本发明专利技术是一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法。利用PLC水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，酶解大豆毛油中的PC及PE，生成DAG及磷酸类产物，提高油脂得率，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA2特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少的特点脱除非水化磷脂。考察PLC和PLA2的加入时间，加入量以及反应的温度和pH等。在最佳条件下测得脱胶油中的磷含量为8.9mg/kg。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2。
技术介绍
植物油精炼一般包括脱胶、脱酸、脱色、脱蜡和脱臭等工序。脱胶是毛油精炼的第一工序，用于从毛油除去磷脂和粘液物质。毛油中的磷脂分为水化磷脂和非水化磷脂，水化磷脂具有亲水性，非水化磷脂含量较高的毛油适合生物酶法脱胶。酶法有反应专一，反应条件温和和较少的环境污染等优点，使其更具有竞争力。与传统的水化脱胶工艺相比，酶法脱胶可大大节约化学物质的消耗量，几乎不产生废水，在环保、经济、质量等方面具有潜在的优势。游离的磷脂酶对环境要求高，效率低，反应后油脂中游离脂肪酸含量升高，酶解效率不高。磁性固定化酶的使用解决了这一问题，酶经磁性固定后便于在反应结束后进行分离，并可以提高其使用的次数。磷脂酶C(PLC)水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，主要酶解大豆毛油中的卵磷脂(PC)及脑磷脂(PE)，生成甘油二酯(DAG)及磷酸类产物，将磷脂转化成DAG，甘油二酯溶于油中成为食用油的一部分，不需要脱胶过程，从而提高了毛油脱胶的精炼率。磷脂酶如01^2)是一种能够特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少，避免了酸价的升高。因此，采用PLC和PLAiJ^，可提高脱胶油的得率。
技术实现思路
本专利技术公开了一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用对大豆毛油进行脱胶的方法，利用PLC水解磷脂Sn-3位上磷酸酯键，酶解大豆毛油中的PC及PE，生成DAG及磷酸类产物，提高油脂得率，先采用PLC进行酶法脱胶操作，而后利用PLA2特异性酶解磷脂中Sn-2位上酰基的酶，且酶解后不发生酰基转移，产生的游离脂肪酸较少的特点脱除非水化磷脂。用磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2来进行脱胶的方法通过以下步骤实现:一、PLC和PLA2的磁性固定化;二、磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶;三、测定脱胶油中的磷含量。【具体实施方式】【具体实施方式】一:一种磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2，通过以下步骤实现:步骤一:PLC和PLA2的磁性固定化:首先将I g的Fe304/Si0X-g-P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1Μ，ρΗ 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2 %的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 6.5)中，同时在45°C下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1Μ，ρΗ7.0)洗涤得到固定化PLC。将所得的固定化酶放置在冰箱内4°C下保存。将I g的Fe304/Si0X-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1Μ，ρΗ 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2%的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，同时在45°C下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)洗涤得到固定化PLA2。将所得的固定化酶放置在冰箱内4°C下保存。步骤二:磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶:准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85°C，加入一定量的质量分数为45%(w/w)梓檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5 %的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到PH为6.0?8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4?1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45?65°C，酶解反应1.5?3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来。然后加入一定量的磁性固定化PLA2, PLA2在磁性固定化酶添加量0.06?0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0?8.0反应温度至45?65°C，酶解反应1.5?3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA2分离出来。步骤三:测定脱胶油中的磷含量。【具体实施方式】二:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5?7.5，磁性固定化PLC添加量0.6?1.0g/kg，反应温度为50?60°C，反应时间2.0?3.0h，其它步骤与具体实施方法一相同。【具体实施方式】三:本实施方式与【具体实施方式】一的不同点在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，磁性固定化?1^2添加量0.08?0.128/1^，？1^2反应体系的口11值为6.5?7.5，反应温度为50?60°C，反应时间2.0?3.0h，其它步骤与具体实施方法一相同。【主权项】1.一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2，通过以下步骤实现: 步骤一:PLC和PLA2的磁性固定化:首先将I g的Fe304/Si0X-g-P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2%的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 6.5)中，同时在45°C下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1Μ，ρΗ7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4°C下保存；将I g的Fe304/Si0X-g-P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1Μ，ρΗ 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2%的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，同时在45°C下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)洗涤得到固定化PLA2，将所得的固定化酶放置在冰箱内4°C下保存； 步骤二:磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶:准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85°C，加入一定量的质量分数为45%(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5 %的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0?8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4?1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45?65°C，酶解反应1.5?3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来;然后加入一定量的磁性固定化PLA2，PLA2在磁性固定化酶添加量0.06?0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0?8.0反应温度至45?65°C，酶解反应1.5?3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA2分离出来； 步骤三:测定脱胶油中的磷含量。2.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶如联合应用对大豆毛油脱胶的方法，其特征在于步骤二中磁性固定化酶脱胶条件进行进一步确定，PLC反应体系的pH值为6.5?7.5，磁性固定化PLC添加量0.6?1.0g/kg，反应温度为50?60°C，反应时间2.0?3.0h03.根据权利要求1所述的用磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种磁性固定化磷脂酶C和磁性固定化磷脂酶A2联合应用对大豆毛油进行脱胶的方法，通过以下步骤实现：步骤一：PLC和PLA2的磁性固定化：首先将l g的Fe3O4/SiOx‑g‑P(GMA)复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 6.5)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH7.0)洗涤得到固定化PLC，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；将l g的Fe3O4/SiOx‑g‑P(GMA)纳米复合粒子置于在50mL的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中浸泡24h，磁分离后将上述浸泡后的载体加入到一定量的含0.2％的磷脂酶的磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)中，同时在45℃下搅拌反应一段时间，最后磁分离并用磷酸缓冲液(0.1M，pH 7.0)洗涤得到固定化PLA2，将所得的固定化酶放置在冰箱内4℃下保存；步骤二：磁性固定化PLC和磁性固定化PLA2连用脱胶：准确称取300g大豆毛油，水浴加热到85℃，加入一定量的质量分数为45％(w/w)柠檬酸缓冲溶剂，在该温度下200r/min搅拌维持20min，充分搅拌混匀，然后进行冷却，将处理后的油和2.5％的蒸馏水加入500mL反应器中，调节至一定温度，再将油样中加入缓冲溶液调到pH为6.0～8.0，添加一定量的磁性固定化PLC，PLC在磁性固定化酶添加量0.4～1.2g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h。反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLC分离出来；然后加入一定量的磁性固定化PLA2，PLA2在磁性固定化酶添加量0.06～0.14g/kg，在200r/min的搅拌速度下进行酶解反应，调节pH为6.0～8.0反应温度至45～65℃，酶解反应1.5～3.5h，反应结束后，用磁铁将磁性固定化PLA2分离出来；步骤三：测定脱胶油中的磷含量。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：于殿宇，王立琦，江连洲，刘天一，张旭，张青，王文华，刘欣，齐晓芬，李中宾，王玉琦，
申请(专利权)人：东北农业大学，
类型：发明
国别省市：黑龙江;23
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。