本文中提供了当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物。优选的化合物在约-90mV的膜电位以10μM或更小的IC50抑制T-型Ca2+通道活性。优选的化合物表现出10∶1或更小的与在约-30mV至-60mV抑制T-型Ca2+通道活性相比在约-90mV抑制T-型Ca2+通道活性的选择性。还提供了鉴定当细胞膜电位是约-90mV时抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的化合物的方法、以及通过这样的方法鉴定出的化合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】用于治疗癌症的T-型巧通道抑制剂 巧关申请的香叉引用 本申请要求2013年1月10日提交的美国临时申请号61/751，038的权益，其整个 公开内容通过引用并入本文。
本公开内容设及治疗上有用的化合物、治疗方法和鉴定治疗上有用的化合物的方 法。
技术介绍
在细胞周期的不同点的Ca2+流入对于进展而言是关键性的，尽管化2+借W起作用 的精确角色和途径仍然是主要难W捉摸的。最近，已经可能整合形成一条运样的途径I'2,即 Ca2+流入在实现穿过G1/S转变或限制点（细胞周期进展中的一个生长因子驱动的单向步 骤）中的作用。G1/S转变的作用是整合来自许多基础细胞输入的信息，包括生长因子信号 传递和营养物可用性。该限制点是对于癌症表型而言是中屯、性的，因为在G1至S转变中许 多关键蛋白中的遗传变化或表现遗传变化可能允许细胞独立于促有丝分裂刺激而增生3。 大量努力已经聚焦于祀向细胞周期激酶来抑制细胞周期中的G1/S和其它转变点的调节异 常3。但是，Ca2+流入是G1/S限制点之后的、生长因子驱动的转变的途径的一个中屯、元件， 没有研究能够鉴定对该事件的获得性独立一一可能因为与从限制释放成为一体的Ca2+依 赖性的过程的数目。 巧是许多细胞过程的关键性调节剂，且因此，它的流入受到严格控制。W非常一般 的方式，该调节可W是电调节或生化调节。电控制是运些要描述的调节机制中的第一种， 并且在化dgkin和化xl巧的先驱工作中进行了描述化uxl巧和化dgkin，J.化ysiol. 1 : 424-544(1952)。在该调节形式中，Ca2+通道被打开W接纳化2+，并随后响应于膜电位的变化 而关闭。该"口控"的细节可W被生化事件（诸如蛋白激酶A的活化4或巧调蛋白5)改变， 但是主要的调节事件是膜电位的改变，最特别是动作电位的改变。 细胞内巧调节是调节细胞周期转变和细胞调亡的多个信号传递途径的重要元件。 癌细胞能够进展穿过细胞周期和绕过正常的巧介导的检验点，从而指示癌细胞已经发展出 替代机制来调节细胞内巧。癌细胞表达T-型巧通道的新证据提示，运些通道在检验点非依 赖性的细胞周期进展和细胞增生中起作用（TaylorJT等人，WorldJ.Gastroenterol. 14: 4984-4991,2008)〇 浓度高于细胞外部的带正电荷的离子（诸如钢、钟和巧离子）在细胞内空间中的 存在会建立膜电位。细胞中的膜电位通常是在-40mV至-80mV的范围内。在电可兴奋的细 胞诸如神经元中，主要存在2个膜电位水平：静息（非激活的）电位和较高的阔电位。在神 经元中，静息电位是约-70毫伏（mV)，且阔电位是约-55mV。神经元的突触刺激会造成膜电 位除极化（升高）或超极化（下降）。动作电位是细胞的电学膜电位的短暂"波峰"。当足 够的除极化积累W使膜电位达到阔值时，触发动作电位。 尽管所有细胞都具有膜电位，大多数细胞不具有分子机制或细胞几何形状来产生 动作电位。尽管如此，所有细胞使用细胞溶质Ca2+的增加来调节过程诸如分泌或细胞分裂。 认为运些细胞通过内部ca2ie存库（在所谓的电容性的化2+输入中6)的消耗而启动化2+ 流入。但是，该机制可能在细胞分裂过程中不起作用，且如果运样的话，它与癌症生物学或 治疗无关 7。已经引入关于电容途径的组分的参与的复杂模型来暗示它们参与调节对于细 胞分裂而言至关重要的必需Ca2+流入7,但是该途径在细胞分裂中的作用仍然不明。已经提 出许多离子通道作为Ca2+在其中穿过W实现G1/S转变的分子途径8,尽管尚未达成W下一 致意见：单个途径在细胞谱系（不仅仅是细胞系）中是占优势的。 已经积累了描述Ca2+通道在电可兴奋的细胞中的调节的证据。也有证据描绘了 Ca2+输入在电不可兴奋细胞中的调节，但是运不可能解释细胞分裂所需的化2+的输入和穿 过G1/S边界。然后，在癌细胞和干细胞中表达T-型Ca2+通道，但是其是电压口控的。因为 大多数类型的癌细胞和干细胞不具有被认为调节运样的电压口控通道所必需的动作电位， 关于运些通道的功能或调节知之甚少。
技术实现思路
阳010] 本公开内容提供了化合物，当细胞膜电位是约-90mV时，所述化合物抑制细胞中 的T-型Ca2+通道活性。优选的化合物在约-90mV的膜电位W10yM或更小的1C5。抑制T-型Ca2+通道活性。优选的化合物对于在约-90mV的膜电位抑制T-型化2+通道活性而言 也是选择性的，且表现出在约-90mV的T-型Ca2+通道活性抑制相对于在约-30至-60mV的 T-型Ca2+通道活性抑制为10 : 1或更小的选择性。运样的化合物可用于阻止细胞增生， 且可W阻止癌细胞和其它寶生性细胞的增生，同时几乎不表现出或不表现出神经元活性的 抑制。 本公开内容进一步提供了通过施用有效量的如上所述的化合物来抑制癌细胞的 增生的方法，当细胞膜电位是约-90mv时，所述化合物抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性。 所述癌细胞可W是任何癌细胞，诸如上皮癌细胞或癌干细胞。在某些实施方案中，施用的化 合物是米贝拉地尔或TH-1177。 本公开内容也提供了通过给需要癌症治疗的受试者施用有效量的如上所述的化 合物来治疗癌症的方法，当细胞膜电位是约-90mV时，所述化合物抑制细胞中的T-型Ca2+ 通道活性。所述癌症可W是任何癌症，诸如上皮癌。在某些实施方案中，施用的化合物是米 贝拉地尔或TH-1177。在另一个实施方案中，所述受试者是人。 本文中还公开了用于治疗癌症的药物组合物，其至少含有本文中公开的化合物。 本公开内容进一步提供了鉴定化合物的方法，当细胞膜电位是约-90mv时，所述 化合物抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性。运些方法包括，确定当将细胞膜电位保持在 约-90mV时化合物的抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性的能力。通过本领域已知的技术，诸 如膜片箱技术，可W将膜电位保持在约-90mV。例如，通过确定化合物的阻止生长因子刺激 的巧向细胞中的输入的能力，可W确定当细胞膜电位是约-90mV时化合物的抑制细胞中的 T-型Ca2+通道活性的能力。通过测量细胞内巧水平的增加，诸如通过使用巧敏感的巧光染 料，可W确定巧向细胞中的输入。 本公开内容也提供了一种用于鉴定化合物的方法，所述化合物用于抑制细胞周期 进展穿过Gl/S检查点、抑制细胞增生性疾病中的细胞增生、和/或增强福射和/或化学治 疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力。所述方法包括，当将细胞的第一细胞膜电位保持在 约-70mV至约-1lOmV范围内的电位时，确定所述化合物抑制细胞中的T-型Ca2+通道活性； 和，基于所述确定，鉴定应用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点、在细胞增生性疾病中 抑制细胞增生、和/或增强福射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力的化合 物。 在附图和下面的描述中阐述了本专利技术的一个或多个实施方案的细节。从所述描述 和附图W及从权利要求书会明白本专利技术的其它特征、目的和优点。【附图说明】 图1是将生长因子受体活化的Ca2+与导致穿过G1/S限制点的生化级联连接的途 径之一的示意图。 阳〇1引图2是生长因子调节的T-型Ca2+通道的活化的步骤的简图表示。[化21i是细胞 内的C本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种鉴定应用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点、抑制细胞增生性疾病中的细胞增生和/或增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力的化合物的方法，所述方法包括：确定当将细胞的第一细胞膜电位保持在约‑70mV至约‑110mV范围内的电位时，抑制细胞中的T‑型Ca2+通道活性的化合物；和基于所述确定，鉴定应用于抑制细胞周期进展穿过G1/S检查点、抑制细胞增生性疾病中的细胞增生和/或增强辐射和/或化学治疗剂在治疗细胞增生性疾病中的效力的化合物。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：劳埃德·S·格雷，蒂莫西·麦克唐纳，
申请(专利权)人：陶制药有限责任公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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