新的活性化合物制造技术

本发明专利技术涉及一类新的生物活性化合物，其制备方法及其在治疗上的用途。更具体地说，本发明专利技术提供致免疫共轭物，该共轭物用于产生对与肿瘤有关的碳水化合物结构或在感染病原体上和／或被感染宿主细胞上表达的碳水化合物结构的Ｔ细胞免疫性。所述的致免疫共轭物包括，（ｉ）能够连接ＭＩＣ Ｉ类分子的肽组分；以及（ｉｉ）碳水化合物组分，该组分具有所述碳水化合物结构的致免疫特异性。（*该技术在2013年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一类新的活性化合物，它们的制备方法以及它们在治疗上的用途。更具体地，本专利技术提供了用于产生T细胞免疫性的致免疫共轭物，该T细胞免疫性针对与肿瘤有关的碳水化合物结构或表达在感染病原体和/或感染宿主细胞上的碳水化合物结构。以细胞为媒介的免疫性脊椎动物免疫系统对侵入肌体的微生物和恶性细胞始终是有效的。众所周知，适应性免疫系统第二次遇到抗原要比第一次遇到抗原显示出强得多的响应。这一事实可通过接种得到开发应用，其原理是诱发被称为免疫记忆的长期免疫状态。免疫记忆需要活化专属于感染病原体的T细胞。T细胞通过识别-借助于T-细胞接收器(TCR)-来自于病原体的肽片段检测出细胞内的感染。然而，大多数T细胞都是“MHC限制的”，即它们仅能识别结合在高度多形态膜蛋白上的，被主要组织相容性复合物(MHC)的Ⅰ类和Ⅱ类基因编码的以及呈现在附属细胞(指定为抗原呈现细胞或APC)表面上的肽的复合物，抗原在附属细胞中处理。根据粘接受体分子的种类，可将T细胞分类为CD4+或CD8+。CD4粘附接受体识别MHCⅡ类分子，CD8连接Ⅰ类分子;而且，对MHC的限制又进一步取决于MHC分子对TCR某些部位的直接键合(Jorgensen等，1992)。CD4+T细胞(辅助性T细胞)激活巨噬细胞和产生抗体的B细胞，而CD8+T细胞(毒性T细胞，CTL)杀死被病毒和胞内细菌感染的细胞。抗原可通过两种途径中的一种产生，这取决于抗原的起源。在第一种途径中，细胞外的异物被特殊的含抗原细胞(通常是巨噬细胞或B-细胞)吞噬，该含抗原细胞分解异物，使生成的抗原与Ⅱ类MHC分子相连。该复合体被运送至细胞表面并给予辅助性T细胞。第二种途径通常涉及对在病毒感染的或恶性细胞内制备的蛋白质的处理。在细胞内处理这些蛋白质，也就是使这些蛋白质部分分解，从而形成肽碎片。然后，这些肽碎片与Ⅰ类MHC分子结合，被送至细胞表面给予毒性T细胞。通过分离的途径产生抗原具有生物学意义。从环境得到的这些抗原最终会诱发B细胞产生抗体，这些抗体能够保护有机体免受外源性抗原的后续侵袭。另一方面，在畸型或不良细胞(例如病毒感染细胞或恶性细胞)中产生畸型结构的抗原的情况下，最好是使免疫系统激活，从而最终导致杀死不良细胞。MHC-连接的肽最近几年，对与MHCⅠ和Ⅱ类分子相结合的肽的分析有了显著进步(综述可参考例如Janeway，1991;Rotzschke & Falk，1991;Stauss，1991;Tsomides & Eisen，1991)。因此已发现，MHCⅠ类分子连接只含约8-12个氨基酸的短链肽，MHCⅡ类分子连接约10-17个氨基酸的肽。进一步发现，从制备抗原产生的肽片段被转移至细胞表面，该细胞表面连接于MHC分子的细胞外部分上的沟中。对于MHCⅠ型分子，发现位于沿肽链确切位置上的单氨基酸仙链连在钛连接的沟中(Madden等，1991)。连接它们的这些袋囊和氨基酸的位置对于不同的等位基因变种可以不同。因此，不同的MHCⅠ类分子可以连接不同的组合肽链，并且为各种MHC等位基因找到了特定等位基因型主(Van Bleek & Nathenson，1990;Falk等，1991;Jardetzky等，1991)。例如，连接HLA-A 2.1的肽优选在2位含有L或M以及在9位，即C-端位置含有V或L(Rotzschke & Falk，1991)。在鼠体中能够连接MHCⅠ类分子的肽的例子是ASNENMETM和SGPSNTPPEI(SEQ ID NO1和2)，它们都存在于H-2-Db分子中。在人体中能够连接MCHⅠ类分子的肽的一个实例是GILGFVFTL(SEQID NO3)，其存在于HLA-A2.1分子中(Falk等，1991)。Elofsson等(1991)描述了将MHC(Ⅱ类)连接的肽DYGILQINSR(SEQ ID NO19)与碳水化合物4-O-α-D-吡喃半乳糖基-β-D-吡喃半乳糖相结合。WO 89/07448披露了调节宿主免疫反应的组合物，使用了与钛连接的MHCⅠ类分子同源的肽。作为T细胞特定抗原决定基载体的合成肽CTLs可从涂覆三硝基氯苯(TNP)的小鼠脾制备，并为杀死TNP-涂覆的同源靶细胞而选择。现已发现，一些如此制备的CTLs能够识别短MHCⅠ类(Kb)键合的10氨基酸肽，对于该肽，TNP连到内部(6位)的赖氨酸残基上。而且，一些CTLs可杀死处理和提供连在不同载体蛋白质(MSA、BSA和KLH)上的TNP的同源靶细胞，还可杀死TNP-涂覆的同种靶细胞(Ortmann等，1992)。与肿瘤有关的抗原能够从外部通过免疫系统(基于肿瘤细胞的畸型特征)识别肿瘤的可能性为发展有效的癌治疗提供了很有价值的机会。在实验系统中，肿瘤显示出高的致免疫性，并且触发的免疫反应足以使得肿瘤细胞减少。但在临床阶段，作为多重遗传性和适应性变异产物的肿瘤，当其成为医学上的难题时，却具有很低的致免疫性。因此，几乎没有发现真正的与肿瘤有关的蛋白质抗原，即仅在肿瘤细胞中发生作用的抗原。与缺乏同肿瘤有关的蛋白质抗原相反，针对肿瘤细胞提出了各种畸变的碳水化合物(CHO)结构(综述参见Hakomori，1991)。在决定CHO链组合的酶系统中，这些碳水化合物是作为畸变的结果而形成的。由于CHO抗原决定基(在正常细胞上不存在或被掩盖)在肿瘤细胞上的表达，这些CHO链常常被缩短。畸变CHO结构在肿瘤细胞上以糖蛋白、糖脂的形式存在，或以这两种形式的复合物形式存在。糖蛋白通常被分泌进入体液，而糖脂在很大程度上限于膜的范围内。与肿瘤有关的碳水化合物抗原的实例有GM3神经节苷脂，其已在小鼠黑瘤B16细胞里得到鉴定(Nores等，1987);与人黑瘤细胞有关的GD3神经节苷脂(Portoukalian等，1979);以及在Burkitt淋巴瘤细胞中得以表达Gb3神经节苷脂(Wiels Brodin等，1988)。与传染性疾病有关的碳水化合物与传染性疾病有关的碳水化合物可在传染性病原体、从这些病原体上分泌或脱出的物质或在感染宿主细胞表面上得以表达。有一些被证实的或公认的碳水化合物类T细胞反应的实例，其与被感染病原体如鼠伤寒沙门菌(Robertsson等，1982)，利什曼原虫属菌(Moll等，1989)、白色念珠菌(Domer等，1989)和分枝杆菌(Crowle，1988)引起的疾病有关。Hansen等(1990)描述了与HIV感染有关的碳水化合物抗原。肿瘤的免疫疗法肿瘤的免疫疗法在医学上已有很长的历史，并尝试过非专一性疗法和专一性疗法。在非专一性疗法中，通过各种因子如BCG、IL-2等活化免疫系统，以便提高业已存在的对肿瘤的本底免疫性。在专一性疗法中，使用肿瘤细胞或由此得到的物质培养疫苗。以T细胞为中介的免疫反应在抗肿瘤免疫方面起着关键作用。尽管T细胞对蛋白质反应的活化机理在某种程度上(参见上文)已进行了表征，但对碳水化合物来说这种活化机理基本上是未知的。由于MHC蛋白质的肽连接沟施加的结构上的限制，对MHC分子来说，碳水化合物抗原是差的候选对象。然而，Ishioka等(1992)指出CHO部分可以成为能本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种能够产生对碳水化合物结构的Ｔ细胞免疫性的肽／碳水化合物共轭物，所述的共轭物包括（ｉ）能够连接ＭＨＣ Ⅰ类分子的肽组分；以及（ｉｉ）碳水化合物组分，该组分具有所述碳水化合物结构的致免疫特异性。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：M扬达尔，
申请(专利权)人：M杨达尔，
类型：发明
国别省市：SE[瑞典]