本发明专利技术提供了一种一步均相CK‑MB检测试剂盒及其在检测CK‑MB含量中的应用，所述试剂盒包括：(1)抗CK‑MB抗体偶联的发光微球试液；(2)抗CK‑MB抗体偶联的感光微球试液；以及能够接收和发射光的反应孔。与现有技术相比，本发明专利技术试剂盒具有操作方便、检测快速、灵敏度高、准确性好等优点，并且特异性强。将其应用于心肌损伤的监测，可以提高急性心肌梗塞诊断的准确率。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于检测试剂盒领域，特别涉及一种一步均相CK-MB检测试剂盒及其应用。
技术介绍
急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction，AMI)是世界上发病率和死亡率较高的疾病之一。据最近美国心脏病协会数据显示，2003年美国有720万AMI患者。但同时AMI又是高误诊率的疾病之一，一些确实患有AMI的患者没有得到恰当的处理，导致较高的死亡率；而另一些非AMI患者又接受了不必要的治疗，引起不必要的花费。世界卫生组织推荐：典型的胸痛、心电图改变和心肌酶异常三项指标中有两项符合，即可诊断AMI。但许多AMI患者早期没有典型的临床症状和心电图的异常改变，因此心肌损伤标志物的检测就显得尤为重要。近年来心肌标志物在临床中的应用得到了越来越广泛的重视，其发展也相当迅速，在临床中出现了很多心肌标志物。肌酸激酶(Creatine Kinase，CK)主要存在于脊椎动物中，通常存在于动物的心脏，骨骼肌以及脑等组织的细胞质和线粒体中。CK催化肌酸和ATP或磷酸肌酸和ADP之间磷酸转移的可逆反应。CK活性在人体中存在较广泛，在血中半衰期约为6-8小时。CK是一个二聚体，有3种同工酶的形式存在：2个B单体(CK-BB)，2个M单体(CK-MM)，MB的单体混合体(CK-MB)。这3种同工酶分子量相同，催化相同的化学反应，但其分子结构和来源不同：CK-BB来源于横纹肌，CK-MM来源于大脑和消化道，而CK-MB来源于心肌。心肌中CK-MB占CK总量的15％～25％。所以在心肌损伤，特别是急性心肌梗死(AMI)时，测定CK-MB对AMI的诊断有极大的临床意义。有关实验表明，在AMI症状发生后12～48d时采样分析，CK-MB质量的临床灵敏度和临床特异性分别为96.8％和89.6％，这就使它在众多心肌标志物中脱颖而出，成为对AMI临床诊断起重要作用的一个指标。同时，结合cTnI、Myo等心肌特异标志物可提高临床诊断的准确性。在缺血性心脏疾病中，当被阻塞的冠脉再通时，心肌中的CK-MB被血流冲刷出来，引起血液中CK-MB质量升高，峰值时间提前。因此我们可通过CK-MB定量检测结果来判断溶栓治疗在短时间内再通与否，确定心肌再灌注以及观察治疗效果等。除此之外，CK-MB质量还可以用于较早期诊断AMI，也可以用于估计梗死范围大小或再梗死。常用的CK-MB检测方法有金标定性试验、荧光免疫法、联免疫吸附试验(ELISA)、磁微粒化学发光法(CMIA)和生化仪检测。金标定性实验快速，但该方法灵敏度低、无法动态监测CK-MB含量的变化。荧光免疫法操作复杂，对操作环境和操作人员有较高的要求。ELISA法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目，并且反应时间较长。CMIA法是从ELISA法改进而来，与ELISA法相比具有操作简单，检测速度快等特点，但是CMIA法是非均相反应，操作过程需要清洗，降低了检测的可重复性。自动生化分析仪检测，其检测成本低、速度快，因而应用最普遍。但由于目前该项目测定方法本身的局限，偶尔会产生测定结果的假性升高，甚至出现CK-MB酶活性高于总CK酶活性的怪异现象。
技术实现思路
专利技术目的：为解决上述问题，本专利技术利用CK-MB的抗体，以氧通道化学发光技术为平台，研发出一种针对急性心肌梗塞诊断的CK-MB快速检测试剂盒。使其与现有检测试剂盒相比，具有操作方便、检测快速、灵敏度高、准确性好等优点；将其应用于心肌损伤的监测，可以提高急性心肌梗塞诊断的准确率。技术方案：本专利技术提供了一种一步均相CK-MB检测试剂盒，包括：(1)抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液；(2)抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液；(3)分析缓冲液；以及能够接收和发射光的反应孔。作为优选，所述抗CK-MB抗体为针对CK-MB不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体，其可以通过常规免疫学方法获得。所述发光微球表面活性基团为醛基、羧基、氨基等，发光微球带有发光化合物和镧系元素化合物的高分子。发光化合物可以是Dioxene(二氧杂环己烯)或Thioxene(二甲基噻吩)的衍生物等，镧系元素化合物可以是Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen等，发光微球大小为100-300nm，该微球可由市场购得，如铂金埃尔默公司。所述感光微球表面活性基团为醛基、羧基、氨基等，感光微球带有光激发产生单线态氧的染料，如酞箐染料、叶绿素等，感光微球大小为100-300nm，该微球可由市场购得，如铂金埃尔默公司。所述抗CK-MB抗体偶联的发光微球，其中发光微球与抗CK-MB抗体的质量比为(1-100):1；所述抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液的浓度为10-200μg/ml。所述抗CK-MB抗体偶联的感光微球，其中感光微球与抗CK-MB抗体的质量比为(1-100):1；所述抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液的浓度为10-200μg/ml。所述反应孔为微孔板、微流控试剂盘、反应杯或反应管等。所述分析缓冲液的制备，包括如下步骤：将HEPES 0.1-2g、BSA 0.1-5g、Casein 0.1-5g、NaCl 0.5-3g、Triton X-100 0.01-1ml加入蒸馏水溶解后，制成分析缓冲液。所述抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液或抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液主要由以下步骤制成：(1)将抗体加入到超滤管中，离心，用HEPES缓冲液(pH7.4)重复洗涤，抗体稀释到1mg/ml备用；取发光微球或者感光微球，用HEPES缓冲液(pH7.4)重复清洗两次，离心，去除上清；(2)将抗体溶液加入到发光微球或感光微球中，重悬；(3)加入10％Tween20；(4)加入400mM NaCNBH3，加入HEPES缓冲液将体积补足；(5)37℃震荡反应24-48小时；(6)封闭：用800mMNaOH配制65mg/ml CMO溶液，加到反应体系中；(7)37℃震荡反应；(8)离心，去除上清；(9)加入Tris-HCl(pH8.0)缓冲液重悬，离心，去除上清，重复一次；(10)最后一次离心后用PBS缓冲液(pH7-8)和牛血清白蛋白混合液重悬微球，终浓度5mg/ml，使用前稀释至所需浓度。本专利技术还提供了所述一步均相CK-MB检测试剂盒在检测CK-MB含量中的应用。其中，检测方法包括以下步骤：(1)在试剂盒的反应孔中加入样品、抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液和抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液，混合反应5-60分钟；(2)激发光照射反应孔，测量每个反应孔发光量获得光信号值；(3)绘制CK-MB浓度与光信号值的标准曲线，利用步骤(2)测得的光信号值，通过标准曲线计算CK-MB含量。技术效果：与现有技术相比，本专利技术试剂盒具有操作方便、检测快速、灵敏度高、准确性好等优点，并且特异性强。将其应用于膀胱癌的监测，可以提高膀胱癌诊断的准确率。附图说明图1是本专利技术CK-MB氧通道化学发光检测试剂盒原理示意图；图2是本专利技术CK-MB氧通道化学发光检测试剂盒检测线性范围图；图3是本专利技术试剂盒与罗氏CK-MB试剂盒的检测结果相关性比较。具体实施方式根据下述实施例，可以更好地理解本专利技术。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种一步均相CK‑MB检测试剂盒，其特征在于，包括：(1)抗CK‑MB抗体偶联的发光微球试液；(2)抗CK‑MB抗体偶联的感光微球试液；(3)分析缓冲液；以及能够接收和发射光的反应孔。
【技术特征摘要】
1.一种一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，包括：(1)抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液；(2)抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液；(3)分析缓冲液；以及能够接收和发射光的反应孔。2.根据权利要求1所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述抗CK-MB抗体为针对CK-MB不同表位的单克隆抗体或多克隆抗体。3.根据权利要求1所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述发光微球表面活性基团为醛基、羧基或氨基，发光微球带有发光化合物和镧系元素化合物的高分子，发光微球大小为100-300nm；所述感光微球表面活性基团为醛基、羧基或氨基，感光微球带有光激发产生单线态氧的染料，感光微球大小为100-300nm。4.根据权利要求3所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述发光化合物为二氧杂环己烯或二甲基噻吩的衍生物，镧系元素化合物为Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen；所述染料为酞箐染料或叶绿素。5.根据权利要求1所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述抗CK-MB抗体偶联的发光微球，其中发光微球与抗CK-MB抗体的质量比为(1-100):1；所述抗CK-MB抗体偶联的发光微球试液的浓度为10-200μg/ml。6.根据权利要求1所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述抗CK-MB抗体偶联的感光微球，其中感光微球与抗CK-MB抗体的质量比为(1-100):1；所述抗CK-MB抗体偶联的感光微球试液的浓度为10-200μg/ml。7.根据权利要求1所述的一步均相CK-MB检测试剂盒，其特征在于，所述反应孔为微孔板、微流控试剂盘、反应杯或反应管；所述分析缓冲液的制备，包括如下步骤：将...
【专利技术属性】
技术研发人员：李明明，黄宝福，淳林，
申请(专利权)人：南京普朗医疗设备有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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