一种测定癌胚抗原的试剂盒制造技术

本发明专利技术涉及医学及生物化学技术领域，具体来说是一种测定癌胚抗原的试剂盒。本发明专利技术的目的在于解决现有技术中癌胚抗原检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：一种测定癌胚抗原的试剂盒，该试剂盒由试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，其中R1试剂包含MOPS缓冲液15~185 mmol/L、氯化钠150~400 mmol/L、聚乙二醇5~25 g/L、牛血清白蛋白18~42 g/L、叠氮钠0.3~0.9 g/L，其溶剂为纯化水。R2试剂包含MOPS缓冲液50~150mmol/L、氯化钠100~300 mmol/L、牛血清白蛋白4~18 g/L、海藻糖5~35 g/L、叠氮钠0.3~0.9 g/L、乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体0.1~2.0%，其溶剂为纯化水。本发明专利技术具有准确度高、操作方便等优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及医学及生物化学
，具体来说是一种测定癌胚抗原的试剂盒。
技术介绍
癌胚抗原是大肠癌组织产生的一种糖蛋白，作为抗原可引起患者的免疫反应。此种抗原称为癌胚抗原，可广泛存在于内胚叶起源的消化系统癌，也存在于正常胚胎的消化管组织中，在正常人血清中也可有微量存在。 癌胚抗原是一个广谱性肿瘤标志物，它能向人们反映出多种肿瘤的存在，对大肠癌、乳腺癌和肺癌的疗效判断、病情发展、监测和预后估计是一个较好的肿瘤标志物。CEA最初发现于结肠癌和胎儿肠组织中，故名癌胚抗原。CEA升高常见于大肠癌、胰腺癌、胃癌、乳腺癌、甲状腺髓样癌等。此外，血清CEA水平与大肠癌的分期有明确关系，越晚期的病变，CEA浓度越高。原发性结肠癌患者CEA增高占45－80%。除原发性结肠癌以外，胰腺癌、胆管癌、胃癌、食管癌、腺癌、肺癌、乳腺癌和泌尿系统的肿瘤阳性率也很高，一般在50－70%。良性肿瘤、炎症和退行性疾病，如结肠息肉、溃疡性结肠炎、胰腺炎和酒精性肝硬化变病人CEA也有部分升高，但远远低于恶性肿瘤，一般小于20μg/L，CEA超过20μg/L时往往提示有消化道肿瘤。所以测定CEA可以作为良性与恶性肿瘤的鉴别诊断依据。目前检测癌胚抗原的方法多位酶联免疫吸附法、化学发光。但酶联免疫吸附法操作复杂、耗时长、且对操作人员有较高的专业要求。化学发光虽然灵敏度和准确度均较高，但试剂成本相对较高，且配套的大型仪器较昂贵。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术中癌胚抗原检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，提供一种测定类风湿因子的试剂盒。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：一种测定癌胚抗原的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，它们包括的成分及相应含量为：试剂R1：MOPS缓冲液 15~185 mmol/L氯化钠 150~400 mmol/L聚乙二醇 5~25 g/L牛血清白蛋白 18~42 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L其溶剂为纯化水。试剂R2：MOPS缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 100~300 mmol/L牛血清白蛋白 4~18 g/L海藻糖 5~35 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体 0.1~2.0 %其溶剂为纯化水。作为优选方案 ，所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2包括的成分及相应含量为：试剂R1：MOPS缓冲液 100 mmol/L氯化钠 225 mmol/L聚乙二醇 15 g/L牛血清白蛋白 30 g/L叠氮钠 0.6 g/L其溶剂为纯化水。试剂R2：MOPS缓冲液 100 mmol/L氯化钠 200 mmol/L牛血清白蛋白 11 g/L海藻糖 20 g/L叠氮钠 0.6 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体 1.0 %其溶剂为纯化水。作为优选，所述的乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体为含有能与人癌胚抗原特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。作为优选，所述的乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体的粒径在30~200nm之间。作为优选，本测定癌胚抗原的试剂盒的制备方法和使用方法包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：MOPS缓冲液 15~185 mmol/L氯化钠 150~400 mmol/L聚乙二醇 5~25 g/L牛血清白蛋白 18~42 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L其溶剂为纯化水。（b）按照下列组分含量配制好R2试剂：MOPS缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 100~300 mmol/L牛血清白蛋白 4~18 g/L海藻糖 5~35 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体 0.1~2.0 %其溶剂为纯化水。（c）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应，进一步优选的R1与试剂R2的体积比为4：1，待测样本与试剂R1和试剂R2的总体积的体积比在1：5到1：30之间；（d）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；（e）根据吸光度变化值计算出样本中的癌胚抗原的值。作为优选，所述的乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体制备步骤如下：（a）将粒径为80nm的胶乳颗粒，用50 mmol/L的MES缓冲液稀释胶乳颗粒到3 g/L，每mL溶液中加入EDAC 1.0 mg，室温反应2小时，在离心机内15000 rpm转速下离心30分钟，去上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，超声分散；（b）将步骤（a）的产物在离心机内20000rpm转速下离心30分钟，弃上清，将沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中，使得胶乳颗粒最终浓度为6.0 g/L，超声分散，边搅拌边加入等体积的含8 mg/mL 抗人癌胚抗原抗体的MES稀释液，混合搅拌，室温反应2小时，胶乳颗粒最终浓度为3.0 g/L；（c）将步骤（b）的产物在离心机内20000 rpm转速离心30分钟，弃上清，沉淀悬浮于50 mmol/L的MES缓冲液中超声分散，加入BSA使得BSA最终浓度达到15 g/L，4℃封闭过夜；离心去上清，用步骤（b）制得的分散液溶解胶乳颗粒，使胶乳颗粒终浓度为1.0%，超声分散即可制得乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体。本专利技术所采用的胶乳增强免疫比浊法的反应原理是：血清样本中的癌胚抗原与含有包被了高特异性的抗人癌胚抗原抗体的缓冲液发生特异性结合，在促凝剂作用下形成不溶性的聚苯乙烯微球-抗原-聚苯乙烯微球颗粒复合物乳浊液，产生一定的浊度，其浊度高低与样本中的癌胚抗原抗原浓度成正比关系，在一定波长下进行浊度测定，即可测得样本中被检测癌胚抗原的含量。样本中癌胚抗原（CEA）的活性（ng/mL）= CS ×（ng/mL）式中：ΔAT/min 以空白管吸光度作对照的样品管吸光度值ΔAS/min 以空白管吸光度作对照的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：MOPS缓冲液          15~185 mmol/L氯化钠              150~400 mmol/L聚乙二醇            5~25 g/L牛血清白蛋白        18~42 g/L叠氮钠              0.3~0.9 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：MOPS缓冲液                            50~150 mmol/L氯化钠                                100~300 mmol/L牛血清白蛋白                          4~18 g/L海藻糖                                5~35 g/L叠氮钠                                0.3~0.9 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体        0.1~2.0 %其溶剂为纯化水。

【技术特征摘要】
1.一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：MOPS缓冲液 15~185 mmol/L氯化钠 150~400 mmol/L聚乙二醇 5~25 g/L牛血清白蛋白 18~42 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：MOPS缓冲液 50~150 mmol/L氯化钠 100~300 mmol/L牛血清白蛋白 4~18 g/L海藻糖 5~35 g/L叠氮钠 0.3~0.9 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体 0.1~2.0 %其溶剂为纯化水。2.如权利要求1所述的一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：所述的彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，包括的成分及相应含量为：试剂R1：MOPS缓冲液 100 mmol/L氯化钠 225 mmol/L聚乙二醇 15 g/L牛血清白蛋白 30 g/L叠氮钠 0.6 g/L其溶剂为纯化水试剂R2：MOPS缓冲液 100 mmol/L氯化钠 200 mmol/L牛血清白蛋白 11 g/L海藻糖 20 g/L叠氮钠 0.6 g/L乳胶包被抗人癌胚抗原单克隆抗体 1.0 %其溶剂为纯化水。3.如权利要求1所述的一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人类风湿因子抗体为含有能与人癌胚抗原特异性结合的Fab功能部位的完整抗体或抗体片段。4.如权利要求1所述的一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：所述的乳胶包被抗人类风湿因子抗体的粒径在30~200nm之间。5.如权利要求1所述的一种测定癌胚抗原的试剂盒，其特征在于：试剂盒的制备方法和使用方法包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好R1试剂：MOPS缓冲液 15~185 mmo...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓辉，庄庆华，吴铮，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34