绿原酸提取物的制备方法技术

绿原酸提取物的制备方法。使含有绿原酸的水溶液用第一大孔树脂吸附单元进行吸附分离，至流出水溶液中绿原酸的浓度≥上柱前水溶液中绿原酸的浓度后，用pH值2～8的水洗涤，收集、合并所述通过第一大孔树脂吸附单元后流出的含有绿原酸的水流出液和水洗液并调节pH值2～4后，用第二大孔树脂吸附单元进行吸附，用pH值2～4的水洗涤除杂后，再用乙醇体积含量为30～95%的乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液后除去溶剂，得到绿原酸提取物。该制备方法能大大提高绿原酸的含量，具有实际应用价值。

【技术实现步骤摘要】
绿原酸提取物的制备方法
本专利技术涉及一种绿原酸提取物的制备方法，特别是由来源于各种方法得到的含绿原酸的产品制备其纯化提取物的方法。
技术介绍
绿原酸是植物在有氧呼吸过程中经磷酸戊糖途径的中间产物所合成的一种苯丙素类物质，绿原酸主要存在于忍冬科忍冬属、菊科蒿属及杜仲科杜仲属植物中。葵花籽中绿原含量为1.5~3.3%，金银花中绿原含量为0.2~11.2%，杜仲叶绿原含量为1~5%。绿原酸具有利胆、抗菌、抗病毒、降压、升高白细胞及兴奋中枢神经系统等多种药理作用，绿原酸是透明质酸酶（HAase）和Gle-6-p位移酶的天然特异性抑制剂，也是选择性羟基自由基和过氧自由基的清除剂，可作为保健品、食品、药品、化妆品等工业的重要原料。分离纯化绿原酸的常见方法，有醇沉、无机盐沉淀、溶剂萃取、离子交换树脂分离、凝胶色谱分离、高效液相色谱分离以及大孔吸附树脂分离等方式。从产品的安全性、生产效率等方面来看，大孔吸附树脂分离纯化是工业化生产绿原酸的主要发展方向。如李进飞等报道了NKA-9型树脂对绿原酸吸附分离性能的研究（华西药学杂志，2004,19(1):1-4）、王芳等报道了大孔吸附树脂对绿原酸吸附性能的研究（海峡药学，2006,18(1):97-99），中国专利CN102285885A等也公开了大孔吸附树脂分离纯化绿原酸的方法。目前文献报道的由大孔吸附树脂制备绿原酸的常规方法是：将含绿原酸的水溶液或水提取液，上大孔吸附树脂柱后，先用水洗涤除杂，再用乙醇洗脱（解析），收集乙醇洗脱液，除去溶剂，即得到绿原酸提取物，其中上柱液和洗涤用水的pH值为1~8，优选的pH值为1~4，洗脱用乙醇浓度为20~95%。申请人研究发现，目前报道的这类常规大孔树脂方法制备得到的绿原酸提取物的含量都较低。
技术实现思路
针对上述情况，本专利技术提供了一种绿原酸提取物的制备方法，特别是对由来源于各种方法得到的含绿原酸的产品制备其纯化提取物的方法。本专利技术绿原酸提取物的制备方法，是使含有绿原酸的水溶液用第一大孔树脂吸附单元进行吸附分离，至流出水溶液中绿原酸的浓度≥上柱前水溶液中绿原酸的浓度后，用pH值2~8的水洗涤，收集、合并所述通过第一大孔树脂吸附单元后流出的含有绿原酸的水流出液和水洗液并调节pH值2~4后，用第二大孔树脂吸附单元进行吸附，然后用pH值2~4的水洗涤除杂后，再用乙醇体积含量为30~95%的乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液后除去溶剂，得到绿原酸提取物。上述方法中作为制备原料的所述含有绿原酸的水溶液，可以来源于各种含绿原酸成分的原料，如，既可以包括含有绿原酸的药材或相应药材的加工品，如金银花、山银花、川银花、杜仲叶、忍冬藤、葵花籽粕；金银花、山银花、川银花的茎枝和/或叶，以及含有绿原酸的其它药用植物、药材和饮片等所得到的水提取液，也可以是由含有绿原酸的药材或相应药材加工品的提取物进一步制备的相应加工产品的水溶液。深入的研究实验显示，大孔树脂对绿原酸及在其提取物中常见的如黄酮、皂苷等杂质性成分都具有吸附能力，但相比较，大孔树脂对绿原酸的吸附力（强度）较弱。因此，当大孔树脂吸附饱和后绿原酸最先流出，而黄酮、皂苷等其它成分则仍可被继续吸附，并且随着所述含有绿原酸的水溶液的继续进入，通过竞争性吸附作用，原已在树脂上被吸附的绿原酸还会被黄酮、皂苷等吸附力更强的成分置换（或替代）而脱离大孔树脂随水液流出。本专利技术正是利用这一特性，先用第一大孔树脂单元吸附饱和后使绿原酸流出，至水流出液中绿原酸的浓度≥上柱前水溶液中绿原酸的浓度后，再用水洗涤，即可基本洗尽大孔树脂上原已吸附的绿原酸成分，继续被吸附留存在大孔树脂上的则是与绿原酸相分离的大量黄酮、皂苷等欲除去的杂质性成分。将收集的通过第一大孔树脂吸附单元除杂后的含有绿原酸的水流出液和水洗液合并后，再按常规方法用第二大孔吸附树脂单元吸附，然后水洗涤进一步除杂后，再用醇解吸洗脱，洗脱液除去溶剂后，即得到高含量的绿原酸提取物。本专利技术上述方法中所述的大孔树脂吸附单元，可采用最为常用装填有大孔吸附树脂的吸附柱等形式。所述的第一和第二大孔树脂吸附单元，根据实际情况，可以采用相互独立的两个大孔树脂吸附单元（可分别由单根和/或多根树脂吸附柱组成），也可以采用由同一大孔树脂吸附单元以交替方式轮换操作，分别作为第一和第二树脂吸附单元使用来实现。对于采用相互独立设置的第一和第二大孔吸附树脂单元而言，还可以采用将其适当并连和/或串连等组合方式操作，以满足特定的处理规模和实际生产的需要。进一步，上述方法中所述用第一大孔树脂吸附单元吸附的所述含有绿原酸的水溶液的pH值为2~8；优选的用第一大孔树脂吸附单元吸附的所述含有绿原酸的水溶液pH值为2~4。对pH值的调节，除优选以工业生产中最为常用和易得的盐酸外，也可以使用包括磷酸等其它酸性成分，特别是药学中可允许和接受的酸性成分进行酸化调节。绿原酸为弱酸性成分，碱性条件下不稳定，故一般应在约中性或酸性条件下吸附或洗脱，因此，本专利技术第一大孔树脂吸附单元吸附和水洗脱的pH值为2~8，主要是保持绿原酸稳定，由于绿原酸在酸性条件下更易被吸附且树脂吸附容量更大，故优选树脂吸附的pH值为2~4，第二大孔树脂吸附单元水洗脱的pH值也优选为2~4。30~95%的乙醇-水混合溶液均能洗脱完全绿原酸成分，但从降低生产成本考虑，优选的洗脱液乙醇浓度可为30~50%。实验显示，在本专利技术上述方法中第一和第二大孔树脂吸附单元中允许使用的大孔吸附树脂可有较多选择，例如，两大孔树脂吸附单元可分别独立地选自但并不限于HPD100、HPD300、D101、D100、NKA-2、NKA-9、S-8、LS-600、HZ806或AB-8等型号的大孔吸附树脂中的至少一种。实验结果表明，与目前常规方法相比，本专利技术上述方式的制备方法，能显著提高绿原酸提取物的含量。以下通过实施例的具体实施方式再对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。在不脱离本专利技术上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均应包括在本专利技术的范围内。具体实施方式实施例1川银花的水提取液（pH值约为5，绿原酸含量为2.5mg/ml），上第一HPD100大孔吸附树脂柱，收集水流出液，HPLC检测绿原酸的含量，至水流出液中绿原酸的含量为3.0mg/ml，停止上样，改用柱床体积2~6倍的水洗脱，收集水洗液，合并含有绿原酸的水流出液和水洗液，调节pH值2~4，再上第二HPD100大孔吸附树脂柱，用pH值2~4酸水洗涤后，再用乙醇体积含量为30~50%的乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，除去溶剂，干燥，得到所述的绿原酸提取物。实施例2山银花的水提取液（调pH值为2，绿原酸含量为2.1mg/ml），上第一D101大孔吸附树脂柱，收集水流出液，HPLC检测绿原酸的含量，至水流出液中绿原酸的含量为2.4mg/ml，停止上样，改用柱床体积4倍的水洗脱，收集水洗液，合并含有绿原酸的水流出液和水洗液，调节pH值为4，再上第二HPD101大孔吸附树脂柱，用pH=4的酸水洗涤后，再用乙醇体积含量为70%的乙醇-水溶液洗脱，收集乙醇洗脱液，除去溶剂，干燥，得到所述的绿原酸提取物。实施例3金银花的水提取液（调pH值为3，绿原酸含本文档来自技高网...

【技术保护点】
绿原酸提取物的制备方法，其特征是使含有绿原酸的水溶液用第一大孔树脂吸附单元进行吸附分离，至流出水溶液中绿原酸的浓度≥上柱前水溶液中绿原酸的浓度后，用pH值2~8的水洗涤，收集、合并所述通过第一大孔树脂吸附单元后流出的含有绿原酸的水流出液和水洗液并调节pH值2~4后，用第二大孔树脂吸附单元进行吸附，然后用pH值2~4的水洗涤除杂后，再用乙醇体积含量为30~95%的乙醇‑水溶液洗脱，收集洗脱液后除去溶剂，得到绿原酸提取物。

【技术特征摘要】
1.绿原酸提取物的制备方法，其特征是使含有绿原酸的水溶液用第一大孔树脂吸附单元进行吸附分离，至流出水溶液中绿原酸的浓度≥上柱前水溶液中绿原酸的浓度后，用pH值2~8的水洗涤，收集、合并通过第一大孔树脂吸附单元后流出的含有绿原酸的水流出液和水洗液并调节pH值2~4后，用第二大孔树脂吸附单元进行吸附，然后用pH值2~4的水洗涤除杂后，再用乙醇体积含量为30~95%的乙醇-水溶液洗脱，收集洗脱液后除去溶剂，得到绿原酸提取物。2.如权利要求1所述的制备方法，其特征是用第一大孔树脂吸附单元进行吸附分离的所述含有绿原酸的水溶液，为含有绿原酸的...

【专利技术属性】
技术研发人员：易进海，刘云华，刘玉红，黄志芳，陈燕，杨昌林，
申请(专利权)人：四川省中医药科学院，
类型：发明
国别省市：四川;51