一种齐墩果烷衍生物制造技术

本发明专利技术涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一种γ‑谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO‑Me前‑前药I的制备方法以及含有它们的药物组合；该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药物化学和药物治疗学领域，涉及一种齐墩果烷衍生物，具体涉及一种γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评价。该类化合物可用于二型糖尿病引起的慢性肾病。本专利技术还涉及这类化合物的制备方法以及含有它们的药物组合。
技术介绍
糖尿病肾病(diabetic nephropathy，DN)是糖尿病常见的并发症之一，发生率高达20-40％。在世界范围内，糖尿病影响着超过3亿人民。糖尿病患者的数量将会继续增加，特别是像中国和印度这样人口老龄化的国家。例如，在中国，年龄超过65岁占总人口比例不到7％。截至2030年，这个比例将会超过20％。年龄的增长和城市化导致了糖尿病和其并发症的产生。齐墩果酸(oleanolic acid，OA)及其衍生物是一类重要的五环三萜化合物，具有抗炎、抗肿瘤和抗病毒等多种生物活性。通过对OA进行结构改造，合成了A环含α-氰基-α，β-不饱和酮(α-cyano-α，β-unsaturated ketone，CUK)的衍生物CDDO-Me。该化合物显示了极强的生物活性，已对其进行了多种疾病的临床试验。遗憾的是，在治疗糖尿病慢性肾病(diabetic nephropathy，DN)的III期临床试验中，发现CDDO-Me对心脏有严重毒副作用。其后不久，经过方案改进，治疗DN的临床研究重新在日本开展。尽管临床研究还在继续，但CDDO-Me的安全性已受到严重关注。因此，保留或增强CDDO-Me的药效，降低其毒副作用是一个亟需解决的挑战性难题。α，β-不饱和酮是许多活性天然产物和化学合成小分子中的药效团，可以作为迈克尔受体与体内多种生物大分子亲核性基团(如半胱氨酸残基的巯基)发生加成反应，通过共价结合，调节细胞内众多信号通路，发挥及其广泛的生物学活性及疾病治疗作用。研究表明，CDDO-Me通过激活ARE-Nrf2-Keap1信号通路产生抗炎活性，究其分子机理，主要是CDDO-Me的A环α-氰基-α，β-不饱和酮(α-cyano-α，β-unsaturated ketone，CUK)与Keap1蛋白BTB区域151位CYS的巯基发生迈克尔加成反应所致。γ-谷氨酰转肽酶(gamma-glutamyl transferase，GGT)是体内谷胱甘肽代谢的相关酶之一，主要分布在肾脏组织。由于GGT具有组织分布特异性及能够选择性地水解谷氨酰胺键的特点，故其常被用于肾靶向的前药设计。然而，一般对α，β-不饱和酮保护的前药策略并不适用于CDDO-Me这样一个具有CUK结构的化合物。有鉴于此，我们采用前-前药(pro-prodrug) 策略，用4-谷氨酰胺苄基保护CUK的1，4加成物即前药1中的烯醇羟基，得到了可以在肾脏部位选择性释放CDDO-Me的前-前药2，并对其进行了较为深入的生物活性评价。
技术实现思路
本专利技术公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：一种γ-谷氨酰转肽酶(GGT)选择激活的CDDO-Me前-前药设计、合成及抗糖尿病肾病活性评价。药理实验证明，该类化合物具有良好的抗糖尿病活性，因此，它们可用于预防和治疗糖尿病肾病。本专利技术公开了一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：其中：R1代表氢原子，C1-C10直链或直链烷基，或者(C1-C10直链或支链亚烷基)-Q，其中Q代表羟基或卤素；R2代表氢原子、或C1-C10直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S)；R3代表氢原子或C1-C10直链或支链烷基；式I中标明的两个手性中心(分别用*1和*2表示)为R构型或S构型。进一步地，通式1所示的化合物，其特征在于：R1代表氢原子、甲基、乙基或丙基；R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；R3代表氢原子或甲基；式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型；具体来说，通式I所示化合物优选自下列化合物：1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(化合物编号：I1，下同)：1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(I2)1-乙氧基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯(I3)下面药理实验中化合物的代号等同于此处代号所对应的化合物。本专利技术的另一目的在于提供本专利技术通式I所述化合物的制备方法，其特征为在于，包括如下步骤：以Fmoc-Glu-OMe(II)在2-乙氧基-1-乙氧碳酰基-1，2-二氢喹啉(EEDQ)存在下与4-氨基苄醇(III)缩合，生成酰胺化合物(IV)。IV在三溴化磷的作用下，得到溴代物V。与此同时，CDDO-Me经DMF/碱处理，得到烯醇化合物VI。烯醇VI与化合物V经醚化反应，得到烯醇醚(VII)。最后脱去VII的Fmoc保护基，得到目标化合物I；合成路线如下：这些化合物可按照常规分离技术加以纯化。本专利技术的再一目的是提供本专利技术化合物I在制备预防或治疗糖尿病肾病中的应用。本文采用前-前药策略，对CDDO-Me药效团CUK进行保护，再在肾脏高表达的GGT作用下释放CDDO-Me，这种策略好比在CDDO-Me的A环药效团按上一个保护面具，在一定程度上掩盖和降低了其对非靶部位的攻击性，但在靶部位则暴露出活性药效团本专利技术化合物I抗糖尿病肾病的药理实验方法与结果如下：实验方法：10周龄的db/db 2型糖尿病小鼠适应性饲养一周，自由饮食饮水，随机分组，分为模型组(Model组)，CDDO-Me(0.6mg/kg)组，I1(1mg/kg)组，I1(2mg/kg)，每组6只，6只C57BLKs/Jdb/m作为正常对照组。每日上午腹腔注射给药，正常组和模型组给予等容量的蒸馏水，连续12周。实验开始所有小鼠称重编号，每两天称重记录体重，共12周。小鼠每三只一笼，每两天记录每笼饮水量和进食量。每日观察各组小鼠毛色、神态、尿量和行为活动等。在实验11周，禁食不禁水12小时后，采用欧姆龙血糖仪HEA-232型，欧姆龙血糖试纸HEA-STP30，测定每只小鼠的12小时空腹血糖。在实验进行至11周时，用代谢笼分别收集每只小鼠24小时尿液标本。所有小鼠于前一晚7点开始禁食，饮水不限，24小时后结束尿液收集，准确称量每只鼠的尿液体积，高速离心取上清液用于尿蛋白，尿肌酐等含量测定，并于-78℃保存尿液样本。实验12周，将所有实验动物用10％水合氯醛麻醉，眼球取血处死。剪断静脉，用头皮针插进左心室，用PBS缓慢冲洗，直到流出的液体由红色变为无色，在换成多聚甲醛固定组织。用手术刀片轻轻切下肾脏两端的组织完整薄切片(参照TEM 样品制备方法)，切片迅速保存于3％戊二醛溶液中，以备电镜检查。摘取其它重要脏器如心、肝、肺等，3只保存于4％甲醛溶液中，3只用液氮速冻，于-78℃冰冻保存。表1中列出了本专利技术化合物I1对小鼠体重和饮水体重的影响：表1.本专利技术化合物I对小鼠体重和饮水进食的影响(n＝本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：其中：R1代表氢原子，C1‑C10直链或直链烷基，或者(C1‑C10直链或支链亚烷基)‑Q，其中Q代表羟基或卤素；R2代表氢原子、或C1‑C10直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S)；R3代表氢原子或C1‑C10直链或支链烷基；式I中标明的两个手性中心，分别用*1和*2表示，为R构型或S构型。

【技术特征摘要】
1.一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：通式I所示的化合物或其旋光异构体，对映体、非对映体、外消旋体或外消旋混合物，或其药学上可接受的盐或酯：其中：R1代表氢原子，C1-C10直链或直链烷基，或者(C1-C10直链或支链亚烷基)-Q，其中Q代表羟基或卤素；R2代表氢原子、或C1-C10直链或支链烷基、或者取代芳香基，Y代表氧(O)或硫(S)；R3代表氢原子或C1-C10直链或支链烷基；式I中标明的两个手性中心，分别用*1和*2表示，为R构型或S构型。2.根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：所述的通式I化合物或其对映体、非对映异构体及其药学上可接受的盐，R1代表氢原子、甲基、乙基或丙基；R2代表氢原子、甲基或乙基，Y代表氧原子；R3代表氢原子或甲基；式I中手性中心*1为S构型，手性中心*2为R构型。3.根据权利要求1的一种齐墩果烷衍生物，其特征在于：所述化合物选自：1-羟基-2-氰基-3-[4-(a-甲酯-L-谷氨酰氨基)-苯甲氧基]-12-氧代齐墩果烷-2(3)，9(11)-双烯-28-羧酸甲酯1-甲氧基-2-氰基-3-[4-(a-...

【专利技术属性】
技术研发人员：张奕华，黄张建，徐晓军，牟伊，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32