携带PD-L1阻断剂的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞制造技术

本发明专利技术涉及携带PD-L1阻断剂的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞。本发明专利技术还提供了一种利用嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞作为载体来分泌表达程序性死亡配体1(PD-L1)的阻断剂的方法，以提高嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞的抗肿瘤作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于免疫治疗领域，更具体地，本专利技术设及携带PD-L1阻断剂的嵌合抗原 受体修饰的免疫效应细胞。
技术介绍
免疫效应细胞（如T淋己细胞）在肿瘤免疫应答中的作用日益受到重视。目前， 基于T淋己细胞的过继性免疫治疗在部分肿瘤中取得了一定的效果，并且该种免疫治疗方 法可W克服抗体治疗的缺陷，但在大多数肿瘤的疗效仍不能令人满意。近年来，根据CTL对 祀细胞的识别特异性依赖于T淋己细胞受体灯CellReceptor,TCR)的发现，将针对肿瘤 细胞相关抗原的抗体的scFv与T淋己细胞受体的CD3ζ或FcεRI丫等胞内信号激活基序 融合成嵌合抗原受体烟limericantigenreceiptor,CAR),并将其通过如慢病毒感染等方 式基因修饰在T淋己细胞表面。运种CART淋己细胞能够W主要组织相容性复合物（Major HistocompatibilityComplex,MHC)非限制性方式选择性地将T淋己细胞定向到肿瘤细胞 并特异性地杀伤肿瘤。 嵌合抗原受体包括胞外结合区，跨膜区和胞内信号区。通常胞外区包含能够识别 肿瘤相关抗原的scFv，跨膜区采用CD8，CD28等分子的跨膜区，胞内信号区采用免疫受体酪 氨酸活化基序（ITAM)CD3ζ或化εRI丫及共刺激信号分子CD28、CD27、CD137、CD134等的 胞内信号区。 胞内信号区仅包含ΙΤΑΜ的为第一代CARΤ淋己细胞，其中嵌合抗原受体各部分按 如下形式连接：scFv-TM-ITAM。该种CART可W激发抗肿瘤的细胞毒性效应，但是细胞因子 分泌比较少，并且在体内不能激发持久的抗肿瘤效应。 随后发展的第二代CART淋己细胞加入了CD28或CD137(又名4-1BB)的胞内 信号区，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接：SCFV-TM-CD28-ITAM或scFv-TM-/ CD137-ITAM。胞内信号区发生的B7/CD28或4-1B化/CD137共刺激作用引起T淋己细胞的 持续增殖，并能够提高T淋己细胞分泌IL-2和IFN- 丫等细胞因子的水平，同时提高CART 在体内的存活周期和抗肿瘤效果。 近些年发展的第Ξ代CART淋己细胞，其中嵌合抗原受体各部分按如下形式连接： scFv-TM-CD28-CD137-ITAM或scFv-TM-CD28-CD134-ITAM，进一步提高了CART在体内的存 活周期和其抗肿瘤效果。 尽管免疫效应细胞在肿瘤免疫治疗中具有诱人的前景，但是其在实体瘤中的疗效 仍不显著，免疫效应细胞在肿瘤组织内的存活率较差、活性不高。因此，本领域仍然需要进 行进一步的研究，W期进一步提高免疫效应细胞对于肿瘤免疫治疗的疗效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供携带PD-L1阻断剂的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞。 在本专利技术的第一方面，提供一种嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞，它携带或表 达PD-Ll(程序性死亡配体1)阻断剂度locker)。 在一个优选例中，所述的PD-L1阻断剂包括（但不限于）：可溶性PD-l(sPD-l); 可溶性PD-1与hIgG4el-Fc的C册结构域的融合肤； 可溶性PD-1与hIgG4el-Fc的融合肤；或 特异性抗PD-L1抗体。 在另一优选例中，所述的可溶性PD-1包括：信号肤和胞外区；较佳地，所述的信 号肤是如SEQIDNO: 1所示的核巧酸序列编码而成的；较佳地，所述的胞外区是如SEQID N0:2所示的核巧酸序列编码而成的。 在另一优选例中，所述的hIgG4el-Fc的C册结构域是如SEQIDN0:2所示的核巧 酸序列编码而成的；和/或 所述的hIgG4el-Fc的序列是第288位由Ser突变为Pro的。 在另一优选例中，所述的嵌合抗原受体包括：胞外抗原结合区，跨膜区和胞内信号 区，其中所述胞外抗原结合区是特异性结合肿瘤高表达的抗原的抗体。 在另一优选例中，所述的胞内信号区包括（但不限于）：CD3C，FceRI丫，CD27， CD28,4-1BB(CD137)，CD134,CD40的胞内信号区序列或Myd88,或其组合。 在另一优选例中，所述的跨膜区包括（但不限于）：CD8(如CD8α)跨膜区，CD28 跨膜区。 在另一优选例中，所述的胞外抗原结合区和跨膜区之间，还包括较链区；较佳地， 该较链区包括：CD8(如CD8α)较链区。[002引在另一优选例中，所述的肿瘤高表达的抗原包括（但不限于）：EGFR，GPC3,肥R2，E；pM2,ClaudinlS. 1，ClaudinlS. 2,Claudin6,GD2,lipCAM，mesothelin，CD19,CD20,ASGPR1， EGFRvIII，de4EGFR，CD19,CD33,IL13R，LMPl，PLACl，NY-ESO-1，MAGE4,MUCl，MUC16,LeY， CEA，CAIX，CD123。 在另一优选例中，所述的特异性结合肿瘤高表达的抗原的抗体是：单链抗体或结 构域抗体。 在另一优选例中，所述的免疫效应细胞包括：Τ淋己细胞，NK细胞或NKT细胞，Treg 细胞。在本专利技术的另一方面，提供一种核酸构建物，其编码用于修饰免疫效应细胞的融 合多肤，所述的核酸构建物包括顺序连接的：PD-L1阻断剂编码序列，胞外抗原结合区编码 序列，跨膜区和胞内信号区编码序列；其中所述胞外抗原结合区是特异性结合肿瘤高表达 的抗原的抗体。 在一个优选例中，所述的PD-L1阻断剂编码序列和胞外抗原结合区编码序列之 间，W连接肤编码序列连接；和/或。 所述的PD-L1阻断剂编码序列和胞外抗原结合区编码序列之间，还包括核糖体跳 跃序列（F2A)。 在另一优选例中，所述的连接肤是（GlyGlyGlyGlySe;r)3。 在本专利技术的另一方面，提供一种表达载体，其包含编码所述的核酸构建物。 在本专利技术的另一方面，提供一种病毒，所述的病毒包含所述的表达载体。 在本专利技术的另一方面，提供所述的核酸构建物、或包含该核酸构建物的表达载体 或病毒的用途，用于制备祀向肿瘤的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞。 在一个优选例中，所述的免疫效应细胞是表达PD-1的免疫效应细胞。 在本专利技术的另一方面，提供所述的嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞的用途，用 于制备抑制肿瘤的药物组合物。 在本专利技术的另一方面，提供一种用于抑制肿瘤的药物组合物，其包括：所述的嵌合 受体修饰的免疫效应细胞。 在本专利技术的另一方面，提供PD-L1阻断剂的用途，用于制备嵌合抗原受体修饰的 免疫效应细胞，增加免疫效应细胞的抗肿瘤作用。 在一个优选例中，所述的PD-L1阻断剂包括（但不限于）：可溶性PD-1;[003引可溶性PD-1与hIgG4el-Fc的C册结构域的融合肤； 特异性抗PD-L1抗体。[00川在另一优选例中，所述的肿瘤是表达（或高表达）PD-L1的肿瘤。 在本专利技术的另一方面，提供一种制备嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞的方法， 所述的方法包括：将所述的核酸构建物转入免疫效应细胞中。 本专利技术的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见 的。【附图说明】图1、人源可溶性PD-1 (sPD-1)、sPD-1-C册、sPD-1-Fc融合蛋白示意图。 图2、sPD-1-Fc与M27-CAR本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种嵌合抗原受体修饰的免疫效应细胞，其携带PD‑L1阻断剂。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李宗海，潘泽雁，石志敏，宋波，王鹏，
申请(专利权)人：科济生物医药上海有限公司，上海市肿瘤研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31