本发明专利技术提供一种核酸，其包括非特异性启动子和编码多肽的至少一种序列，其中所述多肽中具有至少一种异源性Ｔ细胞表位但没有任何调节性Ｔ细胞表位。所述多肽可以是异二聚体的一条链，所述异源性Ｔ细胞表位导致所述异二聚体链的破坏以致于它不能结合所述异二聚体的另一条链。所述核酸能被用于引发针对至少一种异源性Ｔ细胞表位的Ｔ细胞应答。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】核酸本专利技术涉及核酸和它们作为疫苗的用途，所述核酸编码T细胞表位， 针对所述表位将会引发一种免疫应答。这种疫苗可被用于治疗肿瘤。在癌症疫苗和慢性病毒感染的领域，现在变得清楚的是，除了频率之 外的因素，例如肿瘤特异性T细胞的功能性亲和力和启动途径，是将疫苗 效力最大化的主要决定因素。若干小组已经证明，高亲和力的CD8+T细 胞展示优秀的抗月中瘤活性(Alexander-Miller, /附柳朋o/ogzc 2005;31: 13-24, Hodge等，J /附附w朋/ 2005;174: 5994-6004, Valmori等，J /w附w朋/ 2002;168: 4231-40, Zeh等，J/附mw朋/ 1999;162: 989-94 )。据建议，高亲和 力的T细胞在患者肺瘤退化中扮演重要角色。这被一项研究例证，其中在 所述研究中，高亲和力的抗原特异性的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)在带有 显著肿瘤退化的患者中被检测到(Khong & Rosenberg, J7附w柳o/ 2002;W8: 951-6)。还有证据正在出现以证明在体外被激发的自体肿瘤特异性T细胞 的过继性转移是成功的，可能是因为在体外的刺激使得选择高亲和力的T 细胞成为可能(Vignard等，J /附附朋o/ 2005;175: 4797-805, Dudley等， / /附附柳W/ er 2001;24: 363-73， Morgan等，J /附m朋o/ 2003;171: 3287-95, Rosenberg & Dudley,尸racee(i/wg^ o/ Ae 7V加'owa/ Jc<af<ie， o/ 5Wece51 o/ 。/為e.ra 2004;101 S卿l 2: 14639-45 )。到目前为止，若干小组已经尝试使用一种抗体作为该表位的运载体 (carrier)来针对预定的表位引发一种细胞免疫应答。例如，WO 96/19584 (Bona等)公开了在其中T细胞表位被插入抗体的互补决定区域(CDR)的 嵌合抗体，并提出这种嵌合抗体适合于引发细胞毒性T细胞(CTL)应答。 然而，此文件教导的是DNA必须编码功能蛋白。因此在摘要中陈述，所 述表位和母体免疫球蛋白的功能能力被保留。并且，在第21页上陈述，所 期望的表位的插入应该是在编码所述母体免疫球蛋白分子的核酸的区域，5其中所述区域对所述母体免疫球蛋白分子的表达或功能不是必要的。此外，WO 96/19584中所有实施例显示，完整的免疫球蛋白是在T细胞表位 的插入之后^皮产生的。编号为7,067,110的美国专利公开了使用抗体的融合蛋白来引起针对 抗原的免疫反应的方法，其中所述融合蛋白缺少通过多狀键融合到抗原的 免疫球蛋白可变区域结构域。所述融合蛋白保留结合到Fc的能力。EP0759944公开了将T细胞表位并入抗体分子内的方法，其中所述抗 体分子作为完整的免疫球蛋白被分泌，并能将CTL表位靶向至肿瘤以使它 们成为CTL更好的靶。WO 00/64488公开了 CTL应答可由编码嵌合抗体的核酸引发，其中所 述嵌合抗体具有被插入CDR而非其可变区域的异源性T细胞表位，只要 所述核酸被导向在B细胞中表达。由于B细胞不能激发原初T细胞应答， WO 00/64488中所述疫苗将只在提高预先存在的T细胞应答时有用。WO 02/092126公开了 CTL应答可由包括异源性T细胞表位和部分人 Fc的多肽引发，其中所述多肽结合到高亲和性CD64受体。然而，本专利技术 人现在已经证明，通过在例如不适当的CDR或甚至抗体的可变区域内插 入T细胞表位而破坏抗体序列预防了重链和轻链的締合，并且没有分泌功 能抗体。编码这些4晉折叠的抗体的DNA意外地产生强烈的T细胞应答。 此外，这不是通过CD64介导的，因为不与小鼠或人CD64结合的人IgG2 同人IgGl —样有效地工作。在本专利技术的一个方面，提供了一种核酸，其包括非特异性启动子和编 码多肽的至少一种序列，其中所述多肽中具有至少一种异源性T细胞表位 但没有任何调节性T细胞表位。此多肽优选地是同源的运载体，例如当被用来提高人体中的T细胞应 答时它可以是人蛋白或外来蛋白或将所有T调节性表位鉴定并去除的人/ 外来嵌合蛋白。所述多肽优选地是异二聚体的一条链，所述异源性T细胞表位导致所 述异二聚体链的破坏以致于它不能结合或締合所述异二聚体的另一条链。很多分子是异二聚的，其一条链依赖于另一条而折叠并然后分泌。如果所 述二级结构由于异源性T细胞表位的插入而破裂，那么折叠和分泌就被抑制。在某些实施方案中， 一条链被分泌并包含异源性CTL表位，而另一条 链包含异源性辅助表位，但由于二级折叠的破坏而不被分泌。因此，所述 核酸可编码所述异二聚体的两条链，其中一条链包含异源性的细胞毒性T 细胞(CTL)表位并在表达时被分泌，而另一条链包含异源性辅助表位并 在表达时不被分泌。可选择地，各自的异二聚体链可在分开的核酸分子上 被编码。所述异二聚体可以是免疫球蛋白分子。所述免疫球蛋白分子的重链可 包含异源性的细胞毒性T细胞(CTL)表位并在表达时被分泌，而所述免 疫球蛋白分子的轻链可包含异源性辅助表位并在表达时不被分泌。本专利技术第一个方面中所述的核酸编码不含有任何调节性T细胞(T reg) 表位的多肽。这些多肽作为T细胞表位的惰性运载体而起作用，并可以是 被免疫系统用来激发免疫应答的分子或分子的一部分，因为根据定义这些 分子不表达竟争性Treg表位。适合的分子包括HLA分子、T细胞受体、 TOL受体、TOL配体、细胞因子、细胞因子受体、趋化因子、趋化因子受 体。优选地，所述分子是抗体或其一部分。不希望被理论约束，本专利技术至少部分地基于如下的概念T细胞应答 可针对特异性的T细胞表位(例如CTL表位)通过施用编码包括所迷T 细胞表位而非调节性T细胞表位的多肽的核酸而被产生。人们相信，核酸 或者被抗原呈递细胞(APC)吸收，迁移到淋巴结并被直接呈递，或者被 表达以产生被分泌然后被其他APC吸收的多肽。前一个核酸适合于激发辅 助T细胞表位，而后一个适合于激发CTL应答。由所述核酸编码的多肽 理想地不具有任何天然T细胞表位。在这点上，适合的多肽是免疫分子， 例如抗体。不能締合以使得轻链留在APC中而重链被分泌的抗体重和轻链 适合于本专利技术的实施，虽然本专利技术不限于使用抗体作为所述T细胞表位的 运载体。约40年前鉴定了抑制性T细胞的群体，但其发展却因鉴定细胞的特 殊技术的缺乏和关于阻遏之存在的科学怀疑而;f皮阻碍。然而，Sakaguchi等在1995年复苏了对抑制性细胞的兴趣，他们证明，将耗尽了 CD4+CD25+ T细胞的淋巴细胞转移进无胸腺小鼠导致了受体小鼠身上各种自身免疫疾 病的发生，以及CD4+CD25+ T细胞的重建避免了这些小鼠中的自身免疫反 应(Sakaguchi等J./附m/o/ 1995;155:1151-1164)。接着，在小鼠和人身上 的许多研究表明，具有调节活性的各种T细胞群体在对自身(控制自身耐 受性X Sakaguchi等丄//wm/o/ 1995;155:1151-1164 )以及外来抗原(Shevach: /附附朋办2006; 25本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种核酸，其包括非特异性启动子和编码多肽的至少一种序列，其中所述多肽中具有至少一种异源性Ｔ细胞表位但没有任何调节性Ｔ细胞表位。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 2007-3-28 0706070.01.一种核酸，其包括非特异性启动子和编码多肽的至少一种序列，其中所述多肽中具有至少一种异源性T细胞表位但没有任何调节性T细胞表位。2. 根据权利要求1中所述的核酸，其中所述多肽是异二聚体的一条 链，所迷异源性T细胞表位导致所述异二聚体链的破坏以致于它不能结合 所述异二聚体的另 一条链。3. 根据权利要求2中所述的核酸，其编码所述异二聚体的两条链， 其中 一条链包含异源性的细胞毒性T细胞(CTL )表位并在表达时被分泌， 而另 一条链包含异源性辅助表位并在表达时不被分泌。4. 根据权利要求1或权利要求2中所述的核酸，其中所述异二聚体 是免疫球蛋白分子。5. 根据权利要求4中所述的核酸，其中所述免疫球蛋白分子的重链 包含异源性的细胞毒性T细胞(CTL)表位并在表达时被分泌，而所述免 疫球蛋白分子的轻链包含异源性辅助表位并在表达时不被分泌。6. —种核酸，其包括非特异性启动子和编码免疫球蛋白分子的重组 重链的至少一种序列，其中所述重链中具有至少 一种异源性T细胞表位以 致于所迷重链在所述核酸纟皮表达时不能采取它的天然构象。7. 根据权利要求6中所述的核酸，其还包括编码免疫球蛋白分子的 轻链的至少一种序列。8. 根据权利要求6中所述的核酸，其与包括编码免疫球蛋白分子的 轻链的至少 一种序列的核酸相组合。9. 根据权利要求7或权利要求8中所述的核酸，其中所述轻链中具 有至少一种异源性T细胞表位。10. 根据权利要求9中所述的核酸，其中所述T细胞表位使得当所述 核酸被表达时所述轻链不能采取它的天然构象。11. 根据权利要求4至10中任一项所述的核酸，其中所述至少一种t 细胞表位是在重链和/或轻链的可变区域中。12. 根据权利要求11中所述的核酸，其中所述至少一种t细胞表位 是在所述抗体的重链和/或轻链的至少一种cdr中。...
【专利技术属性】
技术研发人员：林达吉利恩达兰特，瑞切尔路易斯麦瑟瑞汉姆，维多利亚安妮普德尼，
申请(专利权)人：斯堪赛尔有限公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。