本发明专利技术涉及一种黑莓籽多糖在制备抗血栓药物方面的应用，该黑莓籽多糖为将黑莓籽粉碎后，用水提醇沉的方法得到粗多糖，再分别通过DEAE-52纤维素柱色谱和SephadexG-100凝胶柱色谱得到三个多糖。并对这三个多糖的体内抗血栓作用进行考察，结果表明：这三个多糖均具有良好的抗血栓作用，可单独或组合用于制备抗血栓药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于医药和/或保健品
，具体涉及一种黑莓籽活性成分的提取方 法及其新用途，确切地说是。
技术介绍
黑莓Rubusspp. Blackberry为蔷薇科悬钩子属聚合果类植物，未作药用，是世界上 新兴的四种小果类果树之一。原产北美，其果实酸甜可口，具有很高的营养价值和药用价 值，除鲜食外还大部分制成速冻果、果汁、果酒和果酱等食品。文献检索发现:对黑莓的研究 主要集中在果实挥发油、黑莓籽油脂肪酸成分和黑莓叶、种子中黄酮、花色苷及维生素 E含 量分析方面。 黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工产品的副产物，含有约27.14 %的功能性油脂， 其中不饱和脂肪酸总量高达93.55 %，此外还有人体必需的氨基酸，在对抗动脉粥样硬化， 抗糖尿病、免疫调节、促进生长和智力发育等方面具有重要的作用。而多糖 (Polysaccharide)是生物体内除蛋白质和核酸以外的又一重要的生物分子，是生命活动中 起中心作用的那些分子(如遗传物质、酶、抗体、激素、膜蛋白等)不可缺少的组成成分。多糖 的研究已成为继蛋白质、核酸研究之后探索生命奥秘的有一个重大前沿。 血液中存在着互相拮抗的凝血系统和抗血栓系统(纤维蛋白溶解系统）。在生理情 况下血液中的凝血因子不断地被激活，从而产生凝血酶，形成微量的纤维蛋白，沉着于血管 内膜上。但这些微量的纤维蛋白又不断地被激活了的纤维蛋白溶解系统所溶解，同时被激 活的凝血因子也不断地被单核吞噬细胞系统所吞噬。凝血系统和纤维蛋白溶解系统的动态 平衡，既保证了血液有潜在的可凝固性又始终保证了血液的流体状态。然而，有时在某些能 促进凝固过程的因素的作用下，打破了上述的动态平衡，触发了凝血过程，便形成血栓。 血栓形成是许多疾病如心肌梗死、缺血性卒死、深静脉血栓等的基本病理过程，它 严重地危害着人类的健康，它的形成与血小板的聚集、粘附，内源性和外源性凝血系统以及 纤维蛋白的形成密切相关。根据世界卫生组织的调查报告，由于动脉粥样硬化导致的血栓 疾病引起的死亡已经排到了第一位。动脉血栓是由于动脉粥样硬化，斑块不稳定发生了斑 块的破裂，使血液里的血小板发生聚集，激活了体内的凝血系统，最后导致血栓形成。一旦 堵塞以后就会发生组织的缺血和坏死，产生严重的后果。在动脉血栓性疾病的急性或特殊 状态下，需要辅助使用抗血栓药物，才能达到更好的抗血栓效果。
技术实现思路
本专利技术目的在于克服现有技术缺陷，提供一种具有抗血栓作用的黑莓籽多糖，同 时提供其制备方法和应用。 为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案： 黑莓籽多糖的提取分离方法，其包括以下步骤： (1)将黑莓籽粉碎，室温下用石油醚脱脂，挥干石油醚后，药渣用乙醇提取，过滤，阴干 残渣，再向残渣中加入蒸馏水提取，趁热抽滤，合并滤液后减压浓缩，再向浓缩液中加入乙 醇，静置离心，得到的沉淀再加蒸馏水溶解透析以除去小分子杂质，减压浓缩，冷冻干燥即 得黑莓籽粗多糖； (2) 取黑莓籽粗多糖溶于蒸馏水中，过滤，弃去杂质后加入到DEAE-52纤维素柱色谱，依 次用蒸馏水、0.1 mol/L氯化钠溶液和0.2 mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱液采用苯酚-硫 酸法进行检测，测490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲 线，合并同一洗脱峰的多糖样品，透析、浓缩后冷冻干燥;其中，蒸馏水洗脱峰为组分1，0.1 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分2，0.2 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分3; (3) 组分1溶于蒸馏水中、过滤弃去杂质，加入到SephadexG-100凝胶柱色谱，用蒸馏水 进行洗脱，采用苯酚-硫酸法进行检测，测其在490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸 光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，得到两组洗脱峰，浓缩第2组洗脱峰，冷冻干燥得到的多糖命 SSbsp-i; (4) 组分2和组分3均采用步骤(3)的方法进行洗脱，得到单一洗脱峰，分别命名为BSP-2 和BSP-3; 黑莓籽多糖即为BSP-I、BSP-2和BSP-3中的一种或两种以上的混合物。 采用上述方法制备得到的黑莓籽多糖。 上述。本专利技术以黑莓籽为原料，用水提醇沉的方法得到粗多糖，过DEAE-52纤维素柱色谱 和SephadexG-100凝胶柱色谱得到3个多糖组分。其中，DEAE-52纤维素柱色谱:为二乙氨基 乙基型纤维素，是一种阴离子交换纤维素，常用于多糖纯化和分离。粗多糖溶液吸附于 DEAE-52后，以不同离子强度的盐进行洗脱，根据多糖的离子交换能力差异进行分离。 SephadexG-100凝胶柱色谱:是一种半合成的凝胶，基本骨架是以葡萄糖(右旋糖酐)为残基 的多糖，在链状结构间，以3-氯-1，2-环氧丙烷为交联剂，以醚桥相互连接成为三维空间的 网状高分子化合物。 本专利技术的有益效果:本专利技术对黑莓籽多糖的体内抗血栓作用进行考察，结果表明： 上述的三种多糖均具有良好的抗血栓作用，可单独或组合用于制备抗血栓药物。【附图说明】 图1为黑莓籽多糖DEAE-52洗脱曲线； 图2为组分1的SephadexG-100凝胶柱色谱洗脱曲线； 图3为组分2的SephadexG-100凝胶柱色谱洗脱曲线； 图4为组分3的SephadexG-100凝胶柱色谱洗脱曲线； 图5为标准单糖混合物的GC色谱图；图中，1为半乳糖，2为果糖，3为甘露糖，4为鼠李糖， 5为阿拉伯糖，6为木糖； 图6为BSP-I水解物的GC色谱图；图中，1为半乳糖，2为果糖，4为鼠李糖，5为阿拉伯糖， 6为木糖； 图7为BSP-2水解物的GC色谱图；图中，1为半乳糖，2为果糖，4为鼠李糖，5为阿拉伯糖，6 为木糖； 图8为BSP-3水解物的GC色谱图；图中，1为半乳糖，2为果糖，4为鼠李糖，5为阿拉伯糖。【具体实施方式】 以下结合实施例对本专利技术的技术方案作进一步地详细介绍，但本专利技术的保护范围 并不局限于此。 下述实施例中，所用黑莓籽购自河南省封丘县黑莓种植基地，为蔷薇科悬钩子属 植物黑莓(Rubusspp .Blackberry)的籽。 实施例1 1黑莓籽多糖的提取、分离、纯化 1.1黑莓籽多糖提取分离 将黑莓籽粉碎，室温下用石油醚脱脂3次，挥干石油醚后，用70V %乙醇提取3次，过滤， 阴干残渣，然后按料液比为20 mL/g的比例加入蒸馏水，80 °C下提取3次，每次3 h。趁热抽 滤，合并滤液后减压浓缩，用95V %乙醇调至乙醇的终浓度为70V %，4 °C静置24 h后离心 (10000 r/min，10 min)，得到的沉淀加蒸馏水溶解透析(48 h，每4 h换一次蒸馏水）以除去 小分子杂质，减压浓缩、冷冻干燥即得黑莓籽粗多糖。 取300 mg的黑莓籽粗多糖溶于10 mL蒸馏水中，过滤，弃去杂质后加入到DEAE-52 纤维素柱色谱中（2.5 X 60cm)，依次用蒸馏水、0.1 mol/L氯化钠溶液和0.2 mol/L氯化钠溶 液进行洗脱，洗脱液采用苯酚-硫酸法进行检测，测其在490 nm处的吸光度。以洗脱管数为 横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线（见图1)，合并同一洗脱峰的多糖样品。透析、浓缩 后冷冻干燥。其中，蒸馏水洗脱峰为组分1，〇 . I mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分2，0.2 mol/L氯化钠溶液本文档来自技高网...
【技术保护点】
黑莓籽多糖的提取分离方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将黑莓籽粉碎，室温下用石油醚脱脂，挥干石油醚后，药渣用乙醇提取，过滤，阴干残渣，再向残渣中加入蒸馏水提取，趁热抽滤，合并滤液后减压浓缩，再向浓缩液中加入乙醇，静置离心，得到的沉淀再加蒸馏水溶解透析以除去小分子杂质，减压浓缩，冷冻干燥即得黑莓籽粗多糖；（2）取黑莓籽粗多糖溶于蒸馏水中，过滤，弃去杂质后加入到DEAE‑52纤维素柱色谱，依次用蒸馏水、0.1 mol/L氯化钠溶液和0.2 mol/L氯化钠溶液进行洗脱，洗脱液采用苯酚‑硫酸法进行检测，测490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，合并同一洗脱峰的多糖样品，透析、浓缩后冷冻干燥；其中，蒸馏水洗脱峰为组分1，0.1 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分2，0.2 mol/L氯化钠溶液的洗脱峰为组分3；（3）组分1溶于蒸馏水中、过滤弃去杂质，加入到SephadexG‑100凝胶柱色谱，用蒸馏水进行洗脱，采用苯酚‑硫酸法进行检测，测其在490 nm处的吸光度，以洗脱管数为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制洗脱曲线，得到两组洗脱峰，浓缩第2组洗脱峰，冷冻干燥得到的多糖命名为BSP‑1；（4）组分2和组分3均采用步骤（3）的方法进行洗脱，得到单一洗脱峰，分别命名为BSP‑2和BSP‑3；黑莓籽多糖即为BSP‑1、BSP‑2和BSP‑3中的一种或两种以上的混合物。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：康文艺，王金梅，连朋丽，谢平耀，王学标，
申请(专利权)人：河南大学，
类型：发明
国别省市：河南;41
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