The invention discloses a SNP detection reagent kit for nitroglycerin sensitive gene ALDH2 and a method for using the same. Using human genomic DNA as template, were added to detect corresponding specific primers and fluorescent probe ALDH2*2 polymorphism, a real-time quantitative PCR system, Real time after PCR reaction, the field of technical personnel by fluorescence quantitative PCR instrument data collected to determine ALDH2 genotype. The utility model has the advantages of fast, sensitive and easy judgment, and is suitable for clinical detection and popularization.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医疗检测领域,更具体的说是涉及一种硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒及其使用方法。
技术介绍
硝酸甘油(GTN,glyceryltrinitrate,nitroglycerin)用于治疗心绞痛和心力衰竭已有130年的历史,舌下含服硝酸甘油片是抗冠心病心绞痛急性发作的常规首选药方,但其临床有效性常因人而异。有的人因它而及时挽救了生命,而有的人服用之后,效果却不甚明显。以往国内外医学界一直认为硝酸甘油对部分病人疗效不佳是因其“耐药性”所致,但研究结果证实并非如此。近来的研究表明基因突变是影响硝酸甘油药物疗效的决定性因素。ALDH2基因是编码线粒体乙醛脱氢酶的基因,具有脱氢酶活性,对人体内乙醛的氧化发挥主要的作用(即与体内代谢酒精的能力直接相关)。除了上述的脱氢酶活性以外,ALDH2还有酯酶活性,可以催化硝酸甘油水解产生NO。最新的研究成果表明,ALDH2基因存在G1510A多态性,使得第504位的谷氨酸被赖氨酸替代并降低酶活性,从而影响硝酸甘油的疗效,此位点的多态性命名为ALDH2*2型。目前针对基因多态性的检测方法最常见方法为测序法,该方法适合高通量多位点的检测,但操作耗时长且灵敏度低,不适合快速临床检测;高分辨率溶解曲线法对设备要求比较特殊,需要具有安装高分辨率软件、温度比较敏感的机器才能使用,它的临床推广存在一定的困难。
技术实现思路
针对现有技术存在的不足 ...
【技术保护点】
一种硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:包括下列体积份的组成构成:所述引物包括:正向引物:ALDH2*2‑F:5’‑CGGGAGTTGGGCGAGTA‑3’;反向引物:ALDH2*2‑R:5’‑TCCGAGCCACCAGCAGA‑3’;所述探针包括:ALDH2*2野生型探针:5’‑荧光基团‑GTTTTCACTTCAGTGTATGCC‑MGB‑3’;ALDH2*2突变型探针:5’‑荧光基团‑GTTTTCACTTTAGTGTATGCC‑MGB‑3’。
【技术特征摘要】
1.一种硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:包括下列体积份的组成构成:
所述引物包括:
正向引物:ALDH2*2-F:5’-CGGGAGTTGGGCGAGTA-3’;
反向引物:ALDH2*2-R:5’-TCCGAGCCACCAGCAGA-3’;
所述探针包括:
ALDH2*2野生型探针:5’-荧光基团-GTTTTCACTTCAGTGTATGCC-MGB-3’;
ALDH2*2突变型探针:5’-荧光基团-GTTTTCACTTTAGTGTATGCC-MGB-3’。
2.根据权利要求1所述的硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:所述预混物为2×PCR酶反应预混液,所述2×PCR酶反应预混液含有0.1units/μl的TaqDNAPolymerase(recombinant)、4mmol/L的MgCl2、0.5mmol/L的dNTPs。
3.根据权利要求1或2所述的硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:所述溶剂为双蒸水。
4.根据权利要求3所述的硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:所述引物和探针体积比为1∶1。
5.根据权利要求1所述的硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:所述正向引物和反向引物用量相同。
6.根据权利要求1所述的硝酸甘油用药敏感型相关基因ALDH2的SNP检测试剂盒,其特征在于:所述ALDH2*2野生型探针和ALDH2*2突变型探针用量相同。
7.如权利...
【专利技术属性】
技术研发人员:邢洋,苏彩环,林芳珍,
申请(专利权)人:浙江中迪生物科技有限公司,
类型:发明
国别省市:浙江;33
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