猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法。该组合疫苗包括猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗；制备方法为：用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗，混合，即得猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗；其中，猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份，猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。本发明专利技术制备得到的一种组合疫苗，其中，猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗具有协同免疫作用，可提升组合疫苗的免疫效果，减少接种次数，节省人力物力。

Combination vaccine of inactivated mycoplasma pneumonia and hog cholera live vaccine and preparation method thereof

The invention discloses a mycoplasma pneumonia inactivated vaccine and a hog cholera live vaccine combined vaccine and a preparation method thereof. The combination of vaccines including inactivated Mycoplasma hyopneumoniae vaccine and swine fever vaccine; the preparation method is as follows: a head part of the Mycoplasma hyopneumoniae vaccine dilution of a head part of the swine fever vaccine, which was mixed with Mycoplasma hyopneumoniae vaccine and swine fever vaccine which combined vaccine; inactivated Mycoplasma hyopneumoniae the vaccine is not less than CCU 108/ head, swine fever vaccine virus content of not less than 150 per head rabbit infection dose. A combination vaccine prepared by the invention of the Mycoplasma hyopneumoniae vaccine and swine fever vaccine has a synergistic immune effect, can enhance the immune effect of vaccine combination, reduce the number of doses, save manpower and material resources.

【技术实现步骤摘要】
猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法
本专利技术涉及兽用生物制品领域，具体涉及一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法。
技术介绍
猪支原体肺炎(MPS)又称猪气喘病或地方性流行性肺炎(SEP)，是由猪肺炎支原体(Mhp)引起的一种接触性慢性呼吸性传染病，不同年龄、品种的猪均能感染发病；患病猪主要表现为咳嗽和气喘，剖解时以肺部病变为主，出现“肉变样”或“胰变样”，发病率高，死亡率低，是引起继发感染，造成养猪业经济损失严重的疾病之一。猪瘟对养猪生产危害严重，我国将其列为一类重大动物疫病，当前主要采取免疫、净化等措施控制该病，而目前越来越多的猪场使用疫苗预防该病。
技术实现思路
针对现有技术中的上述不足，本专利技术提供一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法，旨在提供一种组合疫苗，提升免疫效果。为解决上述的技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗，包括猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗，用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗；其中，猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份，猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。进一步地，猪肺炎支原体灭活疫苗的制备方法如下：(1)制备一级生产种子：将冻干菌种启封，按10％的接种量将菌种接种于液体培养基中，于37～37.5℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8时，得一级生产种子，并于-20℃以下保存备用；(2)制备二级生产种子：按10％的接种量将一级生产种子接种于液体培养基中，于37～37.5℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8时，得二级生产种子，并于-20℃以下保存备用；(3)菌液培养：按8％～10％的接种量将二级生产种子接种于液体培养基中，于37℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8～7.0时，得菌液；(4)浓缩灭活：过滤步骤(3)所得菌液，并将滤液浓缩为原体积的1/10～1/2，再在2～8℃的条件下，在搅拌的同时加入菌液体积0.2％的β-丙内酯，灭活处理24h后，回温至37℃，保持2h，得猪肺炎支原体灭活疫苗。进一步地，猪瘟活疫苗的制备方法如下：(1)制备单层次代细胞；(2)制备新鲜脾毒；(3)取去脂肪、清洗后的新鲜脾毒，剪碎并研磨，再加入100mL乳汉液，过滤，收集滤液，得脾毒液，再将脾毒液于2～8℃的条件下放置60min，每15～20min振荡一次，于2～8℃、3000r/min的条件下离心15min，取上清液，并向其中加入100mL维持液，摇匀，36～37℃培养，得脾毒种；(4)除去步骤(1)所得次代细胞中的营养液，接种步骤(3)所得脾毒种，再向其中加入瓶体容积1/10的维持液，包扎后，于37℃、9～11r/h的条件下培养，得猪瘟活疫苗。进一步地，步骤(1)中培养基为改良Goodwin氏A26液体培养基。进一步地，改良Goodwin氏A26液体培养基包括0.2％水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25％酵母液以及1/80乙酸铊；其中，0.2％水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25％酵母液以及1/80乙酸铊体积比为50:30:2:1。进一步地，步骤(3)中维持液包括犊牛血清、双抗溶液和碳酸氢钠；其中，犊牛血清、双抗溶液和碳酸氢钠的体积比为4:1:6。进一步地，猪肺炎支原体毒株为HP-G株，保藏编号为CCTCCNO.V2001661。上述猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗的制备方法，包括以下步骤：用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗，混合，即得猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗；其中，猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份，猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。本专利技术的有益效果为：采用猪肺炎支原体灭活疫苗稀释猪瘟疫苗，形成一种组合疫苗，且猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟疫苗具有协同免疫功能，可有效提升组合疫苗的免疫效果。组合疫苗可简化接种程序，节省人力、物力，减少接种次数，可降低发生不良反应的几率，提升免疫效果。具体实施方式下面对本专利技术的具体实施方式进行描述，以便于本
的技术人员理解本专利技术，但应该清楚，本专利技术不限于具体实施方式的范围，对本
的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本专利技术的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本专利技术构思的专利技术创造均在保护之列。实施例一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗及其制备方法，包括以下步骤：1、猪肺炎支原体灭活疫苗的制备(1)制备一级生产种子：将冻干的菌种启封，然后按照10％的接种量将菌种接种于改良Goodwin氏A26液体培养基中，于37～37.5℃振荡培养3～7天，待培养基pH值下降至6.8时，即可收获一级生产种子，并将其保存于-20℃以下，保存时间不超过2个月，继带不超过5代；改良Goodwin氏A26液体培养基包括0.2％水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25％酵母液以及1/80乙酸铊；其中，0.2％水解乳蛋白Hanks液、牛心消化液、25％酵母液以及1/80乙酸铊体积比为50:30:2:1。培养基制备方法：将上述成份混匀，于121℃的条件下，高压灭菌20分钟；待培养基温度下降到37℃时，加入20％无特异性抗体猪血清(56℃灭活30分钟)160ml，青霉素(250单位/ml)20万，用NaOH调pH值至7.5～7.6。(2)制备二级生产种子：按10％的接种量将一级生产种植接种于改良Goodwin氏A26液体培养基中，于37～37.5℃振荡培养3～7天，待培养基pH值下降至6.8时，即可收获二级生产种子，并将其保存于-20℃以下，保存时间不超过2个月；(3)菌液培养：按8～10％的接种量将二级生产种子接种于改良Goodwin氏A26液体培养基中，于37℃搅拌培养3～7天，待培养基pH值下降至6.8～7.0时，收获菌液；(4)浓缩灭活：过滤步骤(3)所得菌液，得到滤液，然后将滤液浓缩为其体积的1/10～1/2，在搅拌的状态下加入菌液体积0.2％的β-丙内酯，于2～8℃灭活24h，然后再回温至37℃，保持2h，得到猪肺炎支原体灭活疫苗。2、猪瘟活疫苗的制备(1)制备单层次代细胞采集犊牛睾丸：初生犊牛经颈动脉采血致死后，用0.2％新洁尔灭溶液冲洗阴囊及其周围皮肤，擦干后，用5％碘酊消毒一次，75％酒精脱碘，将睾丸压入阴囊内，固定睾丸，在预定切口处用消毒酒精再次消毒，切下阴囊，打开装有矮缸的专用包装袋，以无菌操作采取牛睾丸，浸泡待用。将装有牛睾丸的矮缸移到百级工作台，将处理后的牛睾丸用镊子夹出放在小平皿上，以无菌操作除去被膜、副睾，称量睾丸重量，用其重量除以5，确定所用细胞瓶数。组织的消化：将0.25％胰蛋白酶溶液倒入500ml抽滤瓶中，加入适量的7.5％的碳酸氢钠，使溶液pH值为8，将牛睾丸倒入抽滤瓶中，塞紧瓶口，置37℃水浴锅中水浴，消化完毕后，用消毒酒精消毒抽滤瓶表面，移至百级工作台。细胞分散：弃去胰蛋白酶溶液后，用乳汉液脱酶，再用玻珠振摇法分散细胞，并加入乳汉液稀释，待组织块沉淀后，通过纱囊过滤收取细胞悬液于细胞瓶中。单层原代细胞的制备：将细胞悬液加入包括犊牛血清、双抗溶液和碳酸氢钠溶液的生长液中，充分摇匀，再分装于细胞瓶中，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗，其特征在于，包括猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗，用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗；其中，猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份，猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。

【技术特征摘要】
1.一种猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗，其特征在于，包括猪肺炎支原体灭活疫苗和猪瘟活疫苗，用一头份的猪肺炎支原体灭活疫苗稀释一头份的猪瘟活疫苗；其中，猪肺炎支原体灭活疫苗CCU不低于108/头份，猪瘟活疫苗病毒每头份含量不低于150兔体感染量。2.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗，其特征在于，所述猪肺炎支原体灭活疫苗的制备方法如下：(1)制备一级生产种子：将冻干菌种启封，按10％的接种量将菌种接种于液体培养基中，于37～37.5℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8时，得一级生产种子，并于-20℃以下保存备用；(2)制备二级生产种子：按10％的接种量将一级生产种子接种于液体培养基中，于37～37.5℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8时，得二级生产种子，并于-20℃以下保存备用；(3)菌液培养：按8％～10％的接种量将二级生产种子接种于液体培养基中，于37℃培养3～7天，且培养基pH值为6.8～7.0时，得菌液；(4)浓缩灭活：过滤步骤(3)所得菌液，并将菌液浓缩为原体积的1/10～1/2，再在2～8℃的条件下，在搅拌的同时加入菌液体积0.2％的β-丙内酯，灭活处理24h后，回温至37℃，保持2h，得猪肺炎支原体灭活疫苗。3.根据权利要求1所述的猪肺炎支原体灭活疫苗与猪瘟活疫苗组合疫苗，其特征在于，所述猪瘟活疫苗的制备方法如下：(1)制备单层次代细胞；(2)制备新鲜脾毒；(3)取去脂肪、清洗后的新鲜脾毒，剪碎并研磨，再加入100mL乳汉液，过滤，收集滤液，得脾毒液，再将脾毒液于2～8℃的条件下放置60min，每15～20min振荡一次，于2...

【专利技术属性】
技术研发人员：谢建勇，何信群，龚文波，吴越，张莉，李金海，方鹏飞，张洪，杜德燕，
申请(专利权)人：四川省华派生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51