一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙有关物质的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，并以所述标准品溶液进行系统适用性试验，检定检测系统；(2)供试品溶液和对照品溶液的制备；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量；(4)计算待测样品中各杂质的含量。

【技术实现步骤摘要】
一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙有关物质的方法
本专利技术涉及醋酸阿比特龙及中间体有关物质的分析方法，特别是一种醋酸阿比特龙有关物质的高效液相色谱梯度法测定方法，属于药物合成分析领域。
技术介绍
醋酸阿比特龙是一种CYP17抑制剂，临床适用于与泼尼松联用为治疗既往接受含多烯紫杉醇化疗转移去势难治性前列腺癌患者。分子式为C26H33NO2，分子量为391.55，化学名称为(3β)-17-(3-吡啶基)-雄甾-5,16-二烯-3-醇醋酸酯。醋酸阿比特龙主要杂质有6种，其在醋酸阿比特龙合成过程中生成，在原料和制剂储藏过程中也主要产生阿比特龙和阿比特龙环氧化物杂质，而阿比特龙和阿比特龙环氧化物两种杂质之间结构和极性相似，用一般的方法难于完全分离，本法通过系列的科学试验采用普通的C18柱和常规的试剂快速准确地实现了醋酸阿比特龙有关物质的测定，特别是能使阿比特龙和阿比特龙环氧化物完全分离，从而实现了醋酸阿比特龙原料、中间体及制剂的杂质的控制，保证了醋酸阿比特龙原料及制剂的质量可控，具有现实的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙、醋酸阿比特龙粗品和醋酸阿比特龙制剂有关物质的方法。本专利技术的高效液相色谱梯度法不仅可对杂质，如酮类杂质、乙酰化阿比特龙、消除产物和双甾体杂质进行准确测定，还可对阿比特龙和阿比特龙环氧化物等杂质进行准确测定。本专利技术的技术方案为：一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，检定检测系统；色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合物为流动相A，梯度洗脱，柱温为30～40℃，优选40℃，流速为1.1～1.3ml/min，优选1.2ml/min，检测波长为254nm；标准品溶液的制备：分别取杂质酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质及醋酸阿比特龙对照品，精密称定，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中分别含酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质各0.01mg及醋酸阿比特龙1mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至醋酸阿比特龙主峰与相邻杂质峰及杂质与杂质峰的分离度应大于1.5，理论板数按醋酸阿比特龙计算应不低于20000；(2)供试品溶液和对照品溶液的制备取醋酸阿比特龙待测样品，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取醋酸阿比特龙对照品，加溶剂[甲醇-乙腈(体积比为50:50)]制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱，记录色谱图至约醋酸阿比特龙主峰保留时间的2.5倍，按外标法以对照品溶液主峰面积计算，供试品溶液中酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质不得过0.1％，总杂质不得过1.0％；(4)计算待测样品中各杂质的含量。进一步地，所述杂质中酮类的结构式为阿比特龙环氧化物的结构式为消除产物的结构式为双甾体杂质的结构式为进一步地，步骤(1)所述梯度洗脱中，流动相A比例的变化范围为于0～30分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从100％变化为20％，流动相B的比例从0％变化为80％，于30～40分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从20％变化为0％，流动相B的比例从80％变化为100％，于40～45分钟，等度洗脱，流动相A的比例保持0％不变，流动相B的比例保持100％不变，于45～46分钟，线性梯度洗脱，流动相A的比例从0％变化为100％，流动相B的比例从100％变化为0％，于46至52分钟，流动相A和B回到初始比例，色谱柱重新平衡。进一步地，步骤(1)所述的流动相B为甲醇和乙腈的混合物，甲醇与乙腈的比例为体积比10～40∶90～60。进一步地，步骤(1)所述流动相A的缓冲液与流动相B的比例为体积比50～70∶50～30。其中，所述缓冲液由水、磷酸氢二钾、磷酸氢二钠、磷酸氢二铵、醋酸铵、碳酸氢铵、柠檬酸钠、甲酸铵中的一种或几种组成，浓度为0.005mol/L～0.1mol/L。本专利技术所述醋酸阿比特龙待测样品包括醋酸阿比特龙粗品、醋酸阿比特龙原料、醋酸阿比特龙片剂和醋酸阿比特龙片加速样品。本专利技术能有效地测定醋酸阿比特龙待测样品中的有关物质，特别是分解产物阿比特龙和阿比特龙环氧化物，方法简单快速，分析灵敏度好，重复性和重现性良好。结果准确可靠，可用于醋酸阿比特龙及含有醋酸阿比特龙药物的质量控制，具有现实意义。附图说明图1是醋酸阿比特龙与杂质：酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质的分离图。其中，1为酮类，2为阿比特龙，3为阿比特龙环氧化物，4为醋酸阿比特龙，5为消除产物，6为双甾体杂质。图2是醋酸阿比特龙粗品供试品溶液图的色谱图(批号：20120801)。图3是醋酸阿比特龙原料供试品溶液图的色谱图(批号：20130301)。图4是醋酸阿比特龙片剂加速6个月供试品溶液图的色谱图(批号：20130601)。具体实施方式以下实施例中使用的材料和试剂，除特殊说明，均为普通市售。仪器：Agilent1260系列高效液相色谱仪试剂：醋酸铵(分析纯)，甲醇(色谱纯，Merk公司)，乙腈(色谱纯，Merk公司)色谱柱：沃特斯XBridgeShieldRPC18柱(150×4.6mm，5μm)对照品的来源醋酸阿比特龙：自制，纯度：99.5％，批号：20120601，制备方法：取醋酸阿比特龙原料经乙醇-水重结晶，干燥，即得。阿比特龙：自制，纯度：98.9％，批号：20120611，制备方法：参考文献MichaelJarman,S.ElaineBarrie,andJoseM.Llera.The16,17-DoubleBondIsNeededforIrreversibleInhibitionofHumanCytochromeP45017αbyAbiraterone(17-(3-Pyridyl)androsta-5,16-dien-3β-ol)andRelatedSteroidalInhibitors.J.Med.Chem.1998,41,5375-5381.制得。阿比特龙环氧化物：自制，纯度：99.3％，批号：20120607，制备方法：参考文献MichaelJarman,S.ElaineBarrie,andJoseM.Llera.The16,17-DoubleBondIsNeededforIrreversibleInhibitionofHumanCytochromeP45017αbyAbiraterone(17-(3-Pyridyl)androsta-5,16-dien-3β-ol)andRelatedSteroidalInhibitors.J.Med.Chem.1998,41,5375-5381.制得。消除产物：自制，纯度：98.8本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，检定检测系统；色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合物为流动相A，梯度洗脱，柱温为30～40℃，流速为1.1～1.3ml/min，检测波长为254nm；标准品溶液的制备：分别取杂质酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质及醋酸阿比特龙对照品，精密称定，加体积比为50:50的甲醇‑乙腈溶剂制成每1ml中分别含酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质各0.01mg及醋酸阿比特龙1mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至醋酸阿比特龙主峰与相邻杂质峰及杂质与杂质峰的分离度应大于1.5，理论板数按醋酸阿比特龙计算应不低于20000；(2)供试品溶液和对照品溶液的制备取醋酸阿比特龙待测样品，加体积比为50:50的甲醇‑乙腈溶剂制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取醋酸阿比特龙对照品，加体积比为50:50的甲醇‑乙腈溶剂制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的色谱条件下进行高效液相色谱，记录色谱图至醋酸阿比特龙主峰保留时间的2.5倍，按外标法以对照品溶液主峰面积计算，供试品溶液中酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质不得过0.1％，总杂质不得过1.0％；(4)计算待测样品中各杂质的含量。...

【技术特征摘要】
1.一种高效液相色谱梯度法测定醋酸阿比特龙待测样品中有关物质的方法，其特征在于，所述待测样品为醋酸阿比特龙原料、中间体及制剂的杂质，检测方法包括以下步骤：(1)制备标准品溶液，以所述标准品溶液在下述色谱条件下进行系统适用性试验，检定检测系统；色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以有机相为流动相B，以缓冲液和流动相B的混合物为流动相A，梯度洗脱，柱温为30～40℃，流速为1.1～1.3ml/min，检测波长为254nm；标准品溶液的制备：分别取杂质酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物、双甾体杂质及醋酸阿比特龙对照品，精密称定，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中分别含酮类、阿比特龙、阿比特龙环氧化物、消除产物和双甾体杂质各0.01mg及醋酸阿比特龙1mg的混合溶液；精密量取10μl所述混合溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，校定检测系统至醋酸阿比特龙主峰与相邻杂质峰及杂质与杂质峰的分离度应大于1.5，理论板数按醋酸阿比特龙计算应不低于20000；(2)供试品溶液和对照品溶液的制备取醋酸阿比特龙待测样品，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液；取醋酸阿比特龙对照品，加体积比为50:50的甲醇-乙腈溶剂制成每1ml中含0.01mg的溶液，作为对照品溶液；(3)通过高效液相色谱测定待测样品中有关物质的含量以对照品溶液注入经上述步骤(1)校定后的液相色谱仪，调节检测灵敏度，再将供试品溶液注入液相色谱仪，在步骤(1)所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘小柔，朱丹，吴筱昆，孔涛涛，刘碧秀，彭江华，王彦青，杨经安，
申请(专利权)人：深圳海王药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44