本发明专利技术公开了检测口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的单克隆抗体组合、ELISA试剂盒及金标纸层析试纸，该组合包括特异性单克隆抗体6D6anti和非特异性单克隆抗体2H10anti，在ELISA检测中以6D6anti作为包被抗体、以2H10anti作为酶标抗体，在胶体金试纸条中以6D6anti作为标记抗体，以2H10anti作为包被抗体可用于检测口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒，并具有高特异性、高灵敏度的优点，本发明专利技术将在口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的检测、疫苗生产、流行病学研究中发挥作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，涉及口蹄疫0型（0/GX/09-7)病毒的单克隆抗体组合、 分泌抗体的杂交瘤细胞株以及该抗体组合在检测口蹄疫0型（0/GX/09-7)病毒中的应用。
技术介绍
口蹄疫（Foot-and-mouthDisease，FMD)属一类传染病，俗名 "口疮"、"辟癀"，是 由口蹄疫病毒（Foot-and-mouthDiseaseVirus，FMDV)感染引起的偶蹄动物共患的急性、 热性、接触性传染病，其临床特征为口腔粘膜、蹄部和乳房皮肤发生水疱。口蹄疫病毒主要 侵害偶蹄兽，偶见于人和其它动物，其主要宿主包括猪、牛、羊等主要家畜和其它家养、野生 偶蹄动物等，易感动物多达70多种，最易感染的动物是牛、猪、骆驼、羊、鹿等，野猪、野牛等 野生动物也易感染此病。口蹄疫传播途径多、速度快，曾多次在世界范围内暴发流行，造成 巨大政治、经济损失。口蹄疫在亚洲、非洲和中东以及南美均有流行，在非流行区也有散发 病例。鉴于此，世界动物卫生组织（法语：〇fficeinternationaldes6pizooties，0IE，也 称"国际兽疫局0ΙΕ)将其列为A类传染病之首。目前，有三分之二的0ΙΕ成员国流行口蹄 疫，时刻威胁着无口蹄疫国家和地区的家畜安全和畜产品贸易。 口蹄疫发病后一般不致死，但会使病兽的口、蹄部出现大量水疱，高烧不退，使实 际畜产量锐减。另外，有个别口蹄疫病毒的变种可传染给人。因此，每次爆发后只能屠宰和 集体焚毁染病牲畜以绝后患。由于口蹄疫传播迅速、难于防治、补救措施少，被称为畜牧业 的"头号杀手"。我国对口蹄疫的预防主要通过疫苗注射接种，发生口蹄疫的则捕杀。 口蹄疫病毒（FMDV)是偶蹄类动物高度传染性疾病（口蹄疫）的病原，属于微核糖 核酸（小RNA)病毒科（Picornaviridae) 口蹄疫病毒属（Aphthovirus)，其最大颗粒直径为 23纳米，最小颗粒直径为7-8纳米，在病毒的中心为一条单链的正链RNA，由大约8000个碱 基组成，是感染和遗传的基础，周围包裹着的蛋白质决定了病毒的抗原性、免疫性和血清学 反应能力，病毒外壳为对称的20面体。 目前，口蹄疫病毒在全世界主要有0、六、(：、3六1'1、3六了2、3六了3(即南非口蹄疫病毒1、 2、3型）和Asial(亚洲1型）7个血清型，以及65个以上亚型。各型之间几乎没有免疫保 护力，感染了一型口蹄疫的动物仍可感染另一型口蹄疫病毒而发病，因此常常用多价疫苗 来降低患口蹄疫的风险。0型口蹄疫为全世界流行最广的一个血清型，我国流行的口蹄疫主 要为0、A、C三型及ZB型（云南保山型）。口蹄疫0型包含多种毒株：0/GX/09-7、0/Mya98/ XJ/2010、0/Mya98/BY/2010、0/JMS/2000 等。其中，口蹄疫 0 型（0/GX/09-7)病毒是由中国 兽医药品监察所提供，属于Cathay拓扑型新猪毒，该毒株株对乳鼠的适应性较好，毒力较 强；在BHK-21细胞上适应性好，遗传稳定；对猪毒力较强；毒株具有较广的抗原谱；1毫升 抗原表达量可达3微克以上，每毫升TCID5。可达10 7·5以上。目前，口蹄疫灭活疫苗是预防该病发生的主要有效手段，主要通过将口蹄疫病毒 体外培养后、灭活，然后与乳化剂混合制成免疫疫苗。FMDV的免疫是依赖T细胞的B细胞应答，疫苗接种主要诱导中和抗体的产生。疫 苗接种是特异性预防FMDV的可靠和有效手段，安全有效的疫苗是成功预防、控制乃至最终 消灭FMDV的先决条件。FMDV弱毒疫苗和灭活疫苗等常规疫苗都具有良好的免疫原性，在 预防和控制FMDV的过程中发挥着重要作用。随着分子生物学技术的飞速发展，FMDV基因 工程疫苗如亚单位疫苗、可饲疫苗、合成肽疫苗、蛋白质载体疫苗、基因缺失疫苗、活载体疫 苗、核酸疫苗等不断涌现。目前，常见的是口蹄疫多种毒株制备的多价疫苗，如口蹄疫〇型 (0/GX/09-7)和口蹄疫0型（0/Mya98/BY/2010)混合制备成的双组份疫苗。疫苗生产企业 目前常采用蔗糖密度梯度离心法测量口蹄疫病毒的含量，但是无法对多组份疫苗的某种毒 株进行单独定量。 目前，对口蹄疫的检测和诊断，主要基于临床判断以及PCR分子检测。PCR是一个 高灵敏的方法，但特异性存在不足，对口蹄疫的确诊还需要配合核酸测序。因此，这个方法 成本高、操作复杂、对人员的要求也高。 基于抗原抗体的免疫学检测，因操作简单、灵敏度高、特异性强、仪器设备便宜等 优点已经被广泛使用在临床检测上。目前，市场上偶见能够检测口蹄疫抗原的酶联免疫 检测试剂盒，但是大都采用了多克隆抗体制成，比如中国农业科学院兰州兽医研究所开 发、生产的0型口蹄疫146S抗原定量ELISA检测试剂盒，该试剂盒已经申报专利（专利 号CN103076451A)，该试剂盒采用了 0型口蹄疫的兔抗血清和豚鼠抗血清两种多克隆抗体 制成，但是无法区分0型的不同毒株，比如新疆株（0/Mya98/XJ/2010株）和广西株（0/ GX/09-7株），因而就无法对多组份0型疫苗中的每种0型口蹄疫146S抗原进行单独定量， 其主要的原因就在于多克隆抗体针对多种抗原表位，而不同的血清型尤其是同一血清型的 不同毒株之间可能会存在相同的抗原表位。因此采用多克隆抗体去特异性检测口蹄疫不同 的毒株是不可能成功的，尤其是同一血清型不同的毒株。 单克隆抗体因其针对的抗原位点单一，特异性较好，并且生产的重复性优于多克 隆抗体，目前在很多临床检测中被采用。国内偶见有制备口蹄疫单克隆抗体的研究，但尚不 足以应用到口蹄疫0型（0/GX/09-7)病毒的检测，获得特异性以及应用性好的单克隆抗体 及能够将其应用于口蹄疫〇型（0/GX/09-7)病毒的检测仍是研究人员的努力目标。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供用于检测口蹄疫0型（0/GX/09-7)病毒的单克隆抗体 组合。 本专利技术提供的用于检测口蹄疫0型（0/GX/09-7)病毒的单克隆抗体组合，包 括口蹄疫〇型（0/GX/09-7)病毒的特异性单克隆抗体6D6anti和非特异性单克隆抗体 2H10anti。其中： 所述特异性单克隆抗体6D6anti其重链可变区具有序列表中SEQIDNo:1的氨基 酸残基序列或将序列表中SEQIDNo:1的氨基酸残基序列经过一至十个氨基酸残基的取 代、缺失或添加且可与口蹄疫〇型（0/GX/09-7)病毒特异结合的多肽，轻链可变区具有序列 表中SEQIDNo: 2的氨基酸残基序列或将序列表中SEQIDNo: 2的氨基酸残基序列经过 一至十个氨基酸残基的取代、缺失或添加且可与口蹄疫〇型（0/GX/09-7)病毒特异结合的 多肽。序列表中的SEQIDNo:1由113个氨基酸残基组成，序列表中的SEQIDNo:2由99 个氨基酸残基组成。 编码单克隆抗体6D6anti的基因^D6anti)，其重链可变区编码基因具有序列表 中SEQIDNo:3的DNA序列或编码序列表中SEQIDNo:l的DNA序列或在高严谨条件下可 与序列表中SEQIDNo:3限定的DNA序列杂交的核苷酸序列，其轻链可变区编码基因具有 序列表中SEQIDNo:4的DNA序列或编码序列表中SEQIDNo:2的DNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种检测口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的单克隆抗体组合，包括口蹄疫O型(O/GX/09‑7)病毒的特异性单克隆抗体6D6anti和非特异性单克隆抗体2H10anti。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：郑金来，范秀丽，刘国英，吴园园，路荣，李蓉，张妍，郝金宝，陈光达，
申请(专利权)人：北京三联博悦生物技术有限公司，金宇保灵生物药品有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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