一种恩格列净及其光学异构体的分离测定方法技术

本发明专利技术公开了一种恩格列净及其光学异构体的分离测定方法，该方法采用高效液相色谱法，以直链淀粉或纤维素衍生物类手性柱为色谱柱，分离测定恩格列净及其光学异构体，可用于恩格列净和含有恩格列净的药物组合物的质量控制。

Method for separating and determining the optical isomer of glibenclamide

The invention discloses a separation well farxiga and optical isomer determination method, the method of HPLC, with straight chain starch or cellulose derivatives as chiral column and determination of Don Glenn Jing and the separation of optical isomers, can be used for quality control of pharmaceutical compositions containing Don Glenn Jing and Don Glenn Jing.

【技术实现步骤摘要】
一种恩格列净及其光学异构体的分离测定方法
本专利技术属于药物分析方法领域，具体涉及一种采用高效液相色谱法分离测定降糖药恩格列净及其光学异构体的方法。
技术介绍
恩格列净为一种选择性钠-葡萄糖协同转运蛋白(SGLT)抑制剂，用于治疗成人II型糖尿病。恩格列净通过对钠-葡萄糖协同转运蛋白选择性抑制作用，限制了大部分葡萄糖在体内的重吸收，促使葡萄糖大量从尿中排出达到控制血糖水平的目的。恩格列净的化学结构式如下：其化学名为：(1S)-1,5-脱水-1-C-[4-氯-3-[[4-[[(3S)-四氢-3-呋喃基]氧基]苯基]甲基]苯基]-D-葡萄糖醇。恩格列净结构中有6个手性中心，在其合成反应过程中在部分手性中心的位置易产生相应的光学异构体副产物，残留后直接影响药物的纯度和质量。光学异构体A、B的化学结构式如下：目前，有关恩格列净及其光学异构体测定方法未见报道，为保证恩格列净的质量可控，以确保其有效性和安全性，亟需一种有效的检测方法，能够分离测定恩格列净及其光学异构体。本专利技术人经过大量的科学试验和测试条件的筛选，发现一种快速分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，该方法可以有效控制恩格列净的光学异构体杂质，从而完成了本专利技术。本专利技术人发现，已上市的恩格列净片剂，其中含有的乳糖、微晶纤维素等药用辅料在本专利技术的方法中不会干扰测定恩格列净及其光学异构体的测定。因此，本专利技术同样适用于恩格列净的药物组合物。
技术实现思路
在本专利技术的目的在于提供一种恩格列净及其光学异构体的分离测定方法，该方法能将恩格列净与其光学异构体有效分离，准确检测恩格列净原料药和其药物组合物中的光学异构体，从而控制恩格列净的质量，确保恩格列净药品的有效性和安全性。为实现本专利技术的目的，提供如下实施方案。在一实施方案中，本专利技术提供了一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，包括以直链淀粉衍生物手性柱为色谱柱，以甲醇、乙醇和正己烷的混合物作为流动相，或者,以纤维素衍生物手性柱为色谱柱，以乙腈与磷酸盐缓冲溶液的混合物作为流动相，进行洗脱，以紫外检测器进行检测。优选的，上述本专利技术的方法，所述直链淀粉衍生物手性柱为直链淀粉-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱，所述纤维素衍生物手性柱为纤维素-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱；流动相中，甲醇、乙醇与正己烷的体积比为16∶11：73，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为25∶75～65∶35，更优选乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为45∶55，所述磷酸盐缓冲溶液的pH值为2～6，所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢铵、磷酸氢二钠、磷酸氢二钾和磷酸氢二铵中的一种或多种，优选为磷酸二氢钠；用磷酸调节pH。上述本专利技术的方法，进一步包括以下步骤：本专利技术的方法，进一步包括以下步骤：（1）取恩格列净原料药或其药物组合物，加甲醇、乙醇或乙腈使恩格列净完全溶解并稀释定容，配制成每1ml溶液中含恩格列净0.8～2.0mg，优选1.5mg,滤过，作为供试品溶液；（2）以直链淀粉或纤维素衍生物类手性柱为色谱柱，柱温为25～35℃，优选30℃，波长为200～250nm，优选为224nm；（3）取供试品溶液5～20μl，优选10μl，注入高效液相色谱仪，以适当流速洗,优选0.8-1ml/min脱完成恩格列净及其光学异构体的分离测定。在一具体实施方案中，本专利技术的一种用高效液相色谱分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，其具体包括以下步骤：（1）取恩格列净原料药或制剂，精密称定，加甲醇、乙醇或乙腈适量使恩格列净溶解，再用溶剂稀释制成每1ml中含恩格列净0.8～2.0mg的溶液，必要时滤过，作为供试品溶液；（2）色谱条件如下：以直链淀粉-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱为色谱柱，以甲醇、乙醇和正己烷的混合溶剂组成流动相进行洗脱，其中，甲醇、乙醇与正己烷的体积比为16∶11：73，或者以纤维素-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱为色谱柱，以乙腈和磷酸二氢钠缓冲液(用磷酸调pH值至2～6)的混合液作为流动相，混合进行洗脱，其中，乙腈和磷酸二氢钠缓冲液的体积比为45∶55，柱温为：30℃；检测波长为224nm。（3）取供试品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，以0.8-1ml/min流速洗脱完成恩格列净及其光学异构体的分离测定。本专利技术的方法，有益效果或优势在于：①专属性强，恩格列净其他工艺杂质不会干扰光学异构体A和B的测定，可提供恩格列净单个光学异构体的定量结果；②灵敏度高，本专利技术中光学异构体A和B杂质的最低检测浓度分别为0.52μg/ml和0.92μg/ml，表明其能够保证检出微量的上述杂质；③耐用性好，选用本专利技术中提到的不同类型色谱柱，或者将色谱条件中流动相比例、流速、柱温等参数在本专利技术所述范围内波动，不会对检测结果产生显著影响。总之，本专利技术的分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，可以实现恩格列净与其光学异构体的分离分析，且方法拥有较好的专属性、灵敏度和准确度等优点。附图说明图1：溶剂空白的高效液相色谱图；图2：恩格列净原料药供试品溶液的高效液相色谱图；图3：恩格列净光学异构体A、B对照品溶液的高效液相色谱图；图4：向恩格列净中加入光学异构体A、B的供试品溶液的高效液相色谱图；图5：不含恩格列净仅含辅料成分的组合物空白溶液的高效液相色谱图；图6：含恩格列净的药物组合物供试品溶液的高效液相色谱图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术做进一步说明。实施例1仪器与条件高效液相色谱仪：Agilent1260；色谱柱：直链淀粉衍生物类手性柱（CHIRALCELIF，4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇-乙醇-正己烷（16∶11∶73）进样体积：10μl；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：224nm。实验步骤取恩格列净原料药约15mg，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取溶剂（流动相）和供试品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见图1、图2。结果表明溶剂不干扰恩格列净的检测，方法专属性好。实施例2仪器与条件高效液相色谱仪：Agilent1260；色谱柱：直链淀粉衍生物类手性柱（CHIRALCELIF，4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇-乙醇-正己烷（16∶11∶73）进样体积：10μl；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：224nm。实验步骤取恩格列净光学异构体A、B各适量，精密称定，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再定量稀释制成每1ml中含A、B各7.5μg/ml的溶液，作为对照品溶液。取对照品溶液，在上述色谱条件下进行高效液相色谱分析，记录色谱图，见图3。结果表明恩格列净光学异构体A、B间能良好分离，光学异构体A、B的峰高合适，方法专属性好，灵敏度佳。实施例3仪器与条件高效液相色谱仪：Agilent1260；色谱柱：直链淀粉衍生物类手性柱（CHIRALCELIF，4.6×250mm，5µm）；流动相：甲醇-乙醇-正己烷（16∶11∶73）进样体积：10μl；流速：1ml/min；柱温：30℃；检测波长：224nm。实验步骤取恩格列净原料药约15mg，精密称定，置10m本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，包括以直链淀粉衍生物手性柱为色谱柱，以甲醇、乙醇和正己烷的混合物作为流动相，或者,以纤维素衍生物手性柱为色谱柱，以乙腈与磷酸盐缓冲溶液的混合物作为流动相，进行洗脱，以紫外检测器进行检测。

【技术特征摘要】
1.一种用高效液相色谱法分离测定恩格列净及其光学异构体的方法，包括以直链淀粉衍生物手性柱为色谱柱，以甲醇、乙醇和正己烷的混合物作为流动相，或者,以纤维素衍生物手性柱为色谱柱，以乙腈与磷酸盐缓冲溶液的混合物作为流动相，进行洗脱，以紫外检测器进行检测。2.根据权利要求1所述的方法，所述直链淀粉衍生物手性柱为直链淀粉-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱。3.根据权利要求1所述的方法，所述纤维素衍生物手性柱为纤维素-三（3-氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯）键合硅胶填料柱。4.根据权利要求1所述的方法，甲醇、乙醇与正己烷的体积比为16:11:73。5.根据权利要求1所述的方法，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比为25∶75～65∶35。6.根据权利要求5所述的方法，乙腈与磷酸盐缓冲溶液的体积比...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈皓，周冰，刘泽荣，张道林，林蒙，翟春密，
申请(专利权)人：重庆医药工业研究院有限责任公司，
类型：发明
国别省市：重庆,50