普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法技术

本发明专利技术涉及一种普瑞巴林及其手性异构体的衍生化及分离检测方法。本发明专利技术提供的方法使用Ｎα－（５－氟－２，４－二硝基苯基）－Ｄ－氨基酸类化合物与普瑞巴林在高沸点的非质子性有机溶剂中于微波辅助条件下进行快速衍生化反应，反应完毕，对衍生物采用非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱联用分离测定。本发明专利技术所提供的方法适合分离检测普瑞巴林及其手性异构体，尤其适合分离检测含微量的普瑞巴林手性异构体的普瑞巴林药物或制剂。本发明专利技术所述的方法具有检测灵敏度更高，成本更低，分析过程简单、快速，并且所使用的流动相更适合高效液相色谱与质谱联用等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于分析化学领域，涉及化合物柱前的衍生化反应及测定方法，具体涉及Na-(5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-缬胺酰胺与普瑞巴林及其手性异构体在高沸点的非质子性有机溶剂中于微波辅助条件下进行快速衍生化反应后，用非手性高效液相色谱法或非手性高效液相色谱与质谱联用分离测定普瑞巴林手性异构体的方法。
技术介绍
众所周知，柱前衍生化方法作为测定手性化合物含量的常用方法，也是一种高检测灵敏度的检测方法。对有手性中心且无紫外吸收或紫外吸收较弱的化合物，可采用合适的衍生化方法进行含量和手性异构体的准确测定。 普瑞巴林是一种弱紫外吸收的手性化合物，其化学名称为(S)-3-(氨甲基)-5-甲基己酸，用于治疗癫痫和神经疼痛。普瑞巴林手性异构体几乎没有药理活性，其化学名称为00-3-(氨甲基)-5-甲基己酸，是普瑞巴林的重要杂质，也是控制普瑞巴林质量的重要指标。 通常，普瑞巴林原料药或用其制成的药物制剂中含有微量的普瑞巴林手性异构体，由于普瑞巴林及其手性异构体的紫外吸收很弱，使用常规的紫外检测普瑞巴林存在一定困难，检测微量普瑞巴林手性异构体就更加困难。现有技术中，使用手性高效液相色谱柱直接分离测定普瑞巴林手性异构体不但分离较差，且灵敏度低，试验成本高(参见:Journal ofChromatogr即hB 875 (2008) 148-153)。中国专利技术专利(专利号200510057381. 8，公开日2006年6月14日)公开了一种普瑞巴林手性异构体的衍生化分离测定方法。该方法采用最为常用的Na-(5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物，例如Na - (5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-L-丙胺酰胺，作为衍生化试剂，与普瑞巴林在柱前通过水浴加热进行衍生化反应后，经减压干燥除去低沸点有机溶剂后重组，再用非手性高效液相色谱法分离测定普瑞巴林手性异构体。该方法的主要缺点在于使用N。-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物与普瑞巴林衍生化反应后，普瑞巴林手性异构体衍生物在普瑞巴林衍生物之后洗脱，因此其色谱峰展宽较大，两衍生物之间的分离度较小时，普瑞巴林手性异构体检测的灵敏度较低，准确性较差；使用该方法进行柱前衍生化反应需在水浴中进行长时间加热，且反应结束后需在五氧化二磷和氢氧化钾的体系中进行减压干燥以去除低沸点的有机溶剂，再用其他有机溶剂溶解并过滤以制备供试品溶液，后处理步骤非常繁琐，且五氧化二磷、低沸点有机溶剂废气的处理将增加分离检测成本并对环境造成影响；高效液相色谱所采用的流动相含有不挥发的无机磷酸盐，不适用于高效液相色谱-质谱联用分析系统。
技术实现思路
本专利技术中所提及的名词解释如下 普瑞巴林指的是化学名称为(3)-3-(氨甲基)-5_甲基己酸。3 普瑞巴林手性异构体指的是(R)-3-(氨甲基)_5-甲基己酸。 普瑞巴林消旋体指的是含(3)-3-(氨甲基)-5_甲基己酸和(R)-3-(氨甲基)-5_甲基己酸，且含00-3-(氨甲基)-5-甲基己酸大于10%以上。 本专利技术所要解决的技术问题是提供一种灵敏、简便、快速并更经济的普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法，所述方法具有检测灵敏度更高，成本更低，分析过程简单、快速，且所使用的流动相更适合高效液相色谱与质谱联用等特点。 本专利技术提供了一种，包括A)在进色谱柱前，将普瑞巴林与衍生化试剂溶解在高沸点的非质子性溶剂中，于微波辅助条件下进行快速衍生化反应，所述衍生化试剂为Na - (5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-氨基酸类化合物； B)对衍生物采用非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱联用分离测定。 上述Na_(5-氟_2，4- 二硝基苯基)-D-氨基酸类化合物选自以下任一化合物Na - (5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-丙胺酰胺、Na - (5-氟_2， 4- 二硝基苯基)_D_苯丙胺酰胺、Na - (5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-脯胺酰胺或Na - (5-氟-2， 4- 二硝基苯基)_D_缬胺酰胺。优选Na - (5-氟-2 ， 4- 二硝基苯基)-D-缬胺酰胺。 使用Na_(5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-氨基酸类化合物为衍生化试剂，可使普瑞巴林手性异构体衍生物在普瑞巴林衍生物之前洗脱，而使用Na-(5-氟-2，4- 二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物作为衍生化试剂，则普瑞巴林手性异构体衍生物在普瑞巴林衍生物之后洗脱，因此使用Na-(5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-D-氨基酸类化合物为衍生化试剂与使用Na-(5-氟-2， 4- 二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物为衍生化试剂相比，因为先洗脱的普瑞巴林手性异构体衍生物峰展宽较小，故检测灵敏度更高。此外，使用疏水性较强的Na-(5-氟-2，4- 二硝基苯基)-D-缬胺酰胺为衍生化试剂，在同一非手性高效液相色谱系统中，普瑞巴林与其手性异构体的衍生物之间的分离度大于采用Na - (5-氟-2， 4-二硝基苯基)-L-丙胺酰胺为衍生化试剂所得到的分离度，故检测结果的准确性较高。 所述高沸点的非质子性溶剂优选二甲基亚砜或二甲基甲酰胺。 本专利技术所提供一种主要包括以下步骤 1)取普瑞巴林或含普瑞巴林的制剂适量，用水溶解并稀释后，配制成普瑞巴林溶液； 2)取衍生化试剂适量，用二甲基亚砜或二甲基甲酰胺溶解，配制成衍生化试剂溶液； 3)取普瑞巴林溶液、衍生化试剂溶液和三乙胺溶液各适量，混合后密封成混合溶液，该溶液含普瑞巴林与衍生化试剂的摩尔比为i : i i : ioo; 4)上述混合溶液在微波辅助的条件下进行衍生化反应1 5min，反应完毕，加入醋酸溶液，混匀，作为供试品溶液； 5)用非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱法联用分离测定步骤4)所得供试品溶液。 所述的衍生化试剂如上文所述，在步骤3)所述的衍生化反应前的混合溶液中，所含普瑞巴林与衍生化试剂的摩尔比为i : i i : ioo，优选i : 2 i : 5，更优选i : 3。4 所述步骤4)微波辅助的条件可以使用能产生微波的装置产生微波，衍生化反应时间1 5min，优选2 4min，更优选3min。 本专利技术实施例使用微波炉，其功率可选择100W 1500W，优选400w 800W，更优选600W。 由于上述衍生化反应为双分子亲核取代反应，本专利技术采用了可促进该类反应且沸点较高的非质子性有机溶剂(二甲亚砜或二甲基甲酰胺)，并在微波辅助条件下进行快速衍生化反应1 5分钟，反应完毕勿需减压干燥除去溶剂后再重组，可直接用非手性高效液相色谱法分离测定普瑞巴林的手性异构体，因此大大縮短了供试品溶液的配制时间，操作更简便，成本更低，并且减少了低沸点有机溶剂对大气环境的污染。 在所述的分离检测方法中，非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱联用所使用的色谱柱是以十八烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱或以辛基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱。高效液相色谱法的检测波长为200 380nm，优选340nm。 本专利技术所述的分离检测方法中，所使用的流动相为甲酸铵水溶液-乙腈体系，甲酸铵水溶液与乙腈的比例为3 : 7 7 : 3，优选i : i或接近i : i。 所述甲酸铵水溶液的浓度为0. 01 lmol/L，优选0. lmol/L ;所述甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种普瑞巴林及其手性异构体的分离检测方法，包括：Ａ）在进色谱柱前，将普瑞巴林与衍生化试剂溶解在高沸点的非质子性有机溶剂中，于微波辅助条件下进行快速衍生化反应，所述衍生化试剂为Ｎ↑［α］－（５－氟－２，４－二硝基苯基）－Ｄ－氨基酸类化合物；Ｂ）对衍生物采用非手性高效液相色谱或非手性高效液相色谱与质谱联用分离测定。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘浩，潘颖，凌文婷，徐明明，王伟毅，严翠霞，吴晓毅，
申请(专利权)人：上海臣邦医药科技有限公司，上海市食品药品检验所，
类型：发明
国别省市：31[中国|上海]