本发明专利技术提供与慢性荨麻疹的发病易感的人ORAI1基因的单核苷酸多态性位点及其制备的检测制剂。尤其是提供了人ORAI1基因rs3741595C/T，rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T单核苷酸多态性位点作为检测慢性荨麻疹以及慢性荨麻疹患者治疗的药物靶点，据此针对性用药，提高疾病治疗的有效率，更好地改善他们的生活质量；同时对其发病进行预测。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学和医学领域。涉及与慢性荨麻疹易感性相关的人ORAI1基因的单核苷酸多态性位点及其用途。具体涉及人ORAI1基因与慢性荨麻疹易感性以及第二代抗组胺药物治疗慢性荨麻疹疗效相关的多态性位点。本专利技术还涉及检测这些多态性位点的制剂。
技术介绍
慢性荨麻疹是一种常见的、以风团伴不同程度瘙痒为主要表现的免疫性皮肤疾病，病程超过6周，11％-14％可达5年以上，需长期用药干预。慢性荨麻疹还不同程度地降低学习和工作效率，影响患者生活质量。慢性荨麻疹还是一种多基因遗传病，部分患者具有遗传背景,有10％-20％的患者疾病可能遗传给后代。肥大细胞是荨麻疹发病机制中主要的效应细胞，在各型荨麻疹的发病中发挥着中心作用。近来研究不断证实钙释放激活的钙通道(Ca2+release-activatedCa2+channels，CRAC)不仅能够介导多种受体(包括免疫性和非免疫性受体)诱导的荨麻疹肥大细胞活化，还能在其脱颗粒、合成炎症介质和脂类代谢物等一系列生物学效应中发挥关键作用。但目前尚无研究报道ORAI1基因与慢性荨麻疹易感性以及第二代抗组胺药物治疗慢性荨麻疹疗效的相关性。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供与慢性荨麻疹的发病易感的人ORAI1基因的单核苷酸多态性位点及其制备的检测试剂。本专利技术与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点，具体为rs3741595C/T，rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T。ORAI1基因SNP位点rs3741596A/G，其A等位基因正向调控肥大细胞内钙离子浓度，从而增加慢性荨麻疹的发病风险；如果是G等位基因，则降低慢性荨麻疹的发病风险；ORAI1基因SNP位点rs12313273T/C，其T等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，从而降低慢性荨麻疹的发病风险；如果是C等位基因，则增加慢性荨麻疹的发病风险；ORAI1基因SNP位点rs3741595C/T，其C等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，从而降低慢性荨麻疹的发病风险；如果是T等位基因，则增加慢性荨麻疹的发病风险；ORAI1基因SNP位点rs12320939G/T，其G等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，从而降低慢性荨麻疹的发病风险；如果是T等位基因，则增加慢性荨麻疹的发病风险。本专利技术所述的与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点的检测制剂，包括：Southern印迹法、DNA序列分析、PCR或原位杂交检测突变的制剂。PCR检测试剂盒包括慢性自发性荨麻疹患者外周血全基因组DNA和特异性扩增ORAI1基因不同SNP位点的引物，以及rTaq酶，去离子水。特异性扩增ORAI1基因不同SNP位点的引物，序列如下：扩增rs3741595,rs3741596位点:正义链:5-agggtcccagagcctgac-3；反义链：5-aatcctcttccctccatgct-3，扩增长度为831bp；扩增rs12313273与rs12320939位点：正义链：5-ttcaccccgccaaccggcaatgtcacatgc-3；反义链：5-aggacgaggtcgaagaagtg-3，扩增片段长度为2084bp。本专利技术与第二代抗组胺药物治疗慢性荨麻疹疗效相关的ORAI1基因多态性位点rs3741595C/T。携带T等位基因患者抗组胺药物疗效优于携带C等位基因患者。本专利技术与第二代抗组胺药物治疗慢性荨麻疹疗效的相关的ORAI1基因多态性位点的检测制剂，包括：Southern印迹法、DNA序列分析、PCR或原位杂交检测突变的制剂。本专利技术发现和证明了ORAI1基因rs3741595C/T，rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T与慢性荨麻疹的发病易感性相关(由表1数据可以看出，患者与正常人相比携带不同等位基因频率存在统计学差异，P值均小于0.05)；而且还进一步发现了ORAI1rs3741595C/T与第二代抗组胺药物的疗效相关(由表2数据得知)。本专利技术所述的ORAI1基因的详细序列可参见ENSEMBLE数据库核苷酸序列(可参见网址http://www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/84876)，全长20kbp(geneID:84876；LOCATION:Chromosome12,NC_000012.12(121626550..121642040))。本专利技术提供的PCR试剂盒包括慢性自发性荨麻疹患者外周血全基因组DNA和特异性扩增ORAI1基因不同SNP位点的引物，以及rTaq酶，去离子水。其中所述20ul体系中，引物各1ul,模板2ul，rTaq酶10ul，去离子水补足。与本专利技术试剂盒配套的检测方法包括以下步骤：1)关于多态性位点扩增方法：反应体系，条件如下：PCR扩增反应条件如下：预变性94℃5mim；循环94℃30S,58℃30S,72℃1min,35个循环，72℃延伸8min。本专利技术的试剂盒检测用引物如下：扩增rs3741595,rs3741596位点:正义链:5-agggtcccagagcctgac-3；反义链：5-aatcctcttccctccatgct-3，扩增长度为831bp；扩增rs12313273与rs12320939位点：正义链：5-ttcaccccgccaaccggcaatgtcacatgc-3；反义链：5-aggacgaggtcgaagaagtg-3，扩增片段长度为2084bp。本专利技术通过检测ORAI1基因的靶向SNP位点，可用于预测慢性荨麻疹发病风险。检测可以针对cDNA，也可针对基因组DNA。ORAI1基因的rs3741595C/T，rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T的基因型可用已有的技术如Southern印迹法、DNA序列分析、PCR和原位杂交检测突变。通过本专利技术的检测还可以进行抗组胺药物疗效的判定，进而指导治疗。专利技术人通过研究发现ORAI1基因SNP位点rs3741595C/T，携带T等位基因患者抗组胺药物疗效优于携带C等位基因患者。ORAI1基因SNP位点rs3741596A/G，其A等位基因正向调控肥大细胞内钙离子浓度，从而增加慢性荨麻疹的发病风险；如果是G等位基因，则降低慢性荨麻疹的发病风险；ORAI1基因SNP位点rs12313273T/C，其T等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，从而降低慢性荨麻疹的发病风险；如果是C等位基因本文档来自技高网...
【技术保护点】
与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点，具体为rs3741595C/T，rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T。
【技术特征摘要】
1.与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点，具体为rs3741595C/T，
rs3741596A/G，rs12313273T/C，rs12320939G/T。
2.根据权利要求1所述的与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点，
ORAI1基因SNP位点rs3741596A/G，其A等位基因正向调控肥大细胞内钙离子浓度，从
而增加慢性荨麻疹的发病风险；
ORAI1基因SNP位点rs12313273T/C，其T等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，
从而降低慢性荨麻疹的发病风险；
ORAI1基因SNP位点rs3741595C/T，其C等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，
从而降低慢性荨麻疹的发病风险；
ORAI1基因SNP位点rs12320939G/T，其G等位基因负性调控ORAI1基因的表达水平，
从而降低慢性荨麻疹的发病风险。
3.权利要求1或2所述的与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点的检测制剂，
其特征在于，包括：Southern印迹法、DNA序列分析、PCR或原位杂交检测突变的制剂。
4.根据权利要求3所述的与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点的检测制剂，
其特征在于，为PCR检测试剂盒。
5.根据权利要求4所述的与慢性荨麻疹易感性相关的ORAI1基因多态性位点的检测制剂，
其特征在于，P...
【专利技术属性】
技术研发人员：李捷，陈翔，闫思聿，陈旺青，郭爱元，粟娟，朱武，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，
类型：发明
国别省市：湖南;43
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