白芍醇提物、4‑O‑没食子酰基白芍苷及其制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及一种4‑O‑没食子酰基白芍苷、其制备方法以及其制备具有β‑分泌酶抑制作用的药物的新用途。其特征是其制备的药物可以治疗阿尔兹海默症、脑卒中等神经退行性疾病。本发明专利技术的目的就是发掘了白芍醇提物、4‑O‑没食子酰基白芍苷的β‑分泌酶抑制作用的前景，开拓了一个新的药用领域。

4, alcohol extract of Radix Paeoniae Alba O galloyl paeoniflorin and its preparation and Application

New uses of the present invention relates to a medicine 4 O galloyl paeoniflorin, the preparation method and the preparation of beta enzyme inhibiting the secretion. The invention is characterized in that the medicine prepared by the invention can be used for the treatment of Alzheimer's disease and stroke secondary neurodegenerative diseases. The purpose of the invention is explored, 4 ethanol extract of Radix Paeoniae Alba O galloyl albiflorin beta secretase inhibition prospect, has opened up a new field of medicine.

【技术实现步骤摘要】

：本专利技术涉及白芍醇提物。其制备方法及已获得的4-O-没食子酰基白芍苷制备β-分泌酶的抑制作用的药物的新用途。
技术介绍
：阿尔兹海默症(Alzheimer'sdisease，AD)是以进行性痴呆为特征的神经退行性疾病的一种，多发于老年人群中，主要表现为老年斑、神经纤维缠结的产生及广泛性的神经缺失。脑内神经节间凝聚态β-淀粉样蛋白(β-amyloid，Aβ)的沉积形成老年斑及胞内tau蛋白的高度磷酸化形成神经缠结被公认为AD的主要病理特征。近来研究发现，不溶性Aβ的产生和积聚主要是淀粉样前体蛋白(APP)相继经过β-分泌酶(BACE1)和γ-分泌酶剪切后的产物，继而启动了神经毒性的级联反应，导致氧化应激、炎症反应和不可逆神经损伤的发生。因此，抑制β-分泌酶和γ-分泌酶均可减轻AD的症状，在研发治疗AD的药物中备受瞩目。然而，γ-分泌酶抑制剂在开发中遇到了一些与靶向性(target-based)毒性相关的挑战，如γ-分泌酶抑制剂在Notch信号通路及其它参与生理和发育相关蛋白底物上的作用。与之相反，近年来β-分泌酶抑制剂的开发取得了可喜的成就，表现出靶向性强，副作用小的优势。因此，β-分泌酶作为Aβ产生过程中的限速酶，已经成为研发预防和治疗AD药物的可靠靶点。白芍(PaeonialactifloraPall.)也称白花芍药，毛茛科芍药属植物。不仅是药用植物(其根入药)，还是一种功能性食品，在亚洲广泛使用，已有2000多年的历史。作为观赏花卉和食物的白芍具有很多药理作用，主要表现在抗凝、抗抑郁、抗氧化、及保肝等方面。经过前期的工作我们已经获得白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷单体并确定其具有抑制β-分泌酶的生物活性
技术实现思路
：专利技术目的：本专利技术提供了白芍醇提物：4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法；及其制备用于治疗阿尔兹海默症、脑卒中等神经退行性疾病的新型药物的应用。技术方案：一种白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷，其特征在于：所述4-O-没食子酰基白芍苷为如下通式所示的化合物：所述的白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)取白芍药材，用体积百分比浓度60％乙醇回流提取3次，提取温度80～90℃，每次提取时间为两小时；(2)回收步骤(1)中的乙醇，得到浸膏；(3)将所述浸膏分散于水中，萃取液萃取；(4)将步骤(3)中的萃取物经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、再经SephadexLH-20分离后，通过制备液相，得到化合物，即为4-O-没食子酰基白芍苷。所述的4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中SephadexLH-20分离的流动相成分及比例为二氯甲烷：甲醇＝1:1。所述的4-O-没食子酰基白芍苷在制备治疗神经退行性疾病的药物的应用。所述的4-O-没食子酰基白芍苷在制备治疗神经退行性疾病的药物的应用，其特征在于：所述神经退行性包括阿尔兹海默症和脑卒中。白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷对β-分泌酶抑制作用的检测方法，其特征在于：该方法按以下步骤进行：(1)将10mL缓冲液、10mLBACE1、10mL底物和10mL待检样品溶于10％DMSO中，25℃下避光孵育60min，所述待检样品为2，10，50，100μM/L4-O-没食子酰基白芍苷；(2)通过微孔板荧光谱仪测其荧光强度，激发光采用545nm，发射光采用585nm，测量得到抑制百分率；公式为：抑制百分率(％)＝1﹣[(S60﹣S0)/(C60﹣C0)]×100其中：C60为空白对照组：酶、缓冲液、底物孵育60min后检测到的荧光强度；C0为空白对照组开始时检测得到的荧光强度；S60为孵育60min后检测组检测到的荧光强度；S0为监测组开始时检测到的荧光强度。优点及效果：本专利技术发掘了白芍及4-O-没食子酰基白芍苷及其类似物对于阿尔兹海默症、脑卒中等神经退行性疾病制药方面的开发前景，开拓了一个新的药用领域。附图说明：图1为本专利技术4-O-没食子酰基白芍苷结构式；图2为白芍醇提物对β-分泌酶抑制作用的结果示意图；图3为4-O-没食子酰基白芍苷对β-分泌酶抑制作用的结果示意图。具体实施方式：本专利技术是白芍醇提物、一种4-O-没食子酰基白芍苷，其特征在于：所述4-O-没食子酰基白芍苷为如下通式所示的化合物：还包括从白芍药材中提取4-O-没食子酰基白芍苷的方法，该方法包括以下步骤：(1)取白芍药材，用体积百分比浓度60％乙醇回流提取3次，提取温度80～90℃，每次提取时间为两小时；(2)回收步骤(1)中的乙醇，得到浸膏；(3)将所述浸膏分散于水中，萃取液萃取；(4)将步骤(3)中的萃取物经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、再经SephadexLH-20分离后，通过制备液相，得到化合物，即为4-O-没食子酰基白芍苷。上述的4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，所述步骤(4)中SephadexLH-20分离的流动相成分及比例为二氯甲烷：甲醇＝1:1。还包括4-O-没食子酰基白芍苷在制备治疗神经退行性疾病的药物方面的应用。所述的4-O-没食子酰基白芍苷在制备治疗神经退行性疾病的药物的应用，其特征在于：所述神经退行性包括阿尔兹海默症和脑卒中。本专利技术采用荧光共振能量转移法(FRET法)测定白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷对β-分泌酶(BACE1)的抑制作用，结果表明白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷具有显著的β-分泌酶(BACE1)的抑制作用，因此可以用于研究开发治疗阿尔兹海默症、脑卒中等神经退行性疾病的新型药物。通过实施例来对本专利技术进行说明：实施例1：一种如权利要求1所述的白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，其特征是：取白芍药材，用体积百分比浓度60％乙醇80～90℃回流提取3次，每次2小时，回收乙醇，得浸膏(该浸膏即为白芍醇提物)；将浸膏分散于水中，萃取液萃取；将萃取物经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、再经SephadexLH-20分离后(二氯甲烷-甲醇＝1:1)，通过制备液相，得到化合物1，结合理化性质和现代波谱学手段鉴定出为4-O-没食子酰基白芍苷。白芍醇提物对β-分泌酶抑制作用的检测：将10mL缓冲液、10mLBACE1、10mL底物和10mL待检样品(10，50，100，200mg/mL白芍醇提物)溶于10％DMSO中，25℃下避光孵育60min。微孔板荧光谱仪测其荧光强度，激发光采用545nm，发射光采用585nm，测其抑制百分率。公式如下：抑制百分率(％)＝1﹣[(S60﹣S0)/(C60﹣C0)]×100(C60表示空白对照组【酶、缓冲液、底物】孵育60min后检测到的荧光强度；C0表示空白对照组开始时检测得到的荧光强度；S60表示孵育60min后检测组检测到的荧光强度；S0表示监测组开始时检测到的荧光强度)。结果如下：不同浓度的白芍醇提物可以剂量依赖性的抑制β-分泌酶的活性，结果如图2所示。4-O-没食子酰基白芍苷对β-分泌酶抑制作用的检测：将10mL缓冲液、10mLBACE1、10mL底物和10mL待检样品(2，10，50，100μM/L4-O-没食子酰基白芍苷)溶于10％DMSO中，25℃下避光孵育60min。微孔板荧光谱仪测其荧光强度本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种白芍醇提物、4‑O‑没食子酰基白芍苷，其特征在于：所述4‑O‑没食子酰基白芍苷为如下通式所示的化合物：

【技术特征摘要】
1.一种白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷，其特征在于：所述4-O-没食子酰基白芍苷为如下通式所示的化合物：2.一种如权利要求1所述的白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：(1)取白芍药材，用体积百分比浓度60％的乙醇回流提取3次，提取温度80～90℃，每次提取时间为两小时；(2)回收步骤(1)中的乙醇，得到浸膏，即白芍醇提物；(3)将所述浸膏分散于水中，萃取液萃取；(4)将步骤(3)中的萃取物经硅胶柱色谱二氯甲烷-甲醇梯度洗脱、再经SephadexLH-20分离后，通过制备液相，得到化合物，即为4-O-没食子酰基白芍苷。3.根据权利要求2所述的白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷的制备方法，其特征在于：所述步骤(4)中SephadexLH-20分离的流动相成分及比例为二氯甲烷：甲醇＝1:1。4.如权利要求1所述的白芍醇提物、4-O-没食子酰基白芍苷在制备治疗神经退行性疾病的药物的应用。...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵庆春，胡晓龙，李业波，孟威宏，
申请(专利权)人：赵庆春，
类型：发明
国别省市：辽宁;21