作为潜在抗肿瘤治疗剂的单克隆抗体SC104及其特异性结合至唾液酸丁糖基碳水化合物的衍?制造技术

本发明专利技术提供一种分离的特异性结合因子（ｍｅｍｂｅｒ），其可以结合唾液酸丁糖基碳水化合物并直接诱导细胞死亡而不需要免疫效应细胞。这种结合因子可以是抗体或其一部分。本发明专利技术还提供这种结合因子在医药中的应用以及编码这些结合因子的核酸。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及特异性结合因子(members)，特别是抗体及其片段，其结合到与癌症和子宫内膜异位有关的表位。这样的因子可用于肿瘤的诊断和治疗。结合到GM2、GD3和GM3神经节苷脂的抗体是已知的，但是结合到唾液酸丁糖基(sialyltetraosyl)神经酰胺但不结合到GM1、GD1a、GT1b或唾液酸Lewis抗原的抗体先前还没有介绍过。一种小鼠单克隆抗体(mab)，这里已知作为“SC104”，被制备，依次用4种结直肠癌细胞系免疫并结合71％的结直肠肿瘤。SC104对唾液酸丁糖基碳水化合物是特异的，其可以存在于脂质(神经酰胺)或蛋白质骨架上，并识别食管、结直肠、胃、乳房、腮和子宫内膜肿瘤。因为它是IgG1抗体，SC104是罕见的。碳水化合物抗原的免疫学特征之一是它们通常引起不依赖于T-细胞的应答，导致产生IgM抗体。通过使用来自结直肠细胞系C170的脂质提取物的免疫染色HPTLC板显示，SC104结合至一种唾液酸丁糖基神经酰胺。SC104也显示结合至具有该唾液酸丁糖基碳水化合物的一种蛋白质结构。对正常组织的识别是最小的并且限制于对大肠、唾腺、小肠、胸腺、扁桃腺和子宫颈的中度染色。令人惊奇地，本专利技术还发现了这种抗体诱导细胞死亡。根据本专利技术的第一个方面，提供一种分离的特异性结合因子，其能结合一种唾液酸丁糖基碳水化合物并可以在不需要免疫效应细胞的情况下直接诱导细胞死亡。本专利技术的第二个方面提供能结合一种唾液酸丁糖基碳水化合物的分离的特异性结合因子，该唾液酸丁糖基碳水化合物能被一种包含一或多个结合结构域的因子所结合，所述结合结构域选自这些结构域，其包含基本如附图说明图1a氨基酸序列中第44或49至54、69至84或117至127位残基所列的氨基酸序列。所述结合结构域可以包含基本如图1a中第117至127位残基所列的氨基酸序列。在一个实施方案中，本专利技术第二个方面的分离的特异性结合因子包含一或多个选自这些结构域的结合结构域，所述结构域包含基本如图1a中氨基酸序列中第44或49至54、69至84或117至127位残基所列的氨基酸序列。在一个实施方案中，该因子包含一种结合结构域，其包含基本如图1a的氨基酸序列中第117至127位残基所列的氨基酸序列。在该实施方案中，分离的特异性结合因子可以另外包含一个或全部两个结合结构域，优选全部两个，所述结合结构域基本如图1a所示氨基酸序列的第44或49至54位残基和第69至84位残基所列出。本专利技术第二个方面的一种分离的特异性结合因子包含基本如图1a所示氨基酸序列的第19至138位残基所列的氨基酸序列。在第三个方面中，本专利技术提供一种能结合一种唾液酸丁糖基碳水化合物的分离的特异性结合因子，所述唾液酸丁糖基碳水化合物能被包含一或和多个结合结构域的因子所结合，所述结合结构域选自这些结构域，其包含基本如图1c氨基酸序列中第46至55、71至77和110至118位残基所列的氨基酸序列。所述结合结构域可以包含基本如图1c氨基酸序列中第110至118位残基所列的氨基酸序列。在一个实施方案中，本专利技术第三个方面的分离的特异性结合因子包含一或多个结合结构域，所述结合结构域选自这些结构域，其包含基本如图1c氨基酸序列中第46至55、71至77和110至118位残基所列出的氨基酸序列。在一个实施方案中，这种因子包含一种结合结构域，其包含基本如图1c氨基酸序列中第110至118位残基所列的氨基酸序列。在这个实施方案中，这种分离的特异性结合因子可以另外包含一个或全部两个结合结构域，优选全部两个，所述结合结构域基本如图1c所示的氨基酸序列中第46至55和71至77位残基所列出。包含大量相同或不同序列达到结合结构域的特异性结合因子、或其组合，包括在本专利技术之内。所述或每个结合结构域可以由人抗体框架来携带。例如，可以用一个或多个结合结构域替换全人抗体或其可变结构域的CDR。本专利技术第三个方面的一种分离的特异性结合因子包含基本如图1c所示的氨基酸序列中第23至128位残基所述的序列。在第四个方面，本专利技术提供一种特异性结合因子，其包含本专利技术第二方面的结合因子和本专利技术第三方面的结合因子的组合或联合。这种结合因子可以是Fv、(Fab’)2、或scFV抗体片段的形式。本专利技术的特异性结合因子可以携带可检测或功能性标记。在进一步的方面中，本专利技术提供一种分离的核酸，其包含编码本专利技术第一、第二、第三和第四方面的特异性结合因子的序列，并提供制备本专利技术特异性结合因子的方法，其包括在能表达所述结合因子的条件下表达所述核酸，并回收结合因子。根据本专利技术的特异性结合因子可以用于人或动物体的治疗或诊断方法，诸如治疗患者(优选人)中肿瘤的方法，其包括向所述患者施用有效量的本专利技术特异性结合因子。本专利技术也提供一种本专利技术的特异性结合因子用于医药，以及本专利技术的特异性结合因子在制造用于治疗或诊断肿瘤的药物中的应用。本专利技术还提供与本专利技术特异性结合因子相结合的抗原。在一个实施方案中，提供一种唾液酸丁糖基碳水化合物，其能被本专利技术的特异性结合因子结合，优选特异性结合。所述唾液酸丁糖基碳水化合物可以分离的形式提供，并且可以用于筛选，以开发其进一步的特异性结合因子。例如，可以筛选化合物库，以筛选该库中特异性结合至所述唾液酸丁糖基碳水化合物的成员因子。所述唾液酸丁糖基碳水化合物可以在脂质骨架上(即一种唾液酸丁糖基神经酰胺)或在蛋白质骨架上。当在蛋白质骨架上时，它的分子量可以是约50-75kDa，由SDS-PAGE测定。本专利技术的这些和其他方面将在下文中进一步描述。如此处所用，“特异性结合因子”是可以互相具有结合特异性的一对分子中的一个成员。特异性结合对的该成员可以是天然来源的或者整体或部分合成生产的。分子对的一个成员在其表面上具有一个区域，它可以是突出或者凹腔，它特异性结合到该分子对另外成员的特定空间和极性结构并因此与之互补。因而，分子对的成员具有互相特异性结合的特性。特异性结合对的类型的实例是抗原-抗体、生物素-亲合素、激素-激素受体、受体-配体、酶-底物。本专利技术一般地涉及抗体-抗原类型的反应，尽管也涉及结合至本文定义抗原的小分子。如这里所使用，“治疗”包括任何能有益于人或非人动物、优选哺乳动物的治疗方案。治疗可以是关于现有疾病或者可以是预防性(预防性治疗)。如这里所使用，“肿瘤”是一种非正常生长的组织。它可以是局部的(良性的)或者侵袭临近组织(恶性的)或远处组织(转移的)。肿瘤包括可以导致癌症的新生物生长，包括食管、结直肠、胃、乳房和子宫内膜肿瘤，以及癌性组织或细胞系，包括但不仅限于白血病细胞。如这里所使用，在其范围内“肿瘤”也包括子宫内膜异位。这里所使用的术语“抗体”是指免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分，即包含特异性结合抗原的抗原结合位点的分子，无论是天然的或者是部分或者完全合成产生的。该术语还涵盖就是抗体结合结构域或与之同源的多肽或蛋白质。这些可以来源于天然源，或它们可以由部分或全部合成产生。抗体的实例是免疫球蛋白亚型(如IgG，IgE，IgM，IgD和IgA)及其亚型亚类；包含抗原结合结构域的片段如Fab、scFv、Fv、dAb、Fd；和双链抗体(diabodies)。抗体可以是多克隆或者单克隆的。单克隆抗体在这里可以称为“mab”。有本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的特异性结合因子，能结合一种唾液酸丁糖基碳水化合物并且不需要免疫效应细胞就能直接诱导细胞死亡。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：林达吉利恩达兰特，蒂娜帕森斯，
申请(专利权)人：斯堪赛尔有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]