一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法技术

本发明专利技术公开了一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法。该方法包括：制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒；分别以二者为固相进行多肽合成；向两组固相中加入K试剂。对于前者，K试剂可将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到肽磁纳米探针。对于后者，其可将多肽脱侧链保护并从该固相上切下，得到合成多肽。本方法在外磁场作用下可迅速脱离反应体系，为合成带来很大便利，并且能够简便精确地合成多肽，同时同步构建多肽磁纳米探针，以用于在体外和体内印证合成肽的生物学功能，也可用于大规模多肽库的建立，迅速筛选出功能肽。

【技术实现步骤摘要】
一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法
本专利技术涉及一种多肽固相合成的方法，特别涉及一种以超顺磁纳米颗粒为固相的多肽合成方法，并在合成多肽的同时同步构建了合成多肽纳米磁探针，可用于其生物功能的检测，本专利技术属于多肽固相合成

技术介绍
1、固相多肽合成技术：固相多肽合成技术是当今生物化学领域的重要技术，该技术的先驱是RobertBruceMerrifield。尽管当今有多种获得多肽的方法（如利用细菌表达等），但仍然有许多多肽序列难以获得（如细菌难以表达的序列）。利用多肽合成技术可以帮助我们在实验室中简便获得该序列的肽。同时在合成的过程中，可在序列中任意加入非天然氨基酸或者小分子化合物，这都是其它方法难以比拟的。多肽合成技术中，可分为液相合成技术和固相合成技术。其中固相多肽合成技术已经发展完善成为该技术的主流。其原理在于利于小珠子作为固相，珠子上修饰官能团可以和氨基酸单体形成共价键，按照设计序列分别按顺序与氨基酸单体反应既可以得到多肽序列。在合成的过程中，多肽稳定地共价结合于固相珠子表面，反应结束后利用特殊化学试剂可将多肽序列从固相珠子上切下。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法，其特征在于，包括如下步骤： （1）制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，表面暴露氨基； （2）二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，通过HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略在其表面偶联rink amide linker； （3）分别以二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rink amide linker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒为固相，利用HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略以Fmoc保护的氨基酸为单体，同步逐个接上氨基酸，进行多肽合成； （4）分别向两组固相中加入K试剂，所述的K试剂由三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2‑二巯基乙烷，苯酚...

【技术特征摘要】
1.一种以超顺磁纳米颗粒为固相进行多肽合成及同步构建多肽磁纳米探针的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)制备二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，表面暴露氨基；(2)二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒，通过HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略在其表面偶联rinkamidelinker；(3)分别以二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rinkamidelinker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒为固相，利用HBTU/HOBt/DIEA的偶联策略以Fmoc保护的氨基酸为单体，同步逐个接上氨基酸，进行多肽合成；(4)分别向两组固相中加入K试剂，所述的K试剂由三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2-二巯基乙烷，苯酚以及水配制而成；K试剂针对两种不同的固相起不同的作用：a对于偶联rinkamidelinker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒的固相，用于将合成的多肽脱侧链保护并从该固相上切下；b对于二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒的固相，用于将合成多肽脱侧链保护但不将多肽切下，得到缀合多肽的磁纳米探针；(5)将上述步骤(4)a中从偶联rinkamidelinker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相上切下的多肽以乙醚沉降，收集产品并用MALDI-TOF-MS验证合成多肽的化学结构；(6)将上述步骤(4)b中由二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相得到的缀合多肽的磁纳米探针溶于PBS中，通过体外和体内实验印证合成肽是否具有生物学功能。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于三氟醋酸，苯甲硫醚，1,2-二巯基乙烷，苯酚以及水的体积比为82.5：5：2.5：5：5。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的超顺磁纳米颗粒为下列三种中任意一种：超顺磁Fe3O4纳米颗粒，超顺磁Fe2O3纳米颗粒，超顺磁FePt纳米颗粒。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于作为固相的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒和偶联rinkamidelinker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒是通过以下步骤制备得到的：二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相的制备：1)配置100ml浓度为0.05mg/ml的超顺磁纳米颗粒的氯仿溶液A；2)将溶液A置于40℃下，以150rpm的转速减压蒸馏将溶液浓缩至10微升；3)向浓缩后的溶液A中加入100ml15mM的十二烷基磺酸钠水溶液，在40℃水浴中以60W的超声功率超声10min得溶液B；4)将溶液B置于摇床，加入50微升正辛基三甲氧基硅烷(OCTMO)，摇匀30分钟后；继续滴加50微升3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APS)，继续反应48小时；反应结束后，将溶液放置于磁铁上，放置10小时后弃去溶液；收集沉淀用水洗三遍，得到二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒；偶联rinkamidelinker的二氧化硅包壳的超顺磁纳米颗粒固相的制备：1)配置100ml浓度为0.05mg/ml的超顺磁纳米颗粒的氯仿溶液A；2)将溶液A置于40℃下，以150rpm的转速减压蒸馏将溶液浓缩至10微升；3)向浓缩后的溶液A中加入100ml15mM的十二烷基磺酸钠水溶液，在40℃水浴中以60W的超声功率超声10min得溶液B；4)将溶液B置于摇床，加入50微升正辛基三甲氧基硅烷(OCTMO)，摇匀30分钟后；继续滴加50微升3-氨基丙基三乙氧基硅烷(APS)，继续反应48小时；反应结束后，将溶液放置于磁铁上，放置10小时后弃去溶液，收集沉淀用水洗三遍，得到二氧化硅包壳的超顺磁纳米...

【专利技术属性】
技术研发人员：沙印林，罗聃，
申请(专利权)人：北京大学，
类型：发明
国别省市：北京;11