一种分离提纯１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法技术

本发明专利技术公开了一种分离提纯１０－ＤＡＢⅢ的方法。该方法采用正反相色谱技术相结合，将正相色谱作为第一级处理，去除了大部分杂质，有利于保护成本较高的反相色谱固定相，延长反相色谱固定相的使用寿命；而反相色谱可以处理较大的上样量，并且对正相色谱不易分离掉的一部分杂质有更好的去除效果，溶剂易回收且成本也更低廉。因此，将正反相色谱技术结合不但可以获得纯度大于９９．５％的１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ，还能够降低成本。此外，本发明专利技术还采用了两级色谱串联分离技术，通过预处理柱分离一部分杂质，再串接分离柱进行细分离，提高了分离效果，增加了色谱柱的负载上样量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法，尤其涉及一种结合正反相液相色谱技术分离提纯10-去乙酰基巴卡亭III的方法。
技术介绍
10-去乙酰基巴卡亭III(10-DeacetylbaccatinIII，以下简称10-DABIII)的分子结构式如下 10-DABIII是合成抗癌药物多烯紫杉醇和半合成紫杉醇的主要原料，它主要存在于红豆杉的枝、叶、皮、根内。随着紫杉烷系抗癌药的独特疗效得到证实，该类药物的市场需求量与日俱增，这就迫切的需要更经济更合理的利用现有的红豆杉植物，尽可能多的并且高效的从红豆杉的有效部位中分离提纯所需要的物质，减少对现有红豆杉资源的浪费。Ramadoss等(USP.6,124,482，2000)用脂肪醇浸提欧洲红豆杉的干燥树叶，提取液部分浓缩后用脂肪酮萃取，取出不溶物，然后把母液旋转蒸发干燥，将得到的固体用水和酮的混合液溶解，除去不溶物，经脱色，再利用有机溶剂进行萃取，有机层结晶得到纯度为93.5～94.1％的10-DABIII。Margraff等(USP.5,736,366，1998)用水浸提欧洲红豆杉，调节浸提液的PH值至4.6-5.4之间，利用固相萃取分离10-DABIII，结晶，所得产品的纯度为75～90％，收率在75.4～92％之间。Gaullier等(USP.5,453,521；USP.5,393,895，1998)用脂肪醇提取欧洲红豆杉枝叶，用水稀释溶液，去除不溶物，完全除掉酒精，用有机溶剂萃取水层，结晶，得到产品纯度为75.8～93.8％，收率为69.5～93.8％。Nair等(USP.5,478,736，1995)用含有50～95％的甲醇、乙醇或丙酮的水溶液浸提红豆杉组织，用活性炭过滤得到的浸提液，并利用真空加压的正相色谱分离，再利用中压色谱柱分离，收集相应馏分，得到10-DABIII。国际公布号为WO94/07882的专利文献中公开了用甲醇浸提红豆杉组织，得到的浸提液用水稀释，去除不溶物，除尽甲醇后得到的溶液用合适的有机溶剂萃取，结晶得到10-DABIII，纯度95.8％，收率为93.6％。中国专利申请公开说明书CN1398859A中公开了采用水浸提红豆杉枝叶残渣，提取液喷雾干燥，再利用高压正相色谱柱分离，分段收集淋洗液，得纯度为99.5％以上的10-DABIII。中国专利申请公开说明书CN1616441A中公开了用连续渗漉提取红豆杉枝叶中的紫杉烷类化合物，经过硅胶柱层析，得到10-DABIII。中国专利申请公开说明书CN1660827A中公开了采用70～80％乙醇提取红豆杉枝叶，浓缩浸提液，去除沉淀物，用大孔吸附树脂吸附滤液中10-DABIII，乙醇洗脱，得到10-DABIII粗品。中国专利申请公开说明书CN1473821A中公开了用醇类溶剂从红豆杉超细粉(粒径≤10μm)中快速提取10-DABIII，然后用萃取法获得5～10％粗品原料，经硅胶柱层析，常压色谱柱层析以及水解等提纯、转化、精制步骤，工业化获得纯度大于99.5％以上的10-DABIII。Rao等(Pharmaceutical Research 12(7)，1995)采用甲醇浸提红豆杉组织，浸提液用氯仿萃取后浓缩蒸干，将所得的提取物溶于乙腈，通过反相色谱进行分离，分段收集含10-DABIII的淋洗液后两次结晶得到10-DABIII。上述方法主要采用醇类溶剂提取红豆杉枝叶中的10-DABIII，然后分别采用结晶，正相硅胶柱层析或反相色谱分离等方法进行提纯，因此，这些方法存在以下缺陷收率较低、杂质分离不彻底、处理量小、大量使用有机溶剂导致成本偏高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于，提供一种能有效去除杂质，高收率地获得高纯度的10-DABIII的方法。本专利技术的分离提纯10-DABIII的方法包括以下步骤1)用含有机溶剂50～90体积％的水性提取剂于30-40℃提取红豆杉枝叶，并将提取物吸附在硅胶上，得到硅胶吸附料；2)将步骤1)所得的硅胶吸附料装入第一正相预处理柱，以洗脱液洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液，减压浓缩除去70～80体积％的溶剂，然后在浓缩液中加入硅胶，蒸干溶剂，得到负载了提取物的硅胶吸附料；3)将步骤2)所得的硅胶吸附料装入第二正相预处理柱，首先以洗脱液洗脱，然后串接装填了硅胶的正相分离柱，继续以上述洗脱液进行梯度洗脱，将含10-DABIII的洗脱液合并，减压浓缩除去50～60体积％的溶剂，得到10-DABIII浓缩液；4)在步骤3)所得的10-DABIII浓缩液中加入反相固定相，蒸干溶剂，得到反相吸附料，将反相吸附料装入反相预处理柱，然后串接装填了反相固定相的反相分离柱，以含有机溶剂5～60体积％的水性洗脱液梯度洗脱，收集含10-DABIII的洗脱液；5)将步骤4)所得的含10-DABIII的洗脱液减压浓缩，除去有机溶剂，剩余溶液经萃取、浓缩、结晶后，得到10-DABIII。在步骤1)中，所述的水性提取剂是指有机溶剂与水的混合溶剂，其中的有机溶剂可选自甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯、乙酸甲酯或乙酸丁酯中的一种或多种。步骤1)中将提取物吸附在硅胶上的步骤可以包括将所得提取液减压浓缩，除去其中的有机溶剂，然后将剩余液静置，过滤，将滤液以萃取剂萃取3次，合并有机相，加入质量为红豆杉枝叶质量的0.5-3％的硅胶，减压除去有机溶剂，得到硅胶吸附料，所述的萃取剂可选自乙酸乙酯、乙酸甲酯、乙酸丁酯、乙酸丙酯、二氯甲烷、1，1-二氯甲烷、1，2-二氯甲烷或三氯甲烷中的一种或多种。所得的沉淀物可用于回收其他的紫杉烷类。步骤1)中所述的红豆杉可以是浆果(欧洲)红豆杉(T.baccata)、太平洋红豆杉(T.brevifolia)、加拿大红豆杉(T.canadensis)、中国红豆杉(T.chinensis)、东北红豆杉(T.cuspidata)、佛罗里达红豆杉(T.floridana)、西藏红豆杉(T.wallichiana)、云南红豆杉(T.yunnanensis)或南方红豆杉(T.media)。步骤2)中，在作为第一正相预处理柱的未装填硅胶的色谱柱内装入步骤1)所得的硅胶吸附料，经洗脱液洗脱，进行第一次提纯，以去除部分杂质。所述的洗脱液可选自下述混合溶剂中的一种乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和环己烷，且混合溶剂中两种溶剂的体积比为1∶1至1∶9；步骤2)中在所述的浓缩液中加入硅胶的量可以为步骤1)中的红豆杉枝叶质量的0.5-3％。步骤3)中，在作为第二正相预处理柱的未装填硅胶的色谱柱内装入步骤2)所得的硅胶吸附料，经洗脱液洗脱，然后串接装填了硅胶的正相分离柱，进行第二次提纯，以去除大部分的杂质，从而有利于保护成本较高的反相色谱固定相。所述的洗脱液可选自下述混合溶剂中的一种乙酸乙酯和石油醚、乙酸乙酯和己烷，或乙酸乙酯和环己烷，且混合溶剂中两种溶剂的体积比为1∶1至1∶4，并可以首先以所述的洗脱液洗脱约2倍柱体积，然后串接正相分离柱，继续以所述洗脱液进行梯度洗脱。步骤4)中的反相分离柱中所使用的反相固定相可以是以硅胶或氧化铝为基质，键合或包覆十八烷基硅烷、聚乙烯、聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一种，或交联聚苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯中的一种。在所述的浓本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离提纯１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的方法，包括以下步骤：１）用含有机溶剂５０～９０体积％的水性提取剂于３０－４０℃提取红豆杉枝叶，并将提取物吸附在硅胶上，得到硅胶吸附料；２）将步骤１）所得的硅胶吸附料装入第一正相预处理柱，以洗脱液洗脱，收集含１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的洗脱液，减压浓缩除去７０～８０体积％的溶剂，然后在浓缩液中加入硅胶，蒸干溶剂，得到负载了提取物的硅胶吸附料；３）将步骤２）所得的硅胶吸附料装入第二正相预处理柱，首先以洗脱液洗脱，然后串接装填了硅胶的正相分离柱，继续以上述洗脱液进行梯度洗脱，将含１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的洗脱液合并，减压浓缩除去５０～６０体积％的溶剂，得到１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ浓缩液；４）在步骤３）所得的１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ浓缩液中加入反相固定相，蒸干溶剂，得到反相吸附料，将反相吸附料装入反相预处理柱，然后串接装填了反相固定相的反相分离柱，以含有机溶剂５～６０体积％的水性洗脱液梯度洗脱，收集含１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的洗脱液；５）将步骤４）所得的含１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ的洗脱液减压浓缩，除去有机溶剂，剩余溶液经萃取、浓缩、结晶后，得到１０－去乙酰基巴卡亭Ⅲ。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：朱德权，张平，苏萌，
申请(专利权)人：北京信汇科技有限公司，
类型：发明
国别省市：11[]