一种多聚肽、其制备方法、包含它的药物组合物和疫苗及其用途技术

本发明专利技术涉及一种多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物、所述多聚肽的制备方法、含有所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物的药物组合物和疫苗、应用所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物来治疗、预防或改善ＥＢＶ病毒感染或与ＥＢＶ相关的癌症，尤其是鼻咽癌的方法以及所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物在制备治疗、预防和改善ＥＢＶ病毒感染或与ＥＢＶ相关的癌症的药物中的用途。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物、所述多聚肽的制备方法、含有所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物的药物组合物和疫苗、应用所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物来治疗、预防或改善EBV病毒感染或与EBV相关的癌症，尤其是鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma，NPC)的方法以及所述多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物在制备治疗、预防和改善EBV病毒感染或与EBV相关的癌症的药物中的用途。
技术介绍
鼻咽癌(NPC)在整个东南亚，特别在南中国、香港、新加波和台湾是常见的肿瘤。年发病率在万分之一到万分之五(Ref 1-4)。在该病的早期，放疗是有效的手段，然而在转移阶段，联合应用顺铂和5-氟尿嘧啶(5-Fluoro-uracil；5-FU)作化疗通常只能起到大致减轻作用(Ref5，6)。一旦这些疾病复发或恶化，没有更有效的疗法可被采用，接近85％的病人在1年内病逝，在3年内几乎全部死亡(Ref 1，7)。因此，在技术上迫切需要一个与包括放疗与化疗的传统方法相比更安全和有效的治疗方法来处理晚期鼻咽癌。另外，也存在对健康个体为预防鼻咽癌进行疫苗接种的技术上的需要。EBV是普遍存在的γ-螺旋病毒，它与某些恶性疾病相关，包括鼻咽癌(Ref 8-10)。感染有EBV的大多数人群是终身感染的，CD8+细胞毒T淋巴细胞(CTL)在保持这样的一个病毒-宿主平衡中起重要作用(Ref 11)。在健康EBV携带者的血液中存在着数量众多的EBV潜在抗原(Latentantigen)特异性CTLs，其在体外能与用同种异体病毒变形的淋巴毒细胞系反应(Ref 12-13)。给移植病人进行抑制T细胞的治疗增加了EBV相关的B细胞扩增(Post-transplant B cell lymphoproliferative disorder；PTLD)的风险，通过体外输入反应性EBV-特异性CTLs能治疗这种疾病(Ref 14-17)。帶有EB病毒的鼻咽癌细胞表达有至少三种B病毒蛋白LMP1，LMP2及EBNA1(Ref 18-20)。重要的是在受HLA(human leukocyte antigen)限制的LMP2上几个靶表位已得到确认通过HLA等位基因，如HLA-A11、HLA-A24、和HLA-B40。这些等位基因在中国南方人中普遍存在(HLA-A11，40-60％；HLA-A24，30-35％；HLA-B40，32％)(Ref21-24)。这样的反应，虽然有时是可测的，但NPC病人比健康对照组更弱。很多的中国健康EBV携带者都可检测到对LMP2反应的CTL。体外研究表明NPC肿瘤细胞能递呈内源性LMP2表位。虽然NPC病患自发产生的对抗EB病毒(EBV)HLA限制的LMP2(latent membrane protein 2)表位的单价免疫效应肽CLGGLLTMV、YLLEMLWRL、YLQQNWWTL、SSCSSCPLSK、TYGPVFMSL或IEDPPFNSI的CTL反应水平比一般正常人低，但它们包括了受HLA等位基因(HLA-A11，HLA-A24和HLA-B40)限制的反应，而这些等位基因在南亚人群中通常普遍出现(Ref23-24)。因此，基于这些表位的免疫治疗途径在NPC高发地域中应该有广泛的适用性。为评估EBV潜在抗原-特异性CTL免疫在NPC病人上的有效性，专利技术人曾运用病人自体之树突状细胞(Dendritic Cells；DCs)(Ref 25)，一种特异性抗原递呈细胞，用单价体LMP2特异性肽HLA-A11-restricted“SSCSSCPLSK”、HLA-A24-restricted“TYGPVFMSL”或HLA-B40-restricted“IEDPPFNSI”(Ref 22)于体外刺激培养自病患的树突细胞后于16个患有晚期NPC病人淋巴结(表1)进行多次注射树突状细胞以产生抗肿瘤CTL反应.在病人体内诱导的反应最早可在第一次注射后2周检测到，并可持续3个月，之后反应水平逐渐降低，6个月内几乎恢复到疫苗接种前的水平(Figure 1)。第二次淋巴结内注射后，外周血液中的表位特异性CTLs数目达到峰值。表1 在同一个临床实验中的体内动力学研究表明，疫苗接种后3个月时，与A24应答性患者相比，A11应答性患者在外周血液中出现表位特异性CTLs的频率更高(Ref.26)。用取自病人体内经过充分富集的细胞群体测试，这些CTLs具有即刻表位特异性细胞毒功能(Ret.26)。在接受疫苗接种后产生部分临床反应的两位病人(2号和3号病人)在CTL分析中都是对A1101肽的强烈应答者。临床反应包括骨中和肺中转移性肿瘤的消退(表2和Ref.26)，血液中可检测到的疫苗诱导产生的A1101表位特异性效应细胞向肿瘤部位浸润和/或在肿瘤部位发挥活性。表2 表2是接种后免疫学分析和临床反应的概要。在DC接种后，病人2、3、6、8和14(HLA-A1101)及病人4、9、13、和16(HLA-A2402)在ELISPLT分析中有表位特异性T细胞应答频率增加，CD8+/IFNγCTLs的频率也增加。病人2、3、6、8的T细胞效应对有表位包被靶细胞的溶解能力增加。病人2有临床可检测到的肿瘤退缩。病人3开始有部分临床应答，但接下来肿瘤复长。*PR部分应答，PD进行性临床疾病#(+)数量或功效增加，(-)没改变在一个第一期人体试验里，专利技术人用HLA-A11，HLA-A24，及HLA-B40限制之LMP2表位单体肽(即SSC-，TYG-，与IED肽)刺激自体树突细胞(Dendritic Cells)后再注射入16位末期鼻咽癌病人体内，发現这16位病人并没有产生任何重大的副作用。此外，有9位病人在注射完3个月后，周边血中的LMP2肽表位特异性的杀死型细胞的频率有意义显著升高，其中有2位病人的鼻咽癌转移到腰椎与肺部的肿瘤体积明显缩小(Lin CL et al.Cancer Research 2002，626952-6958)。这些结果显示利用LMP2特异性表位肽，确实可用于增强人体的功能性LMP2表位肽特异性之T细胞反应，並且不具有任何副作用。
技术实现思路
由上述结果可知，已有的以LMP2单聚体刺激人体免疫系统的免疫疗法並非所有病患皆有明显的免疫反应。其中一个原因是使用的LMP2单聚体本身的免疫性(Immunogenecity)不夠强。依免疫学原理，如果抗原蛋白或抗原胜肽以多聚体型式存在，对免疫系统的刺激性或本身所具有的免疫性一般会较单聚型式高出甚多，本专利技术之目的即是开发LMP2HLA-A11，-A24，-B40表位胜肽的多聚体，並成功验证此类多聚体确实具有比单体更高之免疫刺激性。因此，本专利技术涉及一种多聚肽、其可药用盐、类似物或衍生物，其中所述多聚肽为选自得自EB病毒特有的LMP2蛋白的片段SSCSSCPLSK(简写为SSC)；TYGPVFMSL(简写为TYG)；或IEDPPFNSI(简写为IED)的二-八聚体，所述多聚体由相应的多肽片段通过选自如下的接头连接 其中上述接头中的“-”表示K中的氨基端与片段SSCSSCPLSK；TYGPVFMSL；或IEDP本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种多聚肽或其可药用盐，其中所述多聚肽为选自得自ＥＢ病毒特有的ＬＭＰ２蛋白的片段ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ；ＴＹＧＰＶＦＭＳＬ；或ＩＥＤＰＰＦＮＳＩ的二－八聚体，所述多聚体由相应的多肽片段通过选自如下的接头连接：＊＊＊其中上述接头 中的“－”表示Ｋ中的氨基端与片段ＳＳＣＳＳＣＰＬＳＫ；ＴＹＧＰＶＦＭＳＬ；或ＩＥＤＰＰＦＮＳＩ羧基端连接的键，“Ｋ”、“Ａ”和“Ｃ”均为氨基酸的缩写。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林成龙，
申请(专利权)人：林成龙，
类型：发明
国别省市：HK[中国|香港]