二核苷酸结晶制造技术

本发明专利技术涉及Ｐ↑［１］－（２’－脱氧胞苷５’－）Ｐ↑［４］－（尿苷５’－）－四磷酸酯（ｄＣＰ４Ｕ）或其盐的结晶和制备所述结晶的方法。本发明专利技术还提供一种制备ｄＣＰ４Ｕ的方法，该方法包括使尿苷５’－一磷酸酯（ＵＭＰ）、２’－脱氧胞苷５’－一磷酸酯（ｄＣＭＰ）、二苯基磷酰氯（ＤＰＣ）和焦磷酸盐（Ｐｐｉ）反应。通过本发明专利技术的方法获得的ｄＣＰ４Ｕ的结晶与冻干产物相比具有高纯度和高稳定性并且没有吸湿性，由此在制备药物中用作有效的原材料。按照本发明专利技术的制备ｄＣＰ４Ｕ的方法有效使用低廉的ＵＭＰ作为原料并且提供高收率。所以，所述方法适合ｄＣＰ４Ｕ的大规模合成。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸酯(dCP4U)或其药学可接受盐(此后可以简单称为“dCP4U”)，其适于作为慢性支气管炎、鼻窦炎等的治疗剂；本专利技术涉及制备所述结晶的方法；并且涉及有效制备dCP4U的方法。迄今为止，还无法获得结晶形式的dCP4U，并且dCP4U只能够以白色粉末(白色固体)的形式经过冷冻干燥制得。常规获得的dCP4U的粉状产物具有82％的低纯度(通过HPLC测定)。特别是，难以把dCP4U与作为起始原料的尿苷5’-三磷酸(UTP)分开，而且只有通过惯用的离子交换色谱才能够制备高纯dCP4U，但这非常困难(WO98/34942)。上述低醇的白色粉末具有如吸湿性的缺点。所以，由dCP4U起始的药物制备必须在其湿度被严格控制的专用设备中进行。甚至在药物的制备之后，产品必须密封包装。此外，由于粉状产物的稳定性差导致药物具有非常短的有效期，人们期望获得高纯度和稳定的dCP4U结晶。dCP4U是由2’-脱氧胞苷5’-一磷酸(dCMP)和UTP通过活化剂如二环己基碳二亚胺(DCC)的使用来合成。然而，常规方法提供的合成收率非常低；即低达约9％(重量)(参见WO 98/24942的实施例20)，并且可能永远不能作为实用方法。因此，人们还希望开发出可以高收率和大规模制备dCP4U的方法。鉴于述观点，本专利技术的目的在于提供稳定的dCP4U结晶，其适合用来制备药物。本专利技术的另一目的在于提供制备所述结晶的方法。本专利技术的再一目的是提供适合大规模dCP4U生产的高效方法。本专利技术人在通过使用低廉的尿苷5’-一磷酸(UMP)代替昂贵的UTP合成dCP4U的方法上也作了大量研究，并且已经发现通过二苯基磷酰氯(DPC)和焦磷酸盐(PPi)的使用可以有效制备dCP4U。本专利技术在这些发现的基础上完成。所以，本专利技术提供dCP4U的结晶。本专利技术还提供一种用于制备dCP4U的结晶的方法，该方法包括通过阴离子交换色谱和活性炭色谱来纯化dCP4U粗品，并且在提纯的dCP4U溶液中加入亲水性有机溶剂，由此沉淀出结晶形式的dCP4U。本专利技术还提供一种制备dCP4U的方法，其包括使UMP、dCMP、DPC和PPi反应。附图简述附图说明图1是表示结晶dCP4U·4Na(3.5-水合物)的晶形的相片。该相片是在偏光显微镜(放大率×440)下拍摄，其中图像中的1mm对应于25μm。图2表示结晶dCP4U·4Na(3.5-水合物)的X射线衍射光谱。图3表示dCP4U·4Na(十水合物)的X射线衍射光谱。图4表示白色粉状dCP4U(冷冻干燥产物)的X射线衍射光谱。图5表示结晶dCP4U·4Na(3.5-水合物)的13C-CPMAS-NMR光谱。图6表示dCP4U·4Na(十水合物)的13C-CPMAS-NMR光谱。图7表示白色粉状dCP4U(冷冻干燥产物)的13C-CPMAS-NMR光谱。苯乙烯或丙烯酸树脂可以在实施色谱技术中作为阴离子交换树脂使用。可以使用的树脂的实例包括强碱型阴离子交换树脂如AMBERLITE IRA 402(Rohm & Hass Co.)、DIAION PA-312和DIAIONSA-11A(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)，和弱碱型阴离子交换树脂如AMBERLITE IRA 67(Rohm & Hass Co.)和DIAION WA-30(Mitsubishi Chemical Co.Ltd.)。活性炭可以是色谱级活性炭，其被压碎或成形为颗粒，并且可以包括市售产品(例如Wako Pure Chemical Industries，Ltd.和Futamura Chemical Industries，Co.，Ltd.的那些产品)。色谱可以以分批的方式、通过柱的使用等进行。当进行柱色谱时，酸性水溶液或其与具有提高离子强度的盐(如氯化钠)的混合物可以用作阴离子交换色谱的洗脱剂；并且水或碱(如氢氧化钠)的水溶液可以用作活性炭柱色谱的洗脱剂。利用进行小规模的预备试验以便选择各洗脱剂在0.001至10M范围内的适当浓度。(2)dCP4U的结晶通过在含有由此纯化的dCP4U的溶液中加入亲水性有机溶剂可以结晶出dCP4U。可以使用的亲水性有机溶剂的实例包括含有等于或小于6个碳原子的醇，如甲醇和乙醇；酮类，如丙酮；醚类，如二噁烷；腈类，如乙腈；和酰胺，如二甲基甲酰胺。其中，特别优选醇类化合物，尤其是乙醇。更加具体地说，由此纯化的dCP4U的溶液，或经溶液浓缩获得的浆液，可以选择性地处理以调整pH至5-10，优选6-9；并且在60℃或更低温度下，优选在等于或低于20℃的温度下，向上述溶液或浆液中加入亲水性有机溶剂，由此沉淀出溶质，其为dCP4U的稳定结晶。本专利技术的由此制得的dCP4U结晶含有等于或高于95％的dCP4U和等于或小于3％的UTP。更加可取地，dCP4U结晶含有等于或高于97％的dCP4U，和等于或小于2％的UTP。更加优选地，dCP4U结晶含有等于或高于98％的dCP4U，和等于或小于1％的UTP。如此高纯度dCP4U结晶可以是盐、水合物或水合物盐的形式。所述盐的实例包括药学可接受盐，例如碱金属盐，如钠盐和钾盐；碱土金属盐，如钙盐和镁盐；和铵盐。所述的dCP4U可以被1-4个金属原子取代形成盐。上述水合物可以含有1-14个分子的水，这些水键合或附着在dCP4U的一个分子上；并且上述水合物盐可以含有1-14个分子的水，这些水结合或附着于dCP4U的碱金属盐的一个分子上。此外，按照本专利技术dCP4U的结晶还可以包括其互变异构体。由此制得的dCP4U结晶选择性地经过常规方法干燥，如减压下干燥、空气流下干燥，或通过加热干燥，并且随后被置于容器(例如瓶、袋、罐、安瓿)内。完成包装在容器中，容器可以是敞开、封闭、气密或熔封的。从维持结晶的储藏稳定性的角度考虑，敞开在空气中包装是不可取的。按照本专利技术制备dCP4U的方法包括UMP、dCMP、DPC和PPi反应。具体地说，该方法包括UMP与DPC反应，由此合成UMP二苯基磷酸酯(UMP-DPP)；含UMP-DPP的反应混合物进一步用PPi处理，由此在混合物中形成UTP；和，无需从反应混合物中分离，由此生成的UTP与dCMP在DPC的存在下反应，由此生成目标dCP4U。在由UMP合成UMP-DPP中，可以将常规制得的UMP三烷基胺盐(例如UMP三丁基胺盐)溶于溶剂中。所述溶剂的实例包括酰胺类，如DMF和二甲基乙酰胺(DMAC)；环醚类，如二噁烷和四氢呋喃；酮类，例如丙酮；和二甲基咪唑啉酮、六甲基磷三酰胺；或两种或多种这些溶剂的混合物。所以，将DPC和任选的三烷基胺加入到溶液中，令该混合物在10-50℃下反应约30分钟至5小时。与UMP-DPP反应的PPi优选是PPi-有机碱盐。所述盐的实例包括己基胺盐、二丁基胺盐、三乙胺盐和三丁基胺盐。在UMP-DPP与PPi-有机碱盐的反应中，PPi-有机碱盐可以溶于溶剂中。所述溶剂的实例包括酰胺，如DMF、DMAC和甲酰胺；环醚类，如二噁烷和四氢呋喃；酮类，如丙酮；和二甲基咪唑啉酮、六甲基磷三酰胺、二甲基亚砜、乙腈；或两种或多种这些溶剂的混合物。所以，将溶液本文档来自技高网...

【技术保护点】
Ｐ↑［１］－（２’－脱氧胞苷５’－）Ｐ↑［４］－（尿苷５’－）－四磷酸酯或其盐的结晶。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：盛健也，宫下孝德，前田秀明，佐藤浩史，野田丰，
申请(专利权)人：雅玛山酱油株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]