结合HER1 β‑发夹的HER1抗原结合蛋白制造技术

本公开文本涉及结合HER1 β‑发夹的抗HER1抗原结合蛋白(例如抗HER1抗体)，用于选择这些抗原结合蛋白的方法，它们的制备及作为药物的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及结合HER1β-发夹的抗HER1抗原结合蛋白(例如抗HER1抗体)，用于选择这些抗原结合蛋白的方法，它们的制备及作为药物的用途。专利技术背景HER蛋白质家族由4个成员组成：HER1，也称作表皮生长因子受体(EGFR)或ErbB-1；HER2，也称作ErbB-2；ErbB-3，也称作HER3；和ErbB-4，也称作HER4。ErbB家族蛋白质是受体酪氨酸激酶且代表细胞生长，分化和存活的重要介导物。HER家族代表表皮生长因子家族(EGF家族)像表皮生长因子(EGF)，神经调蛋白(NRG)家族，双调蛋白，和转化生长因子-α(TGF-a)的不同配体的受体蛋白质。HER1和抗HER1抗体人HER1(也称作表皮生长因子受体EGFR或Erb-B1)是由c-erbB原癌基因编码的一种170kDa跨膜受体，且展现内在酪氨酸激酶活性(Modjtahedi,H.,etal.,Br.J.Cancer73(1996)228-235；Herbst,R.S.,andShin,D.M.,Cancer94(2002)1593-1611)。SwissProt数据库条目P00533提供HER1的序列(SEQIDNO:2)。还有HER1的同等型和变体(例如可变RNA转录物，截短型式，多态性，等)，包括但不限于那些通过Swissprot数据库条目号P00533-1，P00533-2，P00533-3，和P00533-4鉴别的。已知HER1结合下述配体，包括α)，表皮生长因子(EGF)，转化生长因子-α(TGF)，双调蛋白，肝素结合性EGF(hb-EGF)，β细胞素(betacellulin)，和上皮调蛋白(epiregulin)(Herbst,R.S.,andShin,D.M.,Cancer94(2002)1593-1611；Mendelsohn,J.,andBaselga,J.,Oncogene19(2000)6550-6565)。HER1经酪氨酸激酶介导的信号转导途径调节众多细胞过程，包括但不限于激活控制细胞增殖，分化，细胞存活，凋亡，血管发生，有丝分裂，和转移的信号转导途径(Atalay,G.,etal.,Ann.Oncology14(2003)1346-1363；Tsao,A.S.,andHerbst,R.S.,Signal4(2003)4-9；Herbst,R.S.,andShin,D.M.,Cancer94(2002)1593-1611；Modjtahedi,H.,etal.,Br.J.Cancer73(1996)228-235)。未缀合的单克隆抗体(单抗)对于治疗癌症可能是有用的药物，如通过美国食品药品管理局批准曲妥珠单抗(HerceptinTM；GenentechInc.)用于治疗晚期乳腺癌(Grillo-Lopez,A.J.,etal.,Semin.Oncol.26(1999)66-73；Goldenberg,M.M.,Clin.Ther.21(1999)309-18)，利妥昔单抗(RituxanTM；IDECPharmaceuticals，SanDiego，CA，和GenentechInc.，SanFrancisco，CA)用于治疗CD20阳性B细胞，低级或滤泡性非何杰金氏淋巴瘤，吉姆单抗(MylotargTM，Celltech/Wyeth-Ayerst)用于治疗复发性急性髓样白血病，和阿仑单抗(CAMPATHTM，MilleniumPharmaceuticals/ScheringAG)用于治疗B细胞慢性淋巴细胞性白血病证明的。这些产品的成功不仅依赖于它们的功效而且依赖于它们杰出的安全性概况(Grillo-Lopez,A.J.,etal.,Semin.Oncol.26(1999)66-73；Goldenberg,M.M.,Clin.Ther.21(1999)309-18)。尽管有这些药物的成就，对于获得比未缀合的单抗疗法通常所提供的更高的比(specific)抗体活性存在极大兴趣。许多研究的结果提示Fc受体依赖性机制对细胞毒性抗体针对肿瘤的作用有实质性贡献，而且指出最佳的针对肿瘤的抗体会优先结合活化Fc受体且最小限度地结合抑制性配偶FcγRIIB(Clynes,R.A.,etal.,NatureMedicine6(4)(2000)443-446；Kalergis,A.M.,andRavetch,J.V.,J.Exp.Med.195(12)(2002)1653-1659)。例如，至少一项研究的结果提示特别是FcγRIIIa受体中的多态性与抗体疗法的功效强烈相关(Cartron,G.,etal.,Blood99(3)(2002)754-758)。该研究显示FcγRIIIa纯合的患者对利妥昔单抗具有比杂合患者更好的响应。作者得出结论，卓越的响应是由于更好的该抗体对FcγRIIIa的体内结合，这导致更好的针对淋巴瘤细胞的ADCC活性(Cartron,G.,etal.,Blood99(3)(2002)754-758)。已经报告了靶向EGFR和阻断EGFR信号传导途径的多种策略。小分子酪氨酸激酶抑制剂像吉非替尼，厄洛替尼，和CI-1033阻断EGFR在细胞内酪氨酸激酶区中的自我磷酸化，由此抑制下游信号传导事件(Tsao,A.S.,andHerbst,R.S.,Signal4(2003)4-9)。另一方面，单克隆抗体靶向EGFR的细胞外部分，这导致阻断配体结合并由此抑制下游事件诸如细胞增殖(Tsao,A.S.,andHerbst,R.S.,Signal4(2003)4-9)。已经生成了数种鼠单克隆抗体，它们在体外实现了此类阻断且已经在小鼠异种移植物模型中评估了它们影响肿瘤生长的能力(Masui,H.,etal.,CancerRes.46(1986)5592-5598；Masui,H.,etal.,CancerRes.44(1984)1002-1007；Goldstein,N.,etal.,Clin.CancerRes.1(1995)1311-1318)。例如，EMD55900(EMDPharmaceuticals)是一种针对人表皮样癌细胞系A431生成的鼠抗EGFR单克隆抗体，而且在具有喉或下咽晚期鳞状细胞癌的患者的临床研究中进行了测试(Bier,H.,etal.,Eur.Arch.Otohinolaryngol.252(1995)433-9)。另外，结合EGFR胞外域的大鼠单克隆抗体ICR16，ICR62，和ICR80已经显示出有效抑制EGF和TGF-α结合受体(Modjtahedi,H.,etal.,Int.J.Cancer75(1998)310-316)。鼠单克隆抗体425是针对人A431癌细胞系生成的另一种单抗，而且发现它结合人表皮生长因子受体的外部域上的多肽表位(Murthy,U.,etal.,Arch.Biochem.Biophys.252(2)(1987)549-560)。在治疗性处理中使用鼠抗体的一个潜在问题在于非人单克隆抗体会被人宿主识别为外来蛋白质；因此，重复注射此类外来抗体会引起诱导引起有害超敏感性反应的免疫应答。对于基于鼠的单克隆抗体，这常常称作人抗小鼠抗体应答，或“HAMA”应答，或人本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于选择结合人HER1的抗原结合蛋白的方法，其中该抗原结合蛋白在人HER1的氨基酸序列PPLMLYNPTTYQMDVNPEGK(SEQ ID NO:1)内结合，其中使用a)至少一种选自下组的包含氨基酸序列SEQ ID NO:1的多肽：SEQ ID NO:12TtSlyDcas‑HER1，SEQ ID NO:13TtSlyDcys‑HER1，SEQ ID NO:14TtSlyD(GSG)‑HER1，SEQ ID NO:15TtSlyD(CC)‑HER1，SEQ ID NO:16TtSlyD(SS)‑HER1，和SEQ ID NO:18TgSlyDcys‑HER1，来选择显示结合a)下的至少一种多肽的抗原结合蛋白，并由此选择在人HER1的氨基酸序列PPLMLYNPTTYQMDVNPEGK(SEQ ID NO:1)内结合的抗原结合蛋白。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.05.14 EP 14168320.11.一种用于选择结合人HER1的抗原结合蛋白的方法，其中该抗原结合蛋白在人HER1的氨基酸序列PPLMLYNPTTYQMDVNPEGK(SEQIDNO:1)内结合，其中使用a)至少一种选自下组的包含氨基酸序列SEQIDNO:1的多肽：SEQIDNO:12TtSlyDcas-HER1，SEQIDNO:13TtSlyDcys-HER1，SEQIDNO:14TtSlyD(GSG)-HER1，SEQIDNO:15TtSlyD(CC)-HER1，SEQIDNO:16TtSlyD(SS)-HER1，和SEQIDNO:18TgSlyDcys-HER1，来选择显示结合a)下的至少一种多肽的抗原结合蛋白，并由此选择在人HER1的氨基酸序列PPLMLYNPTTYQMDVNPEGK(SEQIDNO:1)内结合的抗原结合蛋白。2.通过权利要求1的选择方法获得的抗原结合蛋白。3.权利要求1的方法或权利要求2的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白为抗体。4.一种分离的结合人HER1的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白结合多肽SEQIDNO:13TtSlyDcys-HER1。5.一种分离的结合人HER1的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白在ELISA测定法中以与对多肽SEQIDNO:11TtSlyDcas的结合相比高至少50倍的ELISA信号结合多肽SEQIDNO:13TtSlyDcys-HER1，其中TtSlyDcys-HER1和TtSlyDcas以0.5μg/ml的浓度固定化。6.一种分离的结合人HER1的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白在多肽SEQIDNO:13(TtSlyDcys-Her1)中包含的氨基酸序列PPLMLYNPTTYQMDVNPEGK(SEQIDNO:1)内结合。7.权利要求4至6中任一项的抗原结合蛋白，其中该抗原结合蛋白为抗体。8.前述权利要求中任一项的抗体，其中该抗体在EGF缺失下在A549癌细胞(ATCCCCL-185)中不诱导HER1磷酸化。9.前述权利要求中任一项的分离的抗体，其中该抗体在用表达HER1的A549细胞(ATCCCCL-185)进行的Western印迹测定法中在与该抗体一起温育之后2小时之后在EGF存在下显示大于70％的HER1内在化且在用表达HER1的A549细胞进行的Western印迹测定法中在与该抗体一起温育之后2小时之后在EGF缺失下显示小...

【专利技术属性】
技术研发人员：B·博森迈尔，M·耶格，G·尼尔德菲林那，M·施拉姆尔，C·皮斯，
申请(专利权)人：豪夫迈·罗氏有限公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH