本发明专利技术公开了一种小分子化合物在制备抗肺癌药物中的应用；本发明专利技术通过药理药效学实验证明，该小分子化合物对人非小细胞肺癌细胞株A549细胞具有显著的抑制增殖、诱导凋亡等作用；实验结果表明该小分子化合物可以显著降低线粒体膜电位，并且有明显的caspase3/7活性。说明该小分子化合物是通过caspase-3依赖型线粒体途径来诱导A549细胞的凋亡。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术设及生物医药领域，具体设及一种新型小分子化合物在制备抗肺癌药物中 的应用。
技术介绍
恶性肿瘤已经成为严重威胁人类健康与生活质量的主要原因之一。肺癌是最常见 的恶性肿瘤之一，在全世界范围内肺癌的发病率和死亡率均呈上升趋势，尤其是在中国等 发展中国家。在我国，随着工业化速度加快、环境污染加重、人口老龄化加剧，肺癌的患病率 W及致死率日益加重。因此，寻找治疗肺癌的有效方法已经成为目前最为迫切的任务之一。 肺癌的治疗方法包括手术治疗、放射治疗、药物治疗等。目前肺癌的治疗已从最初 的手术治疗的单一手段发展到今天的手术切除、放射治疗和内科治疗为一体的综合治疗模 式。另外，80%的肺癌患者在发现时已属于晚期，大多患者仍W药物治疗为主。鉴于传统药 物严重的毒副作用W及耐药性等问题，研究开发新的高效、肿瘤特异性W及毒副作用小的 药物成为治疗肺癌的主攻方向之一。 近年来，随着分子生物学对生命和肿瘤研究的不断深入，针对特定生理过程和祀 点的分子祀向药物W其独特的疗效和远大的前景在肺癌治疗中引起了广泛关注。化学合成 的有机小分子是一种分子量小、容易进入细胞、可W与其中的蛋白质分子结合并影响蛋白 活性的一种化合物。在抗肿瘤药物的筛选中，活性化合物可被视为一种药物先导化合物，为 后续进行的结构修饰、药理学研究、药代动力学分析等奠定基础。除此之外，还可W进一步 寻找活性化合物的作用祀点及作用机制，从而为药物研发提供新的祀点。 细胞调亡是程序性细胞死亡的一种形式之一，是细胞一种生理性、主动性的细胞 "自杀行为"，是一个受到一系列相关基因严格调控的细胞死亡过程。调亡不会引起后续的 炎症等不良反应，因此已经成为研究抗癌药物的主要方式之一。不同的调亡信号在细胞中 引发不同的调亡信号转导通路。根据调亡信号的来源可W将细胞调亡信号转导通路分成两 条：外源性通路(死亡受体通路）和内源性通路(线粒体通路)。 线粒体是细胞调亡调控的活动中屯、。当受到细胞调亡信号刺激。线粒体释放细胞 色素C至细胞浆中。细胞色素C与细胞内存在的一种调亡细胞蛋白酶激活因子（Apoptosis ProteaseActivatingFactor-LApaf-l)结合，在dATP存在的条件下，通过半脫氨酸蛋白 酶募集域的作用，Apaf-1和化spase-9酶原结合。使化spase-9酶原活化，然后激活下游 的效应半脫氨酸蛋白酶如化spase-3、6,7等成员，从而启动细胞调亡。Caspase全称为含半脫氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（cystein^aspartate specificproteinase)。该家族是直接导致调亡细胞解体的蛋白酶系统，在细胞调亡机 制网络中居中屯、地位，是一组在细胞调亡过程中起着关键作用的酶。Caspase家族在诱 导细胞调亡的分子机制中起着关键作用，是多条调亡通路的汇聚点，是执行调亡的最终途 径。Caspass-3是迄今为止研究比较透彻的一个，它是主要的效应者分子。其中化spase-3 被认为是调亡的关键蛋白酶，一旦被激活，即发生下游的级联反应，使调亡不可避免，因而 Caspase-3被称为"死亡蛋白酶"。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供了；本专利技术 通过药理药效学实验证明，该小分子化合物对人非小细胞肺癌细胞株A549细胞具有显著 的抑制增殖、诱导调亡等作用。 本专利技术所述的小分子化合物如下： 8-hydrazin-1-yl]-3-methyl-7- (2-phen oxyethyl)-2, 3, 6, 7-tetr曰hy化o-lH-purine-2, 6-dione(贝勾自LifeChemicalsSmall MoleculesCollection公司）； 化学结构式如下：中文名称为：8-联氨-1-基]-3-甲基-7- (2-苯氧乙 基）-2, 3, 6, 7-四氨-1H-嚷岭-2, 6-二酬。 本专利技术所述小分子化合物在制备抗肺癌药物中的应用；其中肺癌细胞为非小细胞 肺癌细胞株A549细胞。 M1T法检测该小分子化合物能有效抑制A549细胞的生长，抑制细胞存活率ICw浓 度为 4. 945 ±0.402yM。 化echst 33342染色结果显示，该小分子化合物可W使A549细胞的细胞核发生明 显的核皱缩现象。 流式细胞术结果显示，该小分子化合物对A549细胞具有明显的诱导调亡作用。 用JC-1染色检测线粒体膜电位的结果显示，该小分子化合物可W使A549细胞的 线粒体膜电位显著降低，即通过线粒体途径诱导A549细胞的调亡。 Caspase水平分析结果显示，该小分子化合物可W显著增强A549细胞内化spase 3/7的活性，即该小分子化合物通过caspase 3/7依赖型途径诱导A549细胞的调亡。【附图说明】 图1为M1T法检测该小分子化合物对A549细胞的生长抑制作用结果； 图2为流式细胞技术检测DMS0对A549细胞调亡的影响结果； 图3为流式细胞技术检测2. 5 y M的该小分子化合物对A549细胞调亡的影响结果； 图4为流式细胞技术检测5 y M的该小分子化合物对A549细胞调亡的影响结果； 图5为流式细胞技术检测10 y M的该小分子化合物对A549细胞调亡的影响结果； 图6为线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1)检测该小分子化合物诱导A549细胞线粒体膜 电位的变化情况（*冲<0. 01)结果； 图7为化spase-Glo? 3/7 Assay (Promega)检测该小分子化合物处理的A549细胞中Caspase 3/7活性的变化情况结果（*冲<0. 01)。【具体实施方式】 下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明，但本专利技术的保护范围不局限于所述 内容，实施例中方法如无特殊说明均采用常规方法，使用试如无特殊说明，均为常规市售试 剂或采用常规方法配置的试剂。 实施例1 :通过M1T法检测该小分子化合物对A549细胞存活率的影响，实验步骤 如下： (1) 取膜酶消化对数期细胞，用RPMI-1640培养液调整细胞悬液浓度为5 X 104cell/ml， 加入96孔细胞培养板中，每孔加入100 y1细胞悬液，然后放入37°C的细胞培养箱，培养箱 的C〇2浓度为5%，培养2地； (2) 该小分子化合物的原溶液浓度为10ml,用DMS0进行浓度梯度稀释，浓度梯度 为10yM、5yM、2. 5yM、1.25yM，每个梯度每孔加入lyl，设S个复孔，补充100 RPMI-1640培养液；同时设置加入1y1 0. 5%DMS0为对照组，继续放入培当前第1页1 2 本文档来自技高网...
【技术保护点】
结构式为式I所示的小分子化合物在制备抗肺癌药物中的应用，式Ⅰ： 8‑[(E)‑2‑[(4‑溴苯基)亚甲基]联氨‑1‑基]‑3‑甲基‑7‑(2‑苯氧乙基)‑2,3,6,7‑四氢‑1H‑嘌呤‑2,6‑二酮。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：冯阳，靳文玲，赵婷，潘卉，李海舟，赵扬，
申请(专利权)人：昆明理工大学，
类型：发明
国别省市：云南;53
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