一种隐绿原酸的制备方法技术

技术编号:13174251 阅读:196 留言:0更新日期:2016-05-10 17:27
本发明专利技术公开了一种隐绿原酸的制备方法,该制备方法步骤为:取绿原酸,甲醇溶解,然后加1~2mol/L盐酸,搅拌反应6~8h,1~2mol/LNaOH溶液调pH至中性,浓缩,甲醇溶解,过滤,减压浓缩,加水溶解,滤过,得滤液;取滤液经反相C18柱预处理,水洗,收集水洗液浓缩,离心,过滤,利用反相工业制备色谱法制备得到隐绿原酸。本发明专利技术提供的隐绿原酸的制备方法,经过系统实验筛选得到最佳的酸转化条件和碱中和反应条件,并经过反相工业制备色谱制备得到高纯度的隐绿原酸,产率高,适合大规模制备,取得了很好的技术效果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种有机酸的制备方法,具体涉及。
技术介绍
隐绿原酸即4-咖啡酰奎宁酸,属于单咖啡酰奎宁酸类化合物,是绿原酸(3-咖啡酰奎宁酸)同分异构体。近年来,国内外学者就咖啡酰奎宁酸类化合物药理活性进行了深入研究,发现其具有一些重要生物活性,如抗氧化、抗炎、抗菌、抗病毒、抑制平滑肌收缩、降血脂等,极具临床应用价值,有望在治疗病毒性肝炎及宫颈癌疾病中发挥重要的作用。但由于目前此类化合物仅停留在是实验室研究阶段,还未见规模制备的方法技术,这样很大地限制了此类化合物的深入研究开发。因此,对于此类化合物包括隐绿原酸的规模分离、纯化及制备成为其深入开发的关键问题。国内外关于隐绿原酸的分离纯化仅少数文献报道,许小方(许小方,李会军,李萍,冯煦,袁昌齐.灰毡毛忍冬花蕾中的化学成分,中国天然药物,2006,4(1):45-47.)从15kg灰毡毛忍冬中通过D101大孔树脂、SephadexLH-20、RP-C18和重结晶等方法分离得到200mg隐绿原酸。王琦(王琦.金银花的化学成分研究.沈阳药科大学,2008.)采用萃取、反复硅胶柱层析、SephadexLH-20和重结晶等方法从280g金银花浸膏中分离得到隐绿原酸30mg。王岱杰(王岱杰.忍冬叶化学成分及其抗H5亚型禽流感病毒研究.山东农业大学,2013.)从10kg忍冬叶中通过MCI树脂、SephadexLH-20及制备液相等手段分离得到13mg隐绿原酸。然而,上述研究中普遍存在一个问题,隐绿原酸都是在化学成分研究过程中发现的,这些方法并不是针对隐绿原酸的分离、纯化和制备,具有随机性、重现性差,而且分离纯化步骤较繁琐,不适合大规模分离制备。另外,由于隐绿原酸在植物中含量低,通过植物化学手段来分离得到的量非常小,无法满足动物实验的研究应用。同时,也有报道国外学者采用化学合成隐绿原酸(张亚梅.咖啡酰奎宁酸类化合物的合成研究.江西中医药,2012,8(43):78.),但隐绿原酸通过奎宁酸选择性酯化合成收率很低,且成本高,污染很大,未进入规模化生产,而国内无人问津,所有以上均制约了其进一步的开发应用。因此,很有必要在现有技术的基础之上,研究开发一种制备效率高,产率高,生产成本低,具有很好应用前景的隐绿原酸的制备方法
技术实现思路
专利技术目的:本专利技术的目的是为了解决现有技术的不足,经过大量实验筛选,提供优选的隐绿原酸的制备方法。本专利技术提供的隐绿原酸的制备方法,以绿原酸为原料,采用优选的酸处理工艺使绿原酸稳定的、高效的转化为隐绿原酸,并通过优选的工业制备色谱纯化方法,将性质较接近的绿原酸和隐绿原酸等分离纯化,制备得到纯度高的隐绿原酸,工艺简单,步骤简便,制备效率高,得率高,制备得到的隐绿原酸纯度高,整个过程生产成本低,可操作性强,适合大规模制备,具有很好的应用前景。技术方案:为了实现以上目的,本专利技术采用如下技术方案:,其特征在于,包括以下步骤:(1)取绿原酸,加5?10倍量体积浓度为50 %?80 %甲醇溶解,加10?20倍量的1?2mol/L盐酸,于60°C水浴上搅拌反应6?8h,反应结束后冷却至室温,得反应液;(2)反应液中加1?2mol/LNaOH溶液调pH至中性,50°C以下减压浓缩至干,加甲醇溶解,析出白色固体滤过,滤液在50°C以下减压浓缩至干,加少量水溶解,滤过,得滤液;(3)取滤液经反相Ci8柱预处理,水洗,收集水洗液浓缩,离心,过0.45μπι滤膜,反相工业制备色谱法制备得到隐绿原酸。作为优选方案,以上所述的隐绿原酸的制备方法,步骤(1)中,取绿原酸,加10倍量体积浓度为50 %甲醇溶解,然后加20倍量的lmol/L盐酸,然后于60°C水浴上搅拌反应6h,反应结束后冷却至室温。作为优选方案,以上所述的隐绿原酸的制备方法,反相工业制备色谱法的色谱条件为:色谱柱为反相C18色谱柱(30?150X250?600111111)),流速为15?1000111171^11,波长为326nm,流动相为乙腈(A)-0.5%甲酸溶液⑶,梯度洗脱,进样量1.0?20.0g。实验例(一)酸反应优选试验:由于绿原酸结构不稳定,极易发生变化,本专利技术通过大量实验筛选转化条件,在60°C水浴下进行反应。1、考察60°C下,绿原酸的转化实验:(1)0.lmol/L盐酸反应8个小时,每隔2h取样,以绿原酸为对照进行HPLC检测。(2)0.lmol/L氢氧化钠反应8个小时,每隔2h取样,以绿原酸为对照进行HPLC检测。检测结果:在酸性条件下,绿原酸可转化为隐绿原酸;但是在碱性条件下,无隐绿原酸生成。因此,本专利技术选择酸性条件下进行隐绿原酸的转化。 2、考察60°C下,在不同浓度的酸性条件下绿原酸的转化实验:(1 )0.0lmol/L盐酸反应8个小时,每隔2h取样,以绿原酸为对照进行HPLC检测。(2)0.lmol/L盐酸反应8个小时,每隔2h取样,以绿原酸为对照进行HPLC检测。(3)lmol/L盐酸反应8个小时,每隔2h取样,以绿原酸为对照进行HPLC检测。检测结果:a、0.0lmol/L盐酸反应条件下,反应终点隐绿原酸生成量很少。b、0.lmol/L盐酸反应6h有微量隐绿原酸生成,8h有少量隐绿原酸生成。c、lmol/L盐酸反应4h有少量隐绿原酸生成,6h有大量隐绿原酸生成,8h的生成杂质较多。因此,本专利技术优选的隐绿原酸的最佳转化反应条件为:浓度为lmol/L盐酸下,反应6h0(二)工业制备色谱法制备条件的优选1、检测波长:本专利技术通过全波长扫描和3D等高线检测,优选出最佳的检测波长为326nm,在该波长下隐绿原酸有最大吸收,故选择检测波长为326nm。2、流动相的组成,本专利技术以甲醇-水,甲醇-0.5%甲酸溶液,乙腈-水和乙腈-0.5%甲酸溶液分别为流动相,实验结果表明,以甲醇-水,甲醇-0.5 %甲酸溶液,乙腈-水为流动相时,系统分离效果较差,洗脱速度慢,峰形不佳,因此本专利技术选择乙腈(A)-0.5%甲酸溶液(B)为洗脱剂。3、洗脱程序筛选:由于隐绿原酸和绿原酸极性接近,在色谱柱上完全分离具有较大的难度,并且绿原酸和隐绿原酸的化学性质很不稳定,因此,本专利技术通过大量实验筛选梯度洗脱条件,优选得到最佳的梯度洗脱程序为:0?30min,8%?30%A;30?35min,30%?100%Ao本专利技术提供的隐绿原酸的制备方法,采用优选的酸性条件下转化后,再用优选浓度的碱将过量的酸进行中和,通过实验筛选,采用1?2mol/LNa0H溶液不仅可以将反应体系中过量的酸中和,并且不会影响隐绿原酸的结构稳定性,可防止隐绿原酸结构再次转化,保证产率。经过酸性转化和碱性中和后,反应体系中存有一定的杂质和未反应完的绿原酸等,为了提高后续制备液相的纯化效率,本专利技术通过大量实验筛选,将碱中和后的反应液先经反相C18柱预处理,可以将反应体系中的部分杂质去掉,大大提高后续工业制备色谱的制备效率和提高隐绿当前第1页1 2 本文档来自技高网
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一种隐绿原酸的制备方法

【技术保护点】
一种隐绿原酸的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取绿原酸,加5~10倍量体积浓度为50%~80%甲醇溶解,加10~20倍量的1~2mol/L盐酸,于60℃水浴上搅拌反应6~8h,反应结束后冷却至室温,得反应液;(2)反应液中加1~2mol/LNaOH溶液调pH至中性,50℃以下减压浓缩至干,加甲醇溶解,析出白色固体滤过,滤液在50℃以下减压浓缩至干,加少量水溶解,滤过,得滤液;(3)取滤液经反相C18柱预处理,水洗,收集水洗液浓缩,离心,过0.45μm滤膜,工业制备色谱法制备得到隐绿原酸。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:萧伟王振中宋亚玲倪付勇赵祎武王雪晶温建辉罗鑫谢雪张宏达黄文哲
申请(专利权)人:江苏康缘药业股份有限公司
类型:发明
国别省市:江苏;32

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