本发明专利技术涉及β－四氢咔啉羧酸的合成及纳米颗粒的制备；涉及液相法逐步接肽得到通式（１）的保护四肽中间体，脱Ｂｏｃ（叔丁氧羰基）后与Ｎ－Ｂｏｃ－β－四氢咔啉羧酸缩合，进一步经ＨＦ脱保护得到通式（２）的化合物；涉及四氢咔啉羧酸的纳米颗粒和通式（２）的化合物的体外和体内活性，例如涉及它们的抗血小板聚集作用和抗血栓作用。经体内和体外试验证明，本发明专利技术的化合物显示了优秀的抗血小板聚集活性，抗细胞粘附作用，以及抗血栓作用。（*该技术在2021年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
,它们的合成及其在医学上的应用的制作方法
本专利技术涉及β-四氢咔啉羧酸及其RGD缀合物，它们的合成及其在医学上的应用。研究GP IIb/IIIa受体与纤维蛋白α链及γ链结合的过程中，发现纤维蛋白之中存在的RGD序列是介导它自身与GP IIb/IIIa结合的关键序列(SamanenJ.，et al.，J.Med.Chem.，1991，34，3114)。专利技术人采用液相法合成了RGDS，RGDV和RGDF，并证实它们可以抑制血栓形成(赵明，彭师奇，含RGD四肽的合成与功能，药学学报，1997，32，271)。专利技术人注意到，β-四氢咔啉羧酸是中药薤白中的一种成分，具有抗血小板聚集活性(姚新生等，中国药物化学杂志，1995，5，134)。专利技术人通过Pictet-Spengler反应合成了四氢咔啉羧酸，发现常规方法所得该化合物的水溶性极差，不便进行各种生物活性测定。专利技术人曾报道，含RGD的四肽，例如RGDS，可以把溶血栓药物，例如尿激酶，输送到血栓形成部位，具有明确的靶向性(凌世长，赵明，彭师奇，RGDS修饰的脂质体作为药物载体导向溶栓的研究，北京医科大学学报，1994，26，174)。图2是含RGD四肽及对应的中间体的合成路线图。图3是咔啉羧酸-RGDAA缀合物的合成路线图。本专利技术按照图2所示的路线合成了通式(1)的保护四肽，在通式(1)中AA为L-Ser，L-Val或L-Phe残基。通式(1)的化合物经HF脱保护，得到对应的多肽RGDS，RGDV和RGDF。通式(1)的化合物经HCL脱保护得到通式为HCL.Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-AAoBzl的中间体，其中AA的定义与通式(1)同。本专利技术按照图3所示的路线将通式为HCL.Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-AAoBzl的化合物与N-Boc-β-四氢咔啉羧酸偶联，经HF脱保护，得到通式(2)的化合物，其中AA的定义与通式(1)同。本专利技术采用体外和体内的模型评价了β-四氢咔啉羧酸的纳米颗粒，RGDS、RGDV、RGDF以及通式(2)的化合物的抗血小板聚集活性，抗细胞粘附作用，以及抗血栓作用。结果表明，本专利技术提供的β-四氢咔啉羧酸的纳米颗粒和通式(2)的化合物，β-四氢咔啉羧酸-RGDAA缀合物，都显示优秀的抗血小板聚集活性，抗细胞粘附作用，以及抗血栓作用。因此，本专利技术的化合物可用于治疗血栓性疾病，例如血小板升高、脑血栓、冠心病、心肌梗塞、静脉血栓形成、栓塞性疾病，如脑动脉栓塞、肺栓塞等。为了进一步阐述本专利技术，下面给出一些实施例。值得指出的是这些实施例应理解为对本专利技术的解释，对本专利技术没有任何意义上的限制。实施例1.β-四氢咔啉羧酸的制备25ml1N的H2SO4，搅拌中加入5g(24.5mmol)色氨酸，再加75ml水，4ml(45.6mmol)38％的甲醛溶液，反应液变澄清，5Min左右析出大量固体，反应4小时后，滴加入8ml浓氨水，调PH到近中性，静置过夜，抽滤，滤饼用少量冷水洗，抽干，再干燥得固体(1)5.1g(浅黄色粉末，收率96％)MP280-282 C；EI-MS217(M+1)；H-NMR(DMSO)δ10.99(1H，s)，7.44(1H，d，7.5)，7.33(1H，t，8.0)，7.08(1H，t，8.0)，6.99(1H，t，7.5)，4.22(1H，d，4.8)，3.69(1H，dd，10.5，5.0)，3.14(1H，dd，10.5，2.4)，2.83(1H，ddd，10.5，5.0，2.4)实施例2N-Boc-β-四氢咔啉羧酸(2)的制备1.1g(5mmol)化合物87悬浮于15ml DMF中，加入1.4ml三乙胺，冰浴下搅拌直到溶液中悬浮颗粒大小均匀后，30min内滴加1.1g(7.7mmol)Boc-N3，24hr后升至40℃，3天后加入20％柠檬酸水溶液5ml，用乙酸乙酯萃取，有机层用MgSO4干燥，过滤，滤液减压蒸馏至干，残留物用CHCl3重结晶，得标题化合物0.9g(56％)mp165-170 TOF-MS317+，339+，3551H-NMR(DMSO-d6).1.46(s，9H，-Boc)，3.25~3.34(m，2H，4-H)，4.29~4.75(m，2H，1-H)，5.02~5.14(m，1H，3-H)，6.92~7.41(m，4H，Ar-H(5，6，7，8))，10.87(s，1H，9-H)，12.77(s，1H，-COOH)实施例3β-四氢咔啉羧酸纳米颗粒(1)的制备10ML去离子水中加入0.05ML浓H2SO4，搅拌中加入L-色氨酸1G，再加入20ML甲苯，0.02ML TWEEN80，剧烈搅拌，加入38％甲醛溶液0.8ML，反应4小时后，加入0.4ML浓氨水，静置1HR，分去甲苯层和上层清液(水层)，再加入10ML去离子水，搅拌2MIN后静置1HR，分去上清液，下层冻干得类白色疏松干粉。(TLC为纯点，与β-四氢咔啉羧酸对照RF相同)实施例4RGDS(6)的制备Boc-Ser(Bzl)OBzl33mg(0.10mmol)Cs2CO3溶于蒸馏水，加入到59mg(0.20mmol)Boc-Ser(Bzl)-OH的无水乙醇溶液中，40min后减压除去溶剂，残留物置干燥器过夜，得到的白色固体溶于无水DMF，滴加34mg(0.2mmol)溴苄，于50℃恒温搅拌16hr后，滤除CsBr沉淀，滤液减压蒸馏至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，5％硫酸氢钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩，残留物以石油醚研磨，得标题化合物76mg(99％)。HCl·Ser(Bzl)OBzl77mg(0.2mmol)Boc-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢，残留物用无水乙醚研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl63mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于3ml无水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将64mg(0.2mmol)HCl·Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8~9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液，饱和氯化钠水溶液，5％硫酸氢钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥。过滤，滤液在37℃减压浓缩至干，得到标题化合物114mg(98％)mp 101-103℃D20+15(C2，CHCl3)HCl·Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl116mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原本文档来自技高网...
【技术保护点】
以下结构式的保护的β－四氢咔啉羧酸化合物： ＊＊＊。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王超，琳娜，吴国锋，
申请(专利权)人：浙江医药股份有限公司新昌制药厂，
类型：发明
国别省市：33[中国|浙江]
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