20:1-1:1)洗脱所得Fr.7a3部分经过反复硅胶柱色谱及SephadexLH-20纯化后再经pHPLC(60%MeOH:H2O)得新喹诺酮类化合物1（10mg）本文档来自技高网...

【技术保护点】
吴茱萸中新喹诺酮类生物碱类化合物，其特征在于具有化合物 1所示结构

【技术特征摘要】
1.吴茱萸中新喹诺酮类生物碱类化合物，其特征在于具有化合物1所示结构1。2.吴茱萸中新喹诺酮类生物碱类化合物的制备方法，其特征在于，每制备化合物1，10mg包括以下步骤：a.吴茱萸药材10kg，用90%乙醇回流提取3次，每次2h，合并提取液减压浓缩得浸膏(800g)；b.将该浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、正丁醇多次萃取，分别减压回收溶剂；依次得到各萃取物32、200、320g；c.三氯甲烷萃取物200g经过硅胶(200-300目，3kg)柱色谱粗分，CHCl3/CH3COCH3(100:1→1:100)梯度洗脱,每个流份2000ml,共收集167个流分，之后将167个流份通过TLC薄层检识合并得到5个流Fr(1-5)；d.Fr.3(30g)经开放ODS柱色谱(MeOH:H2O,40:20-90:10)洗脱,检识合并后得到Fr....

【专利技术属性】
技术研发人员：庄鹏宇，王晓霞，陈金铭，张丹阳，林晓莹，杨宇柯，
申请(专利权)人：华北理工大学，
类型：发明
国别省市：河北,13