具有靶向抗血栓活性的多肽、其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一类具有靶向抗血栓活性的多肽，还公开了这些多肽的制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用，属于生物医药领域。本发明专利技术通过对ＲＧＤ肽与ＹＩＧＳ肽进行缀合式修饰，制备得到具有靶向抗血栓活性的多肽。动物模型试验证明，本发明专利技术多肽具有较强的抗血栓活性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及多肽，尤其涉及一系列经人工修饰并合成的具有靶向抗血栓活性的 多肽。本专利技术还涉及这些多肽的制备方法以及它们作为抗血栓剂的应用，属于生物 医药领域。
技术介绍
细胞黏附在细胞黏附性疾病(癌转移、血栓形成、化学致炎和骨质疏松)的发展过程中起关键作用。调节性糖蛋白例如昆布氨酸、纤维蛋白原、RGD肽、YIGSR 和YIGSK等都可以参与细胞黏附过程。它们与整合素受体有很强的结合能力。例 如在血小板聚集过程中，RGDS和RGDF与活化的血小板表面受体GPIIb/IIIa结合 起至关重要的作用。RGD肽与活化的血小板表面受体GPIIb/IIIa的特异性结合，赋 予了含RGD序列的化合物一种重要性质，即含RGD序列的化合物可以向血小板活 化的部位富集。在这样一个前提下，把RGD肽与抗细胞黏附的YIGSR和YIGSK 缀合，便可以获得靶向抗细胞黏附多肽。
技术实现思路
本专利技术的目的之一是对RGD肽与YIGS肽进行缀合式修饰，制备得到具有耙 向抗血栓活性的多肽。本专利技术的目的之一是通过以下技术方案来实现的 具有靶向抗血栓活性的多肽，选自以下任意一种氨基酸序列的多肽 YIGSRRGDS、 YIGSRRGDV 、YIGSRRGDF、 YIGSRYIGSK 、 YIGSRYIGSR、 YIGSKRGDS、 YIGSKRGDF、YIGSKRGDV、 YIGSKYIGSK、 YIGSKYIGSK、 RGDSRGDS 、 RGDVRGDV 、 RGDFRGDF 、 RGDSYIGSR 、 RGDSYIGSK 、 RGDVYIGSR、 RGDVYIGSK、 RGDFYIGSR、 RGDFYIGSK。本专利技术针对靶向抗血栓药物的优势和临床对耙向抗血栓药物的需求，依据RGD 肽、YIGSR和YIGSK等都可以参与细胞黏附过程、依据它们与整合素受体有很强 的结合能力、依据在血小板聚集过程中RGD肽与活化的血小板表面受体GPIIb/IIIa结合起至关重要的作用、依据RGD肽与活化的血小板表面受体GP Ilb/IIIa的特异 性结合获得的靶向性，将RGD肽与YIGS肽进行缀合式修饰，制备得到上述具有靶 向抗血栓活性的多肽。本专利技术的目的之二是提供一种制备上述抗血栓活性的多肽的方法。本专利技术的目的之二是是通过以下技术方案来实现的一种制备上述抗血栓活性的多肽的方法，包括1. 采用液相合成方法，通过逐步接肽分别合成RGDS、 RGDF、 RGDV 、 YIGSR 和YIGSK的保护中间体；2. 分别脱去RGDS、 RGDF、 RGDV 、 YIGSR和YIGSK保护中间体的N端保 护基；3. 分别脱去RGDS、 RGDF、 RGDV 、 YIGSR和YIGSK保护中间体的C端保 护基；4. (a)把N端游离的RGDS保护中间体和C端游离的RGDS、 YIGSR和YIGSK 保护中间体分别进行缀合式修饰，再分别脱去缀合式修饰得到RGDSRGDS， RGDSYIGSR，RGDSYIGSK三种多肽；(b)把N端游离的RGDF保护中间体和C端游离的 RGDF、 YIGSR和YIGSK保护中间体分别进行缀合式修饰，再分别脱去缀合式修饰 得到RGDFRGDF， RGDFYIGSR， RGDFYIGSK三种多肽；(c)把N端游离的RGDV 保护中间体和C端游离的RGDV、 YIGSR和YIGSK保护中间体分别进行缀合式修 饰，再分别脱去缀合式修饰得到RGDVRGDV， RGDVYIGSR， RGDVYIGSK三种 多肽；(d)把N端游离的YIGSR保护中间体和C端游离的RGDS、 RGDF、 RGDV 、 YIGSR和YIGSK保护中间体分别进行缀合式修饰，再分别脱去缀合式修饰得到 YIGSRRGDS、 YIGSRRGDV 、 YIGSRRGDF、 YIGSRYIGSK 、 YIGSRYIGSR五 种多肽；(e)把N端游离的YIGSK保护中间体和C端游离的RGDS、RGDF、RGDV 、 YIGSR和YIGSK保护中间体分别进行缀合式修饰，再脱去缀合式修饰得到 YIGSKRGDS、 YIGSKRGDF、 YIGSKRGDV、 YIGSKYIGSK、 YIGSKYIGSR五种 多肽。其中，所述的N端保护基是对多肽的N端进行保护时所常用的保护基团，例如 可以是叔丁氧羰基(Boc);所述的C端保护基是对多肽的C端进行保护时所常用的 保护基团，例如可以是苄氧基(OBzl)，甲氧基(OMe)等。以上所述的液相合成中间体并加以保护的方法是本领域的常规并公知的技术。动物模型试验证明，本专利技术的19种缀合式修饰多肽具有较强的抗血栓活性。 为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的， 它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。 本专利技术中所出现的縮略语的说明THF 四氢呋喃 DCC 二环己基酰亚胺 DCU 二环己基脲OBzl 节氧基Boc 叔丁氧羰基 OMe 甲氧基HOBt N-羟基苯并三唑NMM N-甲基吗啉具体实施例方式实施例1 YIGSR的制备1) Boc-Ser(Bzl)-Arg(N02)-OMe的制备将0.590g (2.0 mmol) Boc-Ser(Bzl)-OH溶解在6ml无水THF中，0°C下加入 0.270g(2.0mmol)N-羟基苯并三唑(HOBt)和0.45 g(2.2 mmol) 二环己基羰二亚胺 (DCC)。搅拌10分钟后加入0.539g (2.0 mmol) HCl-NH2-Arg(N02)-OMe的无水 THF溶液。反应混合物用N-甲基吗啉(NMM)调节pH8-9， 0。C搅拌24小时。停止 反应，过滤除去沉淀出的二环己基脲(DCU)。滤液减压浓縮，残留物溶于乙酸乙酯 中，得到的溶液依次用饱和NaHC03水溶液、5%KHS04水溶液和饱和NaCl水溶液 洗。乙酸乙酯层用无水NaS04干燥3小时。滤除NaS04，滤液减压浓縮除去乙酸乙 酯。残留物用柱层析分离(CHCl3:CH30H， 30:1)，得到0.969g(95%)目标化合物。 ESI-MS(一511+。2) HCl'NH2-Ser(Bzl)-Arg(N02)-OMe的制备将0.969g (1.9mmol)Boc-Ser(Bzl)-Arg(N02)-OMe溶解在15 ml 6 mol/1氯化氢-乙酸乙酯溶液中，室温搅拌2小时，TLC检测原料点消失，减压抽去乙酸乙酯，反复加少量乙醚进行减压抽气以除去产品中的酸气。最后加少量乙醚将产品研磨成固体粉末，直接用于下一步反应。ESI-MS(m/z)411+。3) Boc-Ile-Gly-OMe的制备将0.498 g (2.0 mmol) Boc-Ile-OH-H20溶解在5 mL无水THF中，0°C下加入 0.270 g (2.0 mmol) HOBt和0.45 g(2.18 mmol) DCC。搅拌10分钟后加入0.251g (2.0 mmol)HClNH2-Gly-OMe的无水THF溶液。反应混合物用NMM调节pH 8-9， 0°C 搅拌24小时。停止反应，过滤除去沉淀出的DCU。滤液减压浓縮，残留物溶于乙 酸乙酯中，得到的溶液依次用饱和NaHC03水溶液、5XKHS04水溶液和饱和NaC本文档来自技高网...

【技术保护点】
具有靶向抗血栓活性的多肽，其特征在于，该多肽选自以下任意一种氨基酸序列：　　　　ＹＩＧＳＲＲＧＤＳ、ＹＩＧＳＲＲＧＤＶ、ＹＩＧＳＲＲＧＤＦ、ＹＩＧＳＲＹＩＧＳＫ、ＹＩＧＳＲＹＩＧＳＲ、ＹＩＧＳＫＲＧＤＳ、ＹＩＧＳＫＲＧＤＦ、ＹＩＧＳＫＲＧＤＶ、ＹＩＧＳＫＹＩＧＳＫ、ＹＩＧＳＫＹＩＧＳＲ、ＲＧＤＳＲＧＤＳ、ＲＧＤＶＲＧＤＶ、ＲＧＤＦＲＧＤＦ、ＲＧＤＳＹＩＧＳＲ、ＲＧＤＳＹＩＧＳＫ、ＲＧＤＶＹＩＧＳＲ、ＲＧＤＶＹＩＧＳＫ、ＲＧＤＦＹＩＧＳＲ、ＲＧＤＦＹＩＧＳＫ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王超，赵婧华，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：11[中国|北京]