一种萝芙木快速增殖培养基及其应用制造技术

本发明专利技术属于通过组织培养技术的植物再生领域，具体涉及到一种萝芙木快速增殖培养基及其应用，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.5‑1mg/L 6‑苄基嘌呤、0.2‑0.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、0.1‑0.2mg/L赤霉酸、0.5‑1g维生素E、1000‑1500mg/L萝芙木乳汁和30‑40g/L蔗糖，本发明专利技术培养的萝芙木幼苗移栽成活率在90％以上，并且培养基成分来源广泛，增殖速度快，增殖系数高，适合产业化。

A devilpepper rapid proliferation culture medium and its application

The invention belongs to the field of regenerative plants through tissue culture technique, specifically relates to a devilpepper rapid proliferation culture medium and its application, the proliferation medium was B5 medium, 0.5 1mg/L 6 6-BA, 0.2 0.5mg/L 2,4 two chlorophenoxyacetic acid, gibberellic acid, 0.1 0.2mg/L 0.5 1g vitamin E, 1000 1500mg/L and 30 devilpepper milk 40g/L sucrose, the invention of the cultivation of Rauvolfia seedlings survival rate was over 90%, and medium wide source, high speed proliferation, the proliferation coefficient is high, suitable for industrialization.

【技术实现步骤摘要】
一种萝芙木快速增殖培养基及其应用
本专利技术属于通过组织培养技术的植物再生领域，具体涉及到一种萝芙木快速增殖培养基及其应用。
技术介绍
萝芙木：直立常绿灌木，高可达3m，具乳汁，属于一种药材，功能主治镇静，降压，活血止痛，清热解毒。用于高血压病，头痛，眩晕，失眠，高热不退，外用治跌打损伤，毒蛇咬伤等。萝芙木根中分离出利血平、阿吗碱、萝莱碱、蛇根亭碱、阿吗灵、山马蹄碱、萝芙木甲素、锥洛斯明碱、霹雳萝芙辛碱、一种单萜类生物碱等多种生物碱，含量为1～2％，其中利血平具有良好的降压作用。萝芙木中尚含熊果酸0.2％，熊果酸的抗肿瘤作用广泛，极有可能成为低毒有效的新型抗癌药物。因此，萝芙木具有很高的药用价值，而且萝芙木的种植也已经得到国家的推广。由于连年的采挖，资源急剧减少，从20世纪80年代中期开始，生产厂家就把药用部位由根扩展到全株，而且为保护野生资源，满足企业生产需求，越来越多的研究机构开展了萝芙木规范化种植研究。萝芙木的繁殖主要是种子与扦插繁殖，但是种子繁殖发芽率低，生长速度慢，周期长等缺点，而扦插繁殖操作复杂，成活率低等缺点而不能广泛推广，因此，为了促进萝芙木快速繁殖，对萝芙木组织进行了培养基的研究，摆脱了外部环境对植株的影响，而且可以对优良的品种进行筛选，对品种进行优化，因此，植物培养基对萝芙木的快速繁殖十分重要。《红果萝芙木植物组织培养及快速繁殖》，张丽珍，等，江苏农业科学出版社，2015年第43卷第6期公开了红果萝芙木不同时期的培养基，以红果萝芙木茎段为外植体，研究其再生条件，结果表明：丛生芽诱导培养基为MS+1.0mg/L6－BA+0.05mg/LIBA；继代增殖、壮苗培养基分别为MS+0.3～0.5mg/L6－BA+0.02mg/LIBA、MS+0.1～0.2mg/L6-BA+0.01mg/LIBA；根分化的最适培养基为1/2MS+0.5mg/LNAA+0.2mg/LIBA。公开号为101731149A的中国专利申请公开了一种利用组织培养技术快速繁殖云南萝芙木的方法，该专利技术以萝芙木嫩枝带芽茎段作外植体，接种在启动培养基上诱导腋芽产生，启动培养基组成为MS+2.0-4.0mg/LBA+0.05-0.1mg/LNAA。增殖培养MS+2.5-5.0mg/LBA+0.1-0.5mg/LNAA，增殖系数为8-12，每4-5周重复继代一次。生根培养基为添加1.0mg/LNAA或IBA或NAA+IBA＝1.0mg/L的1/2MS培养基，5-6周后将生根苗移栽到炼苗基质中，20-30℃保湿遮阴炼苗3-4周转栽或大田种植，成活率达90％。此专利技术方法操作简单，繁殖速度快，遗传稳定性好，为工厂化育苗提供技术支撑。但是上述技术中增殖培养使用的是1个单位的MS培养基，铵态氮含量过高，容易伤害外植体，造成成活率低。
技术实现思路
为了解决现有技术的不足，本专利技术公开了一种萝芙木快速增殖培养基及其应用，本专利技术公开的培养基是在B5培养基的基础上，添加适量的植物激素，并且加入了萝芙木乳汁和蔗糖，极大地加快了萝芙木的快速增殖。一种萝芙木快速增殖培养基，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.5-1mg/L6-苄基嘌呤、0.2-0.5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.1-0.2mg/L赤霉酸、0.5-1g维生素E、1000-1500mg/L萝芙木乳汁和30-40g/L蔗糖。进一步的，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.8mg/L6-苄基嘌呤、0.35mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.15mg/L赤霉酸、0.8g维生素E、1300mg/L萝芙木乳汁和35g/L蔗糖。其中B5培养基的组成为大量元素：KNO32500，MgSO4·7H2O250，CaCl2·2H2O150，(NH4)2SO4134，NaH2PO4.H2O150；微量元素：KI0.75，H3BO33.0，MnSO4·4H2O10，ZnSO4·7H2O2.0，Na2MoO4·2H2O0.25，CoCl2·6H2O0.025，CuSO4·5H2O0.025；铁盐：Na2-EDTA37.3，FeSO4·7H2O27.8；有机成分：肌醇100，烟酸1.0，盐酸吡哆醇1.0，盐酸硫铵10，单位为mg/L。B5培养基的主要特点是含有较低的铵，而铵这一营养成分过多对萝芙木有抑制生长的作用，愈伤组织B5培养基上生长得更好。与现有技术相比，本专利技术添加萝芙木乳汁丰富了要培养加的营养物质，采用B5培养基是由于培养基中无机盐含量较低，而且本专利技术还使用了维生素E，防止植株愈伤组织发生褐化。具体实施方式通过以下具体实施例对本专利技术作进一步说明，使本领域技术人员更加理解本专利技术技术方案，但并非是对本专利技术的限制。本专利技术培养基购自北京拜尔迪生物技术有限公司供应的Sigma的B5培养基。试验涉及到的萝芙木品种为云南萝芙木；椰子汁：郑州绿尔生物科技发展有限公司。实施例1进一步的，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.8mg/L6-苄基嘌呤、0.35mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.15mg/L赤霉酸、0.8g维生素E、1300mg/L萝芙木乳汁和35g/L蔗糖。所述的快速增殖培养基的制备方法为：向B5培养基中加入6-苄基嘌呤、2,4-二氯苯氧乙酸、赤霉酸、维生素E、萝芙木乳汁和蔗糖，搅拌均匀即得。实施例2一种萝芙木快速增殖培养基，所述的增殖培养基组成为B5培养基、1mg/L6-苄基嘌呤、0.2mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.2mg/L赤霉酸、0.5g维生素E、1500mg/L萝芙木乳汁和30g/L蔗糖。所述的快速增殖培养基的制备方法与实施例1类似。实施例3一种萝芙木快速增殖培养基，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.5mg/L6-苄基嘌呤、0.5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.1mg/L赤霉酸、1g维生素E、1000mg/L萝芙木乳汁和40g/L蔗糖。所述的快速增殖培养基的制备方法与实施例1类似。对比例1进一步的，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.8mg/L6-苄基嘌呤、0.35mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.15mg/L赤霉酸、0.8g维生素E、1300mg/L椰子汁和35g/L蔗糖。与实施例1相比，区别是不添加萝芙木乳汁，替换为椰子汁。所述的快速增殖培养基的制备方法与实施例1类似。试验例1培养试验试验对象为：实施例1-3与对比例1制备的萝芙木快速增殖培养基。培养方法：采摘长势较优的萝芙木嫩枝，在无菌条件下，消毒后用水冲洗1个小时，剪取带节的2cm茎段作为外植体，接种在B5培养基上，诱导腋芽的产生，当腋芽处的不定芽生长到1-2cm时，进行增殖培养，将不定芽的顶芽和带芽茎段作为外植体接种于增殖培养基中，培养条件为24℃，光照时间为16小时，光照强度为2500LX，每20天将不定芽在增殖培养基上进行继代培养一次。具体结果如表1所示，数值均为平均值。表1增殖培养基上的生长状况(增值系数为一个腋芽长出的植株数)从表1中可以看出，本专利技术公开的实施例1-3培养基相对于对比例1培养基，增殖系数高，生长速度快，不定芽较粗，叶片为深绿色，而且愈伤组织不发生褐化，获得比较健壮的幼苗，幼苗质量更好。试验例2移栽成活率试验方法：将试验例1得到的丛生苗在增殖培养基上继续培养20天，生出若干根，移到普通房间，并将封口打开，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种萝芙木快速增殖培养基，其特征在于，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.5‑1mg/L 6‑苄基嘌呤、0.2‑0.5mg/L 2,4‑二氯苯氧乙酸、0.1‑0.2mg/L赤霉酸、0.5‑1g维生素E、1000‑1500mg/L萝芙木乳汁和30‑40g/L蔗糖。

【技术特征摘要】
1.一种萝芙木快速增殖培养基，其特征在于，所述的增殖培养基组成为B5培养基、0.5-1mg/L6-苄基嘌呤、0.2-0.5mg/L2,4-二氯苯氧乙酸、0.1-0.2mg/L赤霉酸、0.5-1g维生素E、1000-1500mg/L萝芙木乳汁和30-40g/L蔗糖。2.根据权利要求1所述的萝...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶宗耀，
申请(专利权)人：叶宗耀，
类型：发明
国别省市：广东,44