一种N-磷酰化多肽的制备方法技术

本发明专利技术涉及一种N-磷酰化多肽的制备方法，该方法包括以下步骤：步骤1)准备固相合成用树脂；步骤2)用固相合成方法偶联Fmoc-AA-OH至固相合成树脂，加入脱保护剂A脱除Fmoc-保护后裸露氨基，并以此方法偶联多个氨基酸，获得NH2-An-固相合成用树脂；步骤3)在NH2-An-固相合成用树脂的末端氨基上偶联氯磷酸二酯；步骤4)用裂解液脱除步骤3)所得化合物的固相合成用树脂后获得磷酸二酯-NH-An-OH；步骤5)脱除二酯保护基；任选地，在步骤4)后纯化所得肽链和/或在步骤5)后纯化所得肽链；所述AA为氨基酸，所述An为由n个氨基酸组成的肽链，其中n≥2，且n为整数。本发明专利技术的制备方法操作简单、成本低、步骤少且收率有所提高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种多肽的合成方法，具体涉及一种N-磷酰化多肽的制备方法。
技术介绍
含磷化合物及氨基酸在生命过程中均发挥重要作用，磷酰化过程对细胞的一些功能发挥至关重要。随着现代分子生物学和生物化学的发展,越来越多的实验事实表明,蛋白质磷酸化和去磷酸化几乎调节着生命活动的所有过程,包括细胞的增殖、发育和分化、神经活动、肌肉收缩、新陈代谢、肿瘤发生等,尤其是在细胞应答外界刺激时,蛋白质可逆磷酸化是目前所知道的最主要的信号传递方式。研究磷肽及其类似物对阐明蛋白质可逆磷酸化过程中发挥重要作用的蛋白激酶和磷酸酯酶的作用机制具有极为重要的作用。同时磷肽及其类似物比磷酸化蛋白容易合成,从而对将基础研究成果发展成为用于预防和治疗人类各种疾病的有效药物,具有重大的现实意义。由于磷肽的重要研究价值,磷肽的合成得到许多化学家的重视。从20世纪80年代末就已开始了磷肽的合成研究。磷酰肽包括O-磷酰肽和N-磷酰肽。O-磷酰肽主要是指肽链中的酪氨酸、丝氨酸或苏氨酸残基的侧链羟基被磷酸化生成磷酸酯的共价修饰多肽。N-磷酰肽主要是指肽链中氨基被磷酸化生成磷酰胺的共价修饰多肽。到现在为止有很多文献报道合成O-磷酰本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种N‑磷酰化多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)准备固相合成用树脂；步骤2)用固相合成方法偶联Fmoc‑AA‑OH至固相合成树脂，加入脱保护剂A脱除Fmoc‑保护后裸露氨基，并以此方法偶联多个氨基酸，获得NH2‑An‑固相合成用树脂；步骤3)在NH2‑An‑固相合成用树脂的末端氨基上偶联氯磷酸二酯；步骤4)用裂解液脱除步骤3)所得化合物的固相合成用树脂后获得磷酸二酯‑NH‑An‑OH；步骤5)脱除二酯保护基；任选地，在步骤4)后纯化所得肽链和/或在步骤5)后纯化所得肽链；所述AA为氨基酸，所述An为由n个氨基酸组成的肽链，其中n≥2，且n为整数。

【技术特征摘要】
1.一种N-磷酰化多肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1)准备固相合成用树脂；步骤2)用固相合成方法偶联Fmoc-AA-OH至固相合成树脂，加入脱保护剂A脱除Fmoc-保护后裸露氨基，并以此方法偶联多个氨基酸，获得NH2-An-固相合成用树脂；步骤3)在NH2-An-固相合成用树脂的末端氨基上偶联氯磷酸二酯；步骤4)用裂解液脱除步骤3)所得化合物的固相合成用树脂后获得磷酸二酯-NH-An-OH；步骤5)脱除二酯保护基；任选地，在步骤4)后纯化所得肽链和/或在步骤5)后纯化所得肽链；所述AA为氨基酸，所述An为由n个氨基酸组成的肽链，其中n≥2，且n为整数。2.根据权利要求1所述的N-磷酰化多肽的制备方法，其特征在于，所述固相合成用树脂为氨基树脂、wang树脂或2-Cl树脂等树脂，优选地，树脂替代度为0.1-1.0mmol/g，更优选地为0.2-0.8mmol/g，最优选为0.2-0.5mmol/g。3.根据权利要求1-2任一项所述的N-磷酰化多肽的制备方法，其特征在于，所述步骤2)为将待偶联氨基酸和偶联剂在溶剂中溶解并活化后，一起加入到固相反应柱中，直至用检测方法检测到反应终止为止，加入脱保护剂脱除Fmoc-保护后裸露氨基，并用溶剂洗涤树脂至检测到完全脱除Fmoc为止，并以此方法偶联多个氨基酸，获得Fmoc-An-固相合成用树脂；其中，偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物或DIPEA、化合物A以及化合物B的组合物，其中化合物A为HOBt或HOAt，化合物B为PyBOP、PyAOP、HATU、HBTU或TBTU，优选地，偶联剂为DIPCDI和化合物A的组合物，更优选地以摩尔比计为DIPCDI:化合物A＝1.2:1.1，DIPEA:化合物A:化合物B＝2.0:1.1:1.0；脱保护剂A为哌啶和DMF的混合溶液、DBU和DMF的混合溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈学明，陶安进，马亚平，袁建成，
申请(专利权)人：深圳翰宇药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44