本发明专利技术涉及化学领域，特别涉及一种新绿原酸的制备方法。该制备方法采用金银花用乙醇回流提取，过滤，浓缩，大孔吸附树脂分离，乙醇-水梯度洗脱。HPLC分析检测，收集新绿原酸洗脱部位。再利用中低压制备色谱仪进行快速制备达克级以上。同时对其进行结构鉴定及纯度检测，其纯度达98.86％。该方法制备的新绿原酸达到了含量测定用对照品的要求，为大量制备高纯度的新绿原酸提供了一种新方法。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及化学领域，特别涉及。
技术介绍
新绿原酸是从忍冬科植物忍冬（Lonicera japonica Thunb.)的干燥花蕾即金银 花（Flos Lonicerae japonicae)中提取精制得到的产品，是单咖啡酰奎宁酸类化合物，是 金银花中的主要有机酸类成分之一。咖啡酰奎宁酸类化合物是一类由奎宁酸和不同数目的 咖啡酸通过酯化反应缩合而成的酚酸类天然化合物，这类化合物广泛存在于植物之中，具 有显著的抗氧化活性、抗微生物作用、酶抑制作用、肝细胞保护作用、抑制血小板聚集等作 用。咖啡酰奎宁酸类化合物在植物中分布广泛，并具体有多种药理活性，相信随着对咖啡酰 奎宁酸类化合物研究的深入和发展将会成为新药开发的一个热点。因此，新绿原酸作为咖 啡酰奎宁酸类化合物具有很大的开发应用前景，对新绿原酸的分离和纯化成为其深度开发 的关键技术。 目前，文献中没有关于新绿原酸的规模制备方法，有文献报道通过多次的高效制 备液相分离从金银花中得到新绿原酸20. 7mg ;在忍冬叶提取物正丁醇部位通过MCI填料进 行多次富集，再经过Sephadex LH-20凝胶色谱进一步分离，最后运用制备型高效液相从金 银花中分离得到新绿原酸32mg ;在肿节风提取物中通过运用反复硅胶柱层析及Sephadex LH-20凝胶色谱分离，再利用制备液相分离纯化得到新绿原酸5mg ;在山牡荆树干心中通过 运用反复硅胶、S印hadex LH-20凝胶色谱及反相C18分离得到新绿原酸5mg。这些都是在实 验室条件下利用反复常压硅胶柱、凝胶及半制备液相对新绿原酸进行分离纯化；另外，因其 制备的新绿原酸的量都是毫克级，所以，其工序过程很难具备放大生产的可能性，即使可以 获得克级的样品，也会因工序繁琐、制备时间长、消耗有机溶剂多而增加其生产成本。 因此，为了更好的开发利用新绿原酸，在现有技术的基础之上，研究开发一种制备 效率高，速度快，生产成本低，无需使用大量的有机溶剂，从金银花中快速进行新绿原酸的 制备方法具有重要的现实意义。本方法首先采用大孔树脂富集新绿原酸粗品，然后利用中 低压制备液相快速分离纯化获得高质量分数的新绿原酸单体。其优点在于：a，从过程上来 讲，本实验由提取、富集、纯化三步完成，不涉及反复硅胶柱层析，避免了大量有机溶剂的使 用，减少污染，降低成本，缩短时间；b，从制备量和纯度上来讲，30min内一次制备就可以达 到克级，且制备的纯度高达98. 86%，目前未见有从金银花中制备高质量分数的新绿原酸及 短时间内一次制备达到克级的专利文献和非专利文献报道。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供。该方法制得的新绿原酸的纯度 达98. 86%，达到了含量测定用对照品的要求；同时一次制备所得新绿原酸产品重量达到 克级以上，为大量制备高纯度的新绿原酸提供了一种新方法。 为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案： 本专利技术提供了，包括如下步骤： 步骤a :获得金银花提取物； 步骤b :取所述金银花提取物经树脂柱分离，获得洗脱液； 步骤c :取所述洗脱液，用中低压制备液相分离纯化，流动相为乙腈-0.5%甲酸水 (ν/V)梯度洗脱，获得新绿原酸；所述中低压制备色谱的检测波长为240~360nm。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤b中所述树脂柱分离的树脂为非极性树 脂。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤b中所述树脂柱分离的树脂为HPD200A型 大孔吸附树脂。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤b中所述树脂柱分离的洗脱溶剂为水或乙 醇。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤b中所述经树脂柱分离具体为：按料液比 Ig :10~20mL，上大孔树脂柱，先用水洗脱，再用10~95%的乙醇梯度洗脱。收集含有新 绿原酸粗品的水洗脱部位，流速2~4BV/h，洗脱5~10BV。 中低压制备色谱技术也被称为闪式制备色谱技术，分离速度快、效率高，可在短时 间内制备毫克到数十甚至达百克的样品。不但可以应用于正相填料也可以应用于反相填 料。与常压柱色谱相比，具有分辨率高、分离速度快的优势，与高效制备液相相比，具有制备 量大、时间短的特点。同时可以自主填充分离柱的填料，增加分离选择性，节约生产成本。使 其在天然产物分离纯化研究工作中发挥重要的作用。在本专利技术的一些具体实施方案中，步 骤C中所述纯化为中低压制备色谱纯化，所述中低压制备色谱的检测波长为240~360nm。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤c中所述中低压制备色谱的检测波长为 326nm〇 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤c中所述中低压制备色谱的洗脱系统为乙 腈-0. 5%甲酸水（v/v)溶液，所述乙腈与0. 5%甲酸水溶液的体积比为10:90。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤a中所述金银花提取物的提取方法为取金 银花醇提，过滤，获得滤液。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤a中所述金银花提取物的提取方法为取金 银花与乙醇回流提取，过滤，获得滤液。 在本专利技术的一些具体实施方案中，以g/mL计，步骤a中所述金银花与所述乙醇的 质量体积比为1 : (10~30);所述乙醇为乙醇的水溶液，所述乙醇的水溶液中乙醇的体积百 分含量为50 %~95%。 在本专利技术的一些具体实施方案中，该制备方法采用金银花用10-30倍量 50 % -95 %乙醇回流提取，过滤，浓缩，HPD200A大孔吸附树脂分离，乙醇-水梯度洗脱。HPLC 分析检测，收集新绿原酸洗脱部位。再利用Reveleris中低压制备色谱仪（美国GRACE公 司）进行快速制备达克级以上。同时对其进行结构鉴定及纯度检测，其纯度达98. 86%。 在本专利技术的一些具体实施方案中，步骤a中所述金银花提取物的提取方法为： 步骤al :取金银花与50~95% (体积分数）的乙醇回流提取，过滤，获得滤液，减 压浓缩至25°C时的相对密度为I. 05g · mL S 步骤a2 :再与乙醇混合至乙醇的体积分数为80%，静置，过滤，收集滤液减压浓缩 至无醇味； 步骤a3 :取步骤a2所述滤液与水按照体积比为1:1混合，静置过夜，过滤，获得滤 液。 具体的，取金银花用10倍量50~95%乙醇回流提取两次（2h/次），滤过，合并 两次滤液浓缩至小体积，上HPD200A大孔树脂，依次用水、20%、40%、95 %的乙醇洗脱。经 HPLC分析，新绿原酸主要集中在水洗脱部位。然后利用Reveleris中低压制备色谱仪（美 国GRACE公司）进行快速制备达克级以上。同时对其进行结构鉴定及纯度检测，其纯度达 98. 86 % 〇 具体的，本专利技术提供了，包括如下步骤：步骤a :将金银 花药材，按料液比Ig : 10~30mL加入浓度为50 %~95 %乙醇作为提取剂，加热回流提取两 次（2h/次），过滤，取上清液浓缩干燥，获得富含新绿原酸的金银花乙醇浸膏（相对于金银 花药材，转移率为90. 5~95. 6 % ); 步骤b :将上述金银花乙醇浸膏充分分散于蒸馏水中，按料液比Ig : 10~20mL，上 大孔树脂柱，先用水洗脱，再用10~95%的乙醇梯度洗脱。收集含有新绿原酸粗品的水洗 脱部位，流速2~4BV/h，洗脱5~10BV。浓缩、干燥，获得新绿原酸粗品（纯度为30. 6本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种新绿原酸的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤a：获得金银花提取物；步骤b：取所述金银花提取物经树脂柱分离，获得洗脱液；步骤c：取所述洗脱液，用中低压制备液相分离纯化，流动相为乙腈‑0.5％甲酸水(v/v)梯度洗脱，获得新绿原酸；所述中低压制备色谱的检测波长为240～360nm。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：萧伟，倪付勇，刘露，宋亚玲，赵祎武，黄文哲，王振中，周习，
申请(专利权)人：江苏康缘药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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