苯甲酸三氮唑类抗流感病毒化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一类苯甲酸三氮唑类抗流感病毒化合物、它们的制备方法以及它们的医药用途。药理试验结果显示，本发明专利技术化合物在体内外对流感病毒及奥司他韦耐药突变株均具有高效的抑制效果。因此，本发明专利技术的化合物可用于流感的治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物化学领域，具体涉及一类苯甲酸三氮唑类抗流感病毒化合物、它们的制备方法以及它们的医药用途。
技术介绍
由病原性微生物流感病毒引起的流行性感冒是一种严重威胁人类生命和健康的呼吸道传染性疾病，其传染性强，分布面广，患者急起高热、全身疼痛、显著乏力。流感病毒可分为不同亚型，如A/California/7/2009(H1N1)、A/Beijing/32/92(H3N2)、A/Vienam/1203/2004(H5N1)、Anhui/1/2013(H7N9)等。流感病毒可以引起非常严重的并发症和死亡，对其预防和控制耗费着大量的社会资源。鉴于疫苗研发相对滞后，目前临床上使用的特异性抗流感病毒药物主要是M2离子通道阻断剂(如金刚烷胺和金刚乙胺)、神经氨酸酶(NA)抑制剂(如奥司他韦和扎那米韦)和RNA聚合酶抑制剂(如利巴韦林)等。金刚烷胺和金刚乙胺用于流感的预防和治疗已有30多年的历史，但因存在神经毒性和对乙型流感毒无效等缺陷，限制了其临床上的广泛应用。以流感病毒神经氨酸酶抑制剂为代表的抗病毒药物成为迄今抵抗流感最有效的策略。目前临床应用最广泛的药物奥司他韦(Oseltamivir，商品名：达菲)和扎那米韦(Zanamivir，商品名：瑞乐沙)通过与NA催化中心的结合，选择性抑制NA的活性，阻止子代病毒颗粒的释放和扩散，从而有效治疗流感和缓解流感症状。但随着给药的增多，奥司他韦耐药毒株频现，NA的酶活性位点与抑制剂的亲和力降低，极大地限制了对耐药性流感的治疗效果。此外，奥司他韦和扎那米韦由于都含有多个手性中心，合成其光学异构体的步骤繁琐，成本高，使得这些药物价格昂贵。1999年WayneJ.BrouiLLette等在专利WO99/14191发现了苯甲酸类化合物BANA-206为一个活性较好的苯甲酸类神经氨酸酶抑制剂，其对NA的抑制作用达到纳摩尔级。2006年Li等在Bioorg.Med.Chem.Lett.报道了通过在侧链引入三氮唑类取代基，可得到与扎那米韦活性相近的化合物，该类化合物对细胞培养的流感病毒株具有高选择的抗病毒活性。我们以苯甲酸类化合物作为母核，运用拼合原理和功能团原理，在其3位侧链引入三氮唑类取代基，以期获得高活性的抗流感病毒化合物。
技术实现思路
本专利技术公开了一系列苯甲酸三氮唑类抗流感病毒化合物。药理试验结果显示，本专利技术化合物在体内外对流感病毒及奥司他韦耐药突变株均具有高效的抑制效果。因此，本专利技术的通式Ⅰ化合物，可用于流感的治疗。本专利技术苯甲酸三氮唑类抗流感病毒化合物不含手性中心，合成步骤简便，对多种流感病毒(包括奥司他韦耐药突变株)有效，具有广阔的应用前景。本专利技术的化合物通式Ⅰ如下：其中R1代表：COOH或COO(CH2)nCH3，n＝0-6；R3、R4各自独立地代表：氢或羟甲基，且R3、R4不同时为氢；R2代表C1-C6的烷基、苯基、苄基、萘基、苯乙烯基或含有1-2个选自O或N的五元或六元杂环基，或被下列任一取代基取代的上述基团：C1-C6的烷基、羟基、硝基、甲氧基、乙氧基、卤素或氨基。其中R1优选代表COOH、COOCH3或COOCH2CH3。R2优选代表：最优选的化合物结构式为：本专利技术的部分优选的化合物如下：4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷基]-3-[5-(2-甲基苯基)-4H-1,2,4-三氮唑基-3-氨基)苯甲酸(Ⅰ-1)4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷基]-3-(-萘基-4H-1,2,4-三氮唑基-3-氨基)苯甲酸(Ⅰ-2)4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷基]-3-(5-仲丁基-4H-1,2,4-三氮唑基-3-氨基)苯甲酸(Ⅰ-3)4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷基]-3-(5-异戊基-4H-1,2,4-三氮唑基-3-氨基)苯甲酸(Ⅰ-4)4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷基]-3-(5-环己基-4H-1,2,4-三氮唑基-3-氨基)苯甲酸(Ⅰ-5)本专利技术的化合物制备方法如下：本专利技术中关键中间体(Ⅱ)3-氨基-4-[2,2-(二羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯的制备如下：关键中间体(Ⅲ)3-氨基-4-[2-(羟甲基)-5-氧代吡咯烷酮基]苯甲酸乙酯的制备如下：本专利技术开展了该化合物运用于治疗流感病毒感染的研究，在体外通过流感病毒细胞感染模型证明了化合物对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)和A/Beijing/32/92(H3N2)具有明显的抑制活性，其EC50值分别为33.6μM和141.7μM，同时该化合物对奥司他韦耐药突变株A/FM/1/47-H275Y(H1N1-H275Y)也表现出显著的抑制作用，EC50值为35.2μM。在体内通过流感病毒小鼠感染模型证明了口服给药本专利技术化合物对A/FM/1/47(H1N1)感染小鼠有显著的生存保护和体重作用，可明显减轻流感病毒感染症状，延长生存时间。本专利技术化合物的药学上可接受的盐具有与化合物同样的药效。所述的药学上可接受的盐优选本专利技术化合物与下列算加成的盐：盐酸、氢溴酸、甲磺酸、羟基乙磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、苯磺酸、甲苯磺酸、硝酸、磷酸、硼酸、酒石酸、柠檬酸、琥珀酸、苯甲酸、抗坏血酸或水杨酸等。本专利技术还提供了一种治疗流感病毒的药物组合物，其中含有治疗有效量的通式Ⅰ化合物和药学上可接受的载体。所述药物组合物可以是普通片剂或胶囊、缓释片剂或胶囊、控释片剂或胶囊、口服液、注射剂等制剂学上常规的制剂形式。一般地，本专利技术的抗流感病毒化合物用于治疗时，人用剂量范围为lmg～1000mg/天。也可根据剂型的不同和疾病严重程度，使用剂量超出该范围。下面是本专利技术部分化合物药效学实验和结果：一、化合物对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染MDCK细胞的抑制活性MDCK细胞按5×103个/孔浓度接种到96孔板中，置37℃、5％CO2培养箱中培养形成细胞单层。细胞用PBS洗2次，加入100TCID50流感病毒A/FM/1/47(H1N1)感染细胞，每孔100μl，37℃孵育2h后弃去病毒液。分别加入含不同浓度(160、80、40、20μM)本专利技术化合物和先导化合物BANA-206的维持培养液，实验同时设正常细胞对照组、病毒模型对照组及阳性对照药奥司他韦10μM。MDCK细胞于37℃培养48h，每日观察细胞病变。并用MTT法测定细胞活力，实验共重复3次，计算病毒抑制率。病毒抑制率％＝(OD加药组－OD病毒对照组)/(OD正常细胞对照组－OD病毒对照组)×100％实验结果表明：本专利技术化合物在160μM和80μM浓度下均表现出明显的抗流感病毒活性，而先导化合物BANA-206在160μM浓度下没有明确的抑制作用，其中化合物Ⅰ-5病毒抑制活性最强，在20μM浓度下仍具有22.6％的抑制率(表1)，故优选化合物Ⅰ-5进行下一步抗流感病毒活性研究。表1化合物对流感病毒A/FM/1/47(H1N1)的抑制活性二、化合物Ⅰ-5的细胞毒性及其对甲型流感病毒A/FM/1/47(H1N1)、A/Beijing/32/92(H3N2)和奥司他韦耐药突变株A/FM/1/47-H275Y(H1N1-H2本文档来自技高网...

【技术保护点】
通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐：其中R1代表：COOH或COO(CH2)nCH3，n＝0‑6；R3、R4各自独立地代表：氢或羟甲基，且R3、R4不同时为氢；R2代表C1‑C6的烷基、苯基、苄基、萘基、苯乙烯基或含有1‑2个选自O或N的五元或六元杂环基，或被下列任一取代基取代的上述基团：C1‑C6的烷基、羟基、硝基、甲氧基、乙氧基、卤素或氨基。

【技术特征摘要】
1.通式(Ⅰ)的化合物或其药学上可接受的盐：其中R1代表：COOH或COO(CH2)nCH3，n＝0-6；R3、R4各自独立地代表：氢或羟甲基，且R3、R4不同时为氢；R2代表C1-C6的烷基、苯基、苄基、萘基、苯乙烯基或含有1-2个选自O或N的五元或六元杂环基，或被下列任一取代基取代的上述基团：C1-C6的烷基、羟基、硝基、甲氧基、乙氧基、卤素或氨基。2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中R1代表COOH、COOC...

【专利技术属性】
技术研发人员：周长林，靳京，张慧鑫，窦洁，王德传，贾源宾，
申请(专利权)人：中国药科大学，南京映海月生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32